Rld регулятор: РЛД-5 Регулятор давления купить на сайте «Судосфера»

Содержание

Системные принадлежности Mohlenhoff

 
Артикул Наименование товара Цена в рублях
Регулировка
AR 2010K2 E-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с дистанционным датчиком, ES 100, 220V 4 128,00 шт
AR 4010K2 E-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с дистанционным датчиком, ES 1000, 24V 4 128,00 шт
AR 6052 KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий цоколь AS 1000, 24V, Цвет Metallic bronze 10 320,0 шт
AR 4010C2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» с цифровым таймером, включающий цоколь AS 1000, 24V 9 072,00 шт.
AR 4010K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 24V 2 640,00 шт.
AR 2010K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для WSK, включающий цоколь AS 1000, 230V 2 640,00 шт.
AR 4010S2-S
Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» для WSK, включающий цоколь AS 1000, 24V
2 016,00 шт.
ALM 42 Электронный коммутатор, 24V 2 160,00 шт.
ALM 22 Электронный коммутатор, макс. 10 приводов «Альфа», 230V 1 584,00 шт.
DST 1000 Наружный регулятор частоты вращения устройства GS 1000 3 024,00 шт.
VUD 15 Термостатический вентиль Ду15 1 440,00 шт.
RLD 15 Вентиль запорный в обратку Ду15 888,96 шт.
RLD 15 (16 bar) Вентиль запорный в обратку ДУ15, для рабочего давления 16 бар 1 056,00 шт.
VUD 15 (16 bar) Термостатический вентиль ДУ15, для рабочего давления 16 бар 1 333,44 шт.
AR HK 5010K-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий системный цоколь AS1000, 0-10V 5 520,00 шт.
AR HK 5010K Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», 0-10V, без системного цоколя AS 1000 4 896,00 шт
AR 5010KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, работает с GS1000 6 960,00 шт.
AR 5053KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic platin 10 320,0 шт.
AR 5052KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic bronze 10 320,0 шт.
AR 5051KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic champagner 10 320,00 шт.
DS 1000 Цифровой таймер 13 584,0 шт.
FST 2 Термостат дистанционный для VUD 15, капиллярная трубка 2 м. 5 612,16 шт.
FST 5 Термостат дистанционный для VUD 15, капиллярная трубка 5 м. 7 001,76 шт.
HR Ручной регулятор для нижней части вентильного терморегулятора проходной формы DN 15 (1.5″) VUD 15 333,6 шт.
AS 1000 Цоколь для альфа-регулятора 252 шт.
AR 2010KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для GSK с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, 230V 6 288,00 шт.
AR 2010S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230V 2 016,00 шт.
AR 2010CD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» для GSK с таймером, включающий цоколь AS 1000, 230V 13 392,0
шт.
AR 2010C2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» с цифровым таймером, включающий цоколь AS 1000, 230V 9 072,00 шт.
AR 2010KD Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для GSK с задатчиком скорости вращения, включающий только ALM 22, без AS 1000 6 048,00 шт
AR 4051K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» , включающий цоколь AS 1000, 24V, цвет цвет шампанское 4 176,00 шт
AR 2052S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230 V, цвет Metallic bronze 2 976,00 шт
AR 2053S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230 V, цвет Metallic platin 2 976,00 шт
AR 2025S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет чёрный RAL 9001 2 592,00 шт
AR 4053K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 24V, цвет Metallic platin 3 648,00 шт
AR 6053KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» для QSK EC с задатчиком скорости вращения, включающий цоколь AS 1000, 24V, Цвет Metallic platin 10 320,0 шт
AR 5010K-S Термостатический регулятор «Альфа» , включающий цоколь AS 1000, > 0-10V 4 896,00 шт
FLX -01 Два шланга с металлической оплеткой для подключения воды, подводка 1/2″. 3 863,04 комп.
AR 2011S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет офисный серый 2 016,00 шт
AR 2020S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет жёлтый 2 592,00 шт
AR 2021S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет зелёный 2 592,00 шт
AR 2022 S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет синий 2 592,00 шт
AR 2023S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет красный 2 592,00 шт
AR 2024S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет серый 2 592,00 шт
AR 2050S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет сине-чёрный 3 264,00 шт
AR 2051S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет Champagner 3 264,00 шт
AR 6010KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, работает с GS 2000 7 056,00 шт
AR 6051KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000,цвет Metallic champagner 10 320,0 шт
AR 2052K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 230V,цвет Metallic bronze 3 648,00 шт
Сервоприводы
AA 2004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L= 1m, NC 1 728,00 шт.
AA 4004-80-02 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L= 0.2m, NC 1 728,00 шт.
AA 2004-80-02 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L=0.2m, NC 1 728,00 шт.
AA 4004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NC 1 728,00 шт.
AA 2104-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NO 1 728,00 шт
AA 5004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 0-10 V пропорциональное регулирование, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m 3 936,00 шт
AA 4104-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NO 1 728,00 шт
Базы
AB 7001-6 EIB Термостатический регулятор Alpha-Basis 6-Zonen EIB 24 V 39 408,0 шт.
AB 7001-12 EIB Термостатический регулятор Alpha-Basis 12-Zonen EIB 24 V 57 840,0 шт.
AB 2000-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis 230 V, 6 зон 5 232,00 шт.
AB 2000-1 Термостатический регулятор Alpha-Basis 230 V, 1 зона 2 304,00 шт.
AB 4071-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis Funk 24 V, 6 зон 18 960,0 шт.
AB 4001-1 Термостатический регулятор Alpha-Basis 24 V, 1 зона 4 464,00 шт.
AB 4001-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis 24 V, 6 зон 6 864,00 шт.
AB 4071-12 Термостатический регулятор Alpha-Basis Funk 24 V, 12 зон 25 008,0 шт.
Модули
AB HK 4000 Модуль отопление-охлаждение 24 V 5 712,00 шт.
AB TM 1000 Таймер-модуль 9 216,00 шт.
AB PS 2000 Программный штекер, 230V 864 шт.
AB PL 2000 Модуль насоса, 230 V 4 272,00 шт.
AB AM 2000 Модуль привода, 230 V 2 928,00 шт.
AB RM 2000 Модуль термостата, 230 V 2 592,00 шт.
AB PL 4000 Модуль насоса, 24 V 4 272,00 шт.
AB AM 4000 Модуль привода, 24 V 2 928,00 шт.
AB RM 4000 Модуль термостата, 24 V 2 592,00 шт.
AB PS 4000 Программный штекер, 24V 864 шт.

Производитель:
Мohlenhoff, Германия

Осветитель Raylab Xenos LED RLD-200. Обзор

Новый светодиодный источник постоянного света для видео и фотосъемки представила компания RAYLAB. Осветитель Raylab Xenos LED RLD-200 постороен на базе мощного светодиода, который при потребляемых 200 Ваттах выдает световой поток 1600 лм.

Осветитель поставляется в цветной коробке с хорошо уложенным, защищенном от ударов комплектом.

В комплект входит осветитель, рефлектор, матовый конус для получения яркого равномерного света от светодиода, рассеиватель из ткани, сетевой провод с выключателем.

Сверху имеется рычаг для фиксации насадок.

На задней панели Райлаб имеется ручка для выставления света, индикатор питания, предохранитель и светорегулятор.

Матовое стекло-колпачок, прикрывающий светодиод нужен не только для защиты его от механических повреждений, но и, самое главное, для формирования равномерного светового потока с широким углом.

Осветитель имеет регулятор регулятор мощности с диапазоном 1 ступень экспозиции и шагом регулировки 0,2.

Осветитель устанавливается на стандартную стойку. Имеется отверстие для крепления зонта.

Световой рассеиватель одевается на рефлектор и может быть полезен при отсутствии софтбокса.

Сцена с установкой света на минимум.

Сцена со светом на максимуме.

Зонт удобно крепится в металлическом держателе и поджимается пружиной.

 

Технические характеристики

  • Потребляемая мощность — 200 Вт
  • Макс. освещенность — 16000 Lm при использовании конического рефлектора
  • Диапазон регулировки мощности: 1 ступень экспозиции с шагом 0,2 ступени.
  • Вентиляция — вентилятор
  • Цветовая температура: 5200K ± 3%
  • Крепление под зонт — есть, до 8мм
  • Крепление световых модификаторов — BOWENS
  • Температурный режим — -4 С до +40 С
  • Вес — 2 кг

 

Данная модель осветителя хорошо совмещается с широким спектром световых модификаторов с очень распространенным креплением BOWENS. Для видеосъемки Xenos LED RLD-200 хорошо использовать с софтбоксами, поскольку рассеиватель, идущий в комплекте имеет малую площадь и дает жесткий свет.

Осветитель подойдет и для фотографов, работающих с заморозкой жидкостей. Импульсный свет, дающий короткий импульс и пригодный для фотографирования, например, брызг воды, стоит недешево. Однако, для этих целей можно применить источник постоянного света, снимая на просвет. При этом на камере можно установить очень короткую выдержку.

 

Наша оценка:

+ мощный, экономичный осветитель с большим сроком службы;

— выключатель на проводе не очень удобен.

 

 

© Юрий Шурчков, 2015

 

Вот еще что…

Слышали ли вы об оптимизаторе нагрузки на электросеть CLUSTERWIN OEL-820?

Если еще не слышали, то зайдите на страницу этого прибора в нашем интернет-магазине. Почитайте статьи о нем в разделе обзоры.

Прибор решает серьезную проблему, которую, раньше, до его появления, невозможно было решить без значительных материальных затрат.

 

 

Обзор осветителя Raylab Xenos LED RLD-200

Системные принадлежности Mohlenhoff

Артикул Наименование товара Цена в рублях
Регулировка
AR 2010K2 E-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с дистанционным датчиком, ES 100, 220V 4 128,00 шт
AR 4010K2 E-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с дистанционным датчиком, ES 1000, 24V 4 128,00 шт
AR 6052 KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий цоколь AS 1000, 24V, Цвет Metallic bronze 10 320,00 шт
AR 4010C2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» с цифровым таймером, включающий цоколь AS 1000, 24V 9 072,00 шт.
AR 4010K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 24V 2 640,00 шт.
AR 2010K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для WSK, включающий цоколь AS 1000, 230V 2 640,00 шт.
AR 4010S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» для WSK, включающий цоколь AS 1000, 24V 2 016,00 шт.
ALM 42 Электронный коммутатор, 24V 2 160,00 шт.
ALM 22 Электронный коммутатор, макс. 10 приводов «Альфа», 230V 1 584,00 шт.
DST 1000 Наружный регулятор частоты вращения устройства GS 1000 3 024,00 шт.
VUD 15 Термостатический вентиль Ду15 1 440,00 шт.
RLD 15 Вентиль запорный в обратку Ду15 888,96 шт.
RLD 15 (16 bar) Вентиль запорный в обратку ДУ15, для рабочего давления 16 бар 1 056,00 шт.
VUD 15 (16 bar) Термостатический вентиль ДУ15, для рабочего давления 16 бар 1 333,44 шт.
AR HK 5010K-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий системный цоколь AS1000, 0-10V 5 520,00 шт.
AR HK 5010K Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», 0-10V, без системного цоколя AS 1000 4 896,00 шт
AR 5010KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, работает с GS1000 6 960,00 шт.
AR 5053KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic platin 10 320,00 шт.
AR 5052KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic bronze 10 320,00 шт.
AR 5051KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включают AS1000, работает с GS1000, цвет Metallic champagner 10 320,00 шт.
DS 1000 Цифровой таймер 13 584,00 шт.
FST 2 Термостат дистанционный для VUD 15, капиллярная трубка 2 м. 5 612,16 шт.
FST 5 Термостат дистанционный для VUD 15, капиллярная трубка 5 м. 7 001,76 шт.
HR Ручной регулятор для нижней части вентильного терморегулятора проходной формы DN 15 (1.5″) VUD 15 333,6 шт.
AS 1000 Цоколь для альфа-регулятора 252 шт.
AR 2010KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для GSK с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, 230V 6 288,00 шт.
AR 2010S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230V 2 016,00 шт.
AR 2010CD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» для GSK с таймером, включающий цоколь AS 1000, 230V 13 392,00 шт.
AR 2010C2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» с цифровым таймером, включающий цоколь AS 1000, 230V 9 072,00 шт.
AR 2010KD Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» для GSK с задатчиком скорости вращения, включающий только ALM 22, без AS 1000 6 048,00 шт
AR 4051K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт» , включающий цоколь AS 1000, 24V, цвет цвет шампанское 4 176,00 шт
AR 2052S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230 V, цвет Metallic bronze 2 976,00 шт
AR 2053S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230 V, цвет Metallic platin 2 976,00 шт
AR 2025S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт», включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет чёрный RAL 9001 2 592,00 шт
AR 4053K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 24V, цвет Metallic platin 3 648,00 шт
AR 6053KD-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Контроль» для QSK EC с задатчиком скорости вращения, включающий цоколь AS 1000, 24V, Цвет Metallic platin 10 320,00 шт
AR 5010K-S Термостатический регулятор «Альфа» , включающий цоколь AS 1000, > 0-10V 4 896,00 шт
FLX -01 Два шланга с металлической оплеткой для подключения воды, подводка 1/2″. 3 863,04 комп.
AR 2011S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет офисный серый 2 016,00 шт
AR 2020S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет жёлтый 2 592,00 шт
AR 2021S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет зелёный 2 592,00 шт
AR 2022 S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет синий 2 592,00 шт
AR 2023S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет красный 2 592,00 шт
AR 2024S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет серый 2 592,00 шт
AR 2050S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет сине-чёрный 3 264,00 шт
AR 2051S2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Стандарт» , включающий цоколь AS 1000, 230V, цвет Champagner 3 264,00 шт
AR 6010KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000, работает с GS 2000 7 056,00 шт
AR 6051KD-S Термостатический цифровой регулятор «Альфа» тип «Комфорт» с задатчиком скорости вращения, включающий AS 1000,цвет Metallic champagner 10 320,00 шт
AR 2052K2-S Термостатический регулятор «Альфа» тип «Комфорт», включающий цоколь AS 1000, 230V,цвет Metallic bronze 3 648,00 шт
Сервоприводы
AA 2004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L= 1m, NC 1 728,00 шт.
AA 4004-80-02 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L= 0.2m, NC 1 728,00 шт.
AA 2004-80-02 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA 80, L=0.2m, NC 1 728,00 шт.
AA 4004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NC 1 728,00 шт.
AA 2104-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 230V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NO 1 728,00 шт
AA 5004-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 0-10 V пропорциональное регулирование, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m 3 936,00 шт
AA 4104-80-1 Сервопривод «Альфа 4», 24V, новый дизайн, включая адаптер VA80, L=1m, NO 1 728,00 шт
Базы
AB 7001-6 EIB Термостатический регулятор Alpha-Basis 6-Zonen EIB 24 V 39 408,00 шт.
AB 7001-12 EIB Термостатический регулятор Alpha-Basis 12-Zonen EIB 24 V 57 840,00 шт.
AB 2000-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis 230 V, 6 зон 5 232,00 шт.
AB 2000-1 Термостатический регулятор Alpha-Basis 230 V, 1 зона 2 304,00 шт.
AB 4071-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis Funk 24 V, 6 зон 18 960,00 шт.
AB 4001-1 Термостатический регулятор Alpha-Basis 24 V, 1 зона 4 464,00 шт.
AB 4001-6 Термостатический регулятор Alpha-Basis 24 V, 6 зон 6 864,00 шт.
AB 4071-12 Термостатический регулятор Alpha-Basis Funk 24 V, 12 зон 25 008,00 шт.
Модули
AB HK 4000 Модуль отопление-охлаждение 24 V 5 712,00 шт.
AB TM 1000 Таймер-модуль 9 216,00 шт.
AB PS 2000 Программный штекер, 230V 864 шт.
AB PL 2000 Модуль насоса, 230 V 4 272,00 шт.
AB AM 2000 Модуль привода, 230 V 2 928,00 шт.
AB RM 2000 Модуль термостата, 230 V 2 592,00 шт.
AB PL 4000 Модуль насоса, 24 V 4 272,00 шт.
AB AM 4000 Модуль привода, 24 V 2 928,00 шт.
AB RM 4000 Модуль термостата, 24 V 2 592,00 шт.
AB PS 4000 Программный штекер, 24V 864 шт.
Производитель: Мohlenhoff, Германия

[PDF] Биологические часы и механизм их регуляции

Download Биологические часы и механизм их регуляции…

World Wide Medical Assistance AG Switzerland

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЧАСЫ И МЕХАНИЗМ ИХ РЕГУЛЯЦИИ: РЕДОКС СИСТЕМА Е.В. ТЕРЁШИНА. С.И. ИВАНЕНКО

WWMA AG

Теории старения

Основные наблюдения

World Wide Medical Assistance

Ограничение калорийности питания продлевает жизнь Старение сопровождается развитием окислительного стресса Аккумуляция триглицеридов происходит в течение стационарного периода (прокариоты, дрожжи, черви, мухи, мыши, человек) «Денатурация» белков и накопление липофусцина

WWMA AG

Современная модель двухкомпонентной редокс системы NO

Аргининовая система

Супероксиданион Перекись водорода

Nh4

Оксид азота Пероксинитриты

NH 4 O2

SO3

+

H

h3 O 2

h3 O h3 S

World Wide Medical Assistance

СОД Каталаза НАДФН оксидаза

Цистеиновые остатки

WWMA AG

Трех-компонентная сопряженная редокс система

2H+ донор 2H+ акцептор

4H+ донор

World Wide Medical Assistance

4H+ акцептор

WWMA AG

Ассоциированные метаболические пути и физиологические процессы

Полиамины Биоамины Оксид азота

Система переноса одноуглеродных соединений

Нейротрансмиттеры

World Wide Medical Assistance

Митохондрия: h3O продукция

СОПРЯЖЕННЫЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПУТИ

WWMA AG

Биосинтез глутатиона

DNA RNA urea

GSH

pyrimidines

ornitine

Purine Timine

carbamoilphosphate

arginine

cytrulline

arginine succinate

oxaloacetate malate

aspartate

out

fumarate

Биосинтез пиримидинов

Производство воды Синтез АТФ

Биосинтез пуринов Метилирование ДНК

World Wide Medical Assistance

Образование мочевины и оксида азота

Биосинтез и катаболизм катехоламинов

WWMA AG

Tyrosine

O2 тирозин

Epinephrine

-CH 3 h3 O

Norepinephrine

DOPA

h3 O Dopamine

CO2

CO2

H+

NO

Ch3O

-Nh3

H+

O2 h3O2

h3O

End product H+

Nh4 h3O2

World Wide Medical Assistance

+ NH 4 -CH 3

WWMA AG

Четырех-компонентная сопряженная редокс система

CO2

+

H

NO

UNICARBON COMPOUNDS TRANSFER SYSTEM

Ch3O

Nh4 +

NH 4

-Ch4 O2

e H+

+

H

h3 O 2

Cytochroms

+

H

h3 O OUT

Glutation

Механизм регуляции протон-электронных потоков

World Wide Medical Assistance

[FeS] [HS-]

WWMA AG

Фундаментальная основа старения

CO2

+

H

NO

UNICARBON COMPOUNDS TRANSFER SYSTEM

Ch3O

Nh4 CH 4

+

NH 4

O2

e +

H

H+

h3 O 2 +

H

FATTY ACIDS SYNTHESIS

PH NAD

PENTOSE PHOSPHATE PATHWAY

OUT

Glucose ДОНОР ПРОТОНОВ

АКЦЕПТОР ПРОТОНОВ

World Wide Medical Assistance

h3 O

NA DP H

[FeS] [HS-]

WWMA AG

Глутатион и модуляция АФК Присутствие в среде АФК (включая h3O2) или соединений, генерирующих АФК повышает уровень GSH за счет возрастания скорости его синтеза GPX конкурирует с каталазой за h3O2. Редокс цикл глутатиона – защита от «мягкого» стресса, каталаза предохраняет от «жесткого» окислительного стресса. Каталаза имеет меньшее сродство к h3O2 , чем GPX World Wide Medical Assistance

GPX можно рассматривать как сенсор перекиси водорода, регулирующий ее концентрации в заданных пределах

WWMA AG

РЕДОКС АТИВНОСТЬ ГЛУТАТИОНА CO2

Ch3O -Ch4

ADH III

World Wide Medical Assistance

V. I. Lushchak Amino Acids. 2012: 736837.

WWMA AG

ПЕРЕНОС ПРОТОНОВ ГЛУТАТИОНОМ Ch3O

Глицин дегидрогеназный комплекс Редокс система

GSH Пируват Жирные дегидрогеназный кислоты комплекс

H+

глюкоза

ацетат

h3O + CO2

World Wide Medical Assistance

Пентозофосфат ный путь

WWMA AG

Глутатион и старение

Происходит разрушение сопряженной редокс системы, вызванной постепенной остановкой потока протонов.

World Wide Medical Assistance

Существует положительная корреляция между возрастом и активностью глутатион пероксидазы, несмотря на то,что у долгожителей существует дефицит селена (мягкий стресс) Существует негативная кореляция между возрастом и уровнем GSH У долгожителей значительно снижена активность глутатион редуктазы GSH/GSSG молярное отношение самое низкое у долгожителей.

WWMA AG

АККУМУЛЯЦИЯ ЖИРА В НЕЖИРОВЫХ ТКАНЯХ (ИНСУЛИНОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ) АПОПТОЗ

ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ

АЦЕТАТ

ГЛИКОЛИЗ

МИТОХОНДРИЯ

World Wide Medical Assistance

ГЛЮКОЗА

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА ИНСУЛИНОРЕЗИСТЕНТНОСТИ

Ford et al. JAMA. 2002; 287:356

WWMA AG

ВОЗРАСТАССОЦИИРОВАННЫЕ НАРУШЕНИЯ ДЕМЕТИЛИРОВАНИЕ

НИЗКИЙ ГЛУТАТИОН ГОМОЦИСТЕИНЕМИЯ ЭКСКРЕЦИЯ КОБАЛЬТА С МОЧОЙ ДЕФИЦИТ ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ ДЕФИЦИТ ВИТАМИНА B12 НАКОПЛЕНИЕ МЕТИЛМАЛОНОВОЙ КИСЛОТЫ

WWMA AG

заключение

WWMA AG

World Wide Medical Assistance

В течение стационарной фазы происходит накопление липидов Поток протонов наравлен от донора (глюкоза) к акцептору (жирные кислоты) сквозь 4-х компонентную редокс систему. Старение – результат затухания движения протон-электронного потока ограничение калорийности – средство модулирования скорости протон-электронного потока Скорость потока можно регулировать «внешним управлением» основными компонентами редокс системы

Спасибо за внимание

World Wide Medical Assistance

Книги по ремонту двигателей Hyundai https://autodata.ru/catalog/dvigateli-hyundai/ В руководстве дается пошаговое описание процедур по эксплуатации, ремонту и техническому обслуживанию двигателей Hyundai. Издание содержит подробные сведения по ремонту и регулировке механизмов двигателя, элементов системы впрыска топлива (MPI), турбонаддува, системы изменения фаз газораспределения (Mivec, Lancer Evolution IX), систем улавливания паров топлива и рециркуляции отработавших газов (EGR), зажигания, запуска и зарядки, инструкции по использованию самодиагностики системы управления двигателем, процедуры проверки параметров в разъемах электронных блоков управления двигателем. Приведены возможные неисправности и методы их устранения, сопрягаемые размеры основных деталей и пределы их допустимого износа, рекомендуемые смазочные материалы и рабочие жидкости. Руководство содержит возможные неисправности и методы их устранения, сопрягаемые размеры основных деталей и пределы ихдопустимого износа, сведения по диагностике и регулировке ТНВД, систем запуска и зарядки. Издание содержит подробные сведения по техническому обслуживанию двигателей, ремонту и регулировке механизмов двигателей, систем смазки, охлаждения, топливной системы, системы турбонаддува и системы электрооборудования двигателя. Подробно рассмотрены настройки и регулировки различных ТНВД и регуляторов (RSV, RFD, R901, R801, RLD-J, включая регулятор RED-III с электронным управлением), форсунок, системы поддержания скорости, системы горного тормоза, моторного тормоза (Powertardo и Jake Brake),… — Autodata.ru — Автодата Онлайн, Автокниги, ПО для ремонта автомобилей

Книги по ремонту двигателей Hyundai
https://autodata.ru/catalog/dvigateli-hyundai/

В руководстве дается пошаговое описание процедур по эксплуатации, ремонту и техническому обслуживанию двигателей Hyundai.

Издание содержит подробные сведения по ремонту и регулировке механизмов двигателя, элементов системы впрыска топлива (MPI), турбонаддува, системы изменения фаз газораспределения (Mivec, Lancer Evolution IX), систем улавливания паров топлива и рециркуляции отработавших газов (EGR), зажигания, запуска и зарядки, инструкции по использованию самодиагностики системы управления двигателем, процедуры проверки параметров в разъемах электронных блоков управления двигателем. Приведены возможные неисправности и методы их устранения, сопрягаемые размеры основных деталей и пределы их допустимого износа, рекомендуемые смазочные материалы и рабочие жидкости.

Руководство содержит возможные неисправности и методы их устранения, сопрягаемые размеры основных деталей и пределы ихдопустимого износа, сведения по диагностике и регулировке ТНВД, систем запуска и зарядки.

Издание содержит подробные сведения по техническому обслуживанию двигателей, ремонту и регулировке механизмов двигателей, систем смазки, охлаждения, топливной системы, системы турбонаддува и системы электрооборудования двигателя.

Подробно рассмотрены настройки и регулировки различных ТНВД и регуляторов (RSV, RFD, R901, R801, RLD-J, включая регулятор RED-III с электронным управлением), форсунок, системы поддержания скорости, системы горного тормоза, моторного тормоза (Powertardo и Jake Brake), инерционного наддува.

Полярное рекрутирование RLD LAZY1-подобным белком во время передачи гравитационного сигнала при контроле угла ветвления корней

Растительные материалы и условия выращивания

линия типа. Использовались следующие мутантные аллели и маркерные линии: LZY1 LZY2 LZY3 13 , DR5REV: GFP 28 , PIN3-GFP 16 , ADF9P: GUS 13 и LZY3P: LZY3-mCherry 13 . RLLL1-1, (Salk_138887C), RLD1-2 (Salk_067605C), RLD2-1 (Salk_042345C), RLLD3-1 (Salk_059345), RLD3-2 (SALT_503H21), а RLD4-2 (SALK_072865C) были получены из Центра биологических ресурсов арабидопсиса 47,48 , тогда как rld2-2 (GABI_822A03) и rld4-1 (GABI_225B01) были получены из 1 0 GABI-Kat 4
0 0. Все линии Т-ДНК подвергали обратному скрещиванию с Col не менее трех раз перед конструированием множественных мутантов и анализом фенотипа.Поверхностно стерилизованные семена высевали на пластины MS [1× соли Мурасиге-Скуга, 1% (масса/объем) сахарозы, 0,01% (масса/объем) миоинозитола, 0,05% (масса/объем) MES (2-( N — морфолино)этансульфокислота) и 0,5% (мас./об.) геллановой камеди; рН 5,8], инкубировали в темноте при 4 °С в течение 2–3 сут, выращивали при 23°С в вегетационной камере при постоянном освещении в течение 10–14 сут, пересаживали в почву и выращивали при постоянном освещении.

Двухгибридный скрининг и анализ взаимодействия дрожжей

Matchmaker TM Набор двухгибридных систем Gold Yeast Two-Hybrid (Clontech) использовали для скрининга библиотеки и анализа взаимодействия.Кордовую область для LZY3 сливали с С-концом ДНК-связывающего домена GAL4 (DBD) pGBKT7, а затем плазмиду трансформировали в штамм дрожжей Y2HGold (Clontech) с использованием набора для трансформации дрожжей Fast TM (G-Biosciences). . Скрининг библиотеки проводили с помощью Mate&Plate TM Librar-Universal Arabidopsis (Normalized) (Clontech) в соответствии с инструкциями производителя. Положительные клоны синего цвета, которые росли на среде -Leu/-Trp, содержащей X-α-Gal (40 мкг/мл) и ауреобазидин А (125 нг/мл), собирали и наносили штрихами на -Leu/-Trp/-His/- Среда Ade, содержащая X-α-Gal и ауреобазидин А.Затем отбирали колонии синего цвета, из них готовили плазмиды и секвенировали. Те же гены, включенные в несколько независимых колоний дрожжей, были выбраны в качестве генов-кандидатов для белков, взаимодействующих с LZY3 (дополнительная таблица 1).

Для анализа взаимодействия полную длину или часть LZY или RLD сливали с С-концом GAL4 DBD pGBKT7 или домена активации GAL4 (AD), а затем плазмиды трансформировали в Y2HGold или Y187 соответственно. Было подтверждено, что все конструкции не обладают способностью к автоактивации.После спаривания проводили точечные анализы на средах -Leu/-Trp/-His/-Ade путем инкубации в течение 2 дней при 30 °C.

ВБ и жидкостная хроматография с тандемным масс-спектрометрическим анализом

Двухнедельные проростки трансгенных растений, несущие 35S:GFP , 35S:LZY2-GFP или 35S:LZY3-GFP (m гомогенизировали экстракционным буфером [50 мМ Tris-HCl (pH 8,0), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1% (об./об.) Triton X-100, полный коктейль мини-ингибиторов протеаз (Roche)].После инкубации на льду в течение 20 мин экстракт центрифугировали при 2500× g в течение 20 мин. Супернатанты центрифугировали при 20 000 ×  g в течение 20 минут, а затем супернатанты использовали после IP. Анализы IP проводили с помощью набора для выделения белка с эпитопной меткой μMACS (Miltenyi Biotec) в соответствии с инструкциями производителя с небольшими изменениями. Супернатанты инкубировали с микрошариками μMACS anti-GFP в течение 2 ч при 4°C на ротаторе, а затем наносили на колонку μMACS.После промывки колонки белки элюировали буфером для образцов для электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Продукты ИП разделяли с использованием готового 12,5% (масса/объем) SDS-полиакриламидного геля (DRC) и окрашивали Flamingo (Bio-Rad). Каждая дорожка была разделена на четыре полосы одинаковой длины. Каждую полосу геля дважды промывали водой, пригодной для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), содержащей 60% (об./об.) ацетонитрила (Kanto Chemical)/50 мМ бикарбоната аммония. Затем гель инкубировали в 10 мМ дитиотреитола/50 мМ бикарбоната аммония в течение 45 минут при 56 °C, а затем в 55 мМ йодацетамида/50 мМ бикарбоната аммония в течение 30 минут при комнатной температуре.Инкубированный гель дважды промывали водой для ВЭЖХ, содержащей 60% (об./об.) ацетонитрила/50 мМ бикарбоната аммония, и сушили в вакуумном концентраторе. Высушенные кусочки геля обрабатывали 2 мкл 10 нг мкл –1 трипсина (золото класса MS; Promega)/50 мМ бикарбоната аммония и инкубировали при 37°С в течение 16 ч. Расщепленные пептиды переносили в новую пробирку. Гель дважды обрабатывали 20 мкл 0,2% (об./об.) муравьиной кислоты (Wako)/50% (об./об.) ацетонитрила, а затем все экстрагированные пептиды собирали в пробирку.Экстракты сушили в вакуумном концентраторе и растворяли в смеси 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты/5% (об./об.) ацетонитрила. Растворенный раствор фильтровали с помощью центробежных фильтров Ultrafree MC (PVDF 0,45 мкм; Millipore), чтобы избежать загрязнения кусочков геля. Затем раствор пептида анализировали. Жидкостную хроматографию с тандемным масс-спектрометрическим анализом проводили с использованием системы HTC-PAL/Paradigm MS4, соединенной с масс-спектрометром LTQ-Orbitrap XL (Thermo Fisher Scientific). Полученные спектры сравнивали с базой данных белков (TAIR10) с помощью сервера MASCOT (версия 2.4). Параметры поиска талисмана были следующими: пороговое значение толерантности к пептидам установлено на уровне ±10 млн. и допуск по массе фрагмента ±0,5 Да. Хит-белки сравнивали между 35S:LZY2-GFP и 35S:GFP или 35S:LZY3-GFP и 35S:GFP , а затем белки, входящие как в LZY-GFP, так и в GFP, исключали из кандидатов на интеракторы. Затем белки, ко-иммунопреципитированные как с LZY2-GFP, так и с LZY3-GFP, были перечислены в качестве кандидатов в интеракторы LZY (дополнительная таблица 2).

Анализ угла роста LR

Для анализа зрелых LR проростки выращивали вертикально на чашках MS в течение 12 дней. Были сделаны фотографии, и угол между направлением силы тяжести и ростом кончика LR был измерен с использованием программного обеспечения Image J. Для анализа LRs в LZY3-mCherry -индуцируемой системе проростки выращивали вертикально на среде MS в течение 4 дней, переносили на новую среду MS с 1 мкМ эстрадиола или без него (10 мМ запаса в EtOH) и инкубировали вертикально. при 23 °C при постоянном освещении еще 6 дней.Контрольные обработки содержали эквивалентное количество растворителя. Были сделаны фотографии, и длина LR и угол между горизонтальным направлением и ростом кончика LR были измерены с использованием программного обеспечения Image J.

Визуализация GFP/mCherry в клетках колумеллы LRs

Образцы PR и LR фиксировали в 4% (w/v) параформальдегиде в MTSB (15,1 g/l PIPES, 1,23 g/l MgSO 4 ·7H 2 O и 1,9 г/л ЭГТА, pH 7,0) в течение более 30 мин, выдерживая образцы в вертикальной ориентации.После двукратной промывки MTSB в течение 1 мин фиксированные образцы очищались раствором ClearSee более 4 дней 32 . Конфокальные изображения GFP и флуоресценции mCherry были получены с помощью FV1000 (Olympus), LSM780 (Zeiss) и TCS SP8 (Leica). Мы классифицировали развитие LR на трехчастные стадии в соответствии с развитием клеток колумеллы, как описано в Taniguchi et al. 13 и Kiss et al. 50 . LR стадии 1 соответствуют корням типа 2, содержащим два ряда клеток колумеллы 50 .LR стадии 2 соответствуют типам 3 и 4 с удлиненными клетками колумеллы, а стадия 3 соответствует типу 5 с полностью удлиненными клетками колумеллы. Стадия 3 может соответствовать II стадии ЛР по классификации Rosquete et al. 25 .

Окрашивание GUS

Корни инкубировали в растворе для окрашивания GUS [100 мМ фосфата натрия (рН 7,0), 10 мМ ЭДТА, 10 мМ феррицианида, 10 мМ ферроцианида, 0,1 % Тритона Х-100 и 2 мМ-4-5-бромида. -хлор-3-индолил-β-d-глюкуроновая кислота] при 37 °C. Для полного наблюдения образцы промывали 70% этанолом и очищали в растворе хлоралгидрата (8 г хлоралгидрата, 1 мл глицерина и 2 мл воды).Образцы исследовали под световым микроскопом (BX52, Olympus), снабженным ПЗС-камерой (DP73, Olympus).

Временный анализ с протопластами

Плазмиды и ДНК-носитель вводили в протопласты, полученные из суспензионной культуры арабидопсиса в буфере, содержащем 0,4 М маннита и 32% (вес/объем) полиэтиленгликоля (ПЭГ) 6000 51 . Конфокальные изображения GFP и флуоресценции mCherry были получены с помощью FV1000 (Olympus).

Экспрессия и очистка белков

Фрагменты ДНК были амплифицированы с помощью полимеразной цепной реакции и клонированы в вектор pET47-b [+] (Merck Millipore) или вектор pGEX (GE Healthcare).Все плазмиды были подтверждены секвенированием ДНК и трансформированы в клетки Escherichia coli штамма BL21Star (DE3) (Invitrogen) для экспрессии белка. RLD2 (остатки 1006–1066) и LZY3 (остатки 274–287) были клонированы в вектор pET47b и вектор pGEX соответственно. Белок RLD2 экспрессировали при 20 °C в среде Луриа-Бертани, содержащей 0,1 мМ изопропил-β-d-тиогалактопиранозида (IPTG), в течение 16–24 часов. Собранные клетки суспендировали в буфере А (20 мМ Трис-HCl-буфер (рН 8,0), содержащий 150 мМ NaCl), а затем разрушали ультразвуком с использованием ультразвукового аппарата Q500 (Qsonica) с выходной интенсивностью 70% на льду в течение 30 мин.После обработки ультразвуком лизаты центрифугировали с использованием Optima XE-90 (Beckman Coulter) при 35000 об/мин. в течение 50 мин при 4°C, и супернатант наносили на полную смолу для очистки His-Tag (Roche). После промывки буфером А, содержащим 20 мМ имидазол, белки элюировали буфером А, содержащим 250 мМ имидазола. Элюированный белок обрабатывали протеазой HRV3C в течение ~10 часов при 4°C для удаления N-концевой гексагистидиновой метки и очищали гель-фильтрацией (Superdex 75 pg, GE Healthcare) хроматографией в буфере A.LZY3 экспрессировали при 37 °C в среде Луриа-Бертани, содержащей 0,5 мМ IPTG, в течение 4–5 часов. Собранные клетки суспендировали в буфере А, разрушали ультразвуком и центрифугировали. После центрифугирования супернатант наносили на глутатион-сефарозную смолу 4B (GE Healthcare). После промывки буфером А белки элюировали буфером А, содержащим 20 мМ глутатиона. Элюированный белок обрабатывали протеазой HRV3C в течение ~10 часов при 4°C для удаления N-концевой метки GST и очищали гель-фильтрацией (Superdex 75 pg, GE Healthcare) хроматографией в буфере A.Белки дополнительно очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии (Resource RPC, GE Healthcare) с линейным градиентом 10–90% ацетонитрила. Элюированные белки собирали и растворитель выпаривали с помощью вакуумного концентратора. Полученные пептидные порошки хранили при температуре -30 °C до использования.

Для кристаллизации белкового комплекса RLD2-LZY3 RLD2 (остатки 1006–1066) и LZY3 (остатки 274–287) коэкспрессировали при 20 °C в среде Луриа-Бертани, содержащей 0,1 мМ IPTG, в течение 16–24 часов. Собранные клетки суспендировали в буфере А, разрушали ультразвуком и центрифугировали.После центрифугирования супернатант наносили на глутатион-сефарозную смолу 4B (GE Healthcare). После промывки белки элюировали и обрабатывали протеазой HRV3C в течение ~10 ч при 4 °C. Белки очищали с помощью гель-фильтрационной (Superdex 75 pg, GE Healthcare) хроматографии в буфере A. RLD2 и LZY3 очищали совместно в соответствии с очисткой, описанной выше. Для определения структуры мутацию V1057M вводили в RLD2, а затем меченные селенометионом (SeMet) RLD2 и LZY3 готовили в среде M9, содержащей SeMet, в условиях, ингибирующих путь биосинтеза метионина 52 .Условия экспрессии и процедуры очистки были такими же, как и для нативного белка.

Кристаллизация и сбор данных

Первичный скрининг кристаллизации проводили с использованием робота для кристаллизации Mosquito (TTP Labtech) с коммерческими наборами решений для кристаллизации JCSG Core Suite I–IV и PACT Suite (Qiagen). Наилучшие кристаллы комплекса между RLD2 и LZY3 были получены из растворов, содержащих 2,5–3,0 мМ белкового комплекса, и резервуарного раствора, содержащего трис-HCl-буфер (pH 7.0), 0,1 М ацетата натрия и 7–10% ПЭГ 4000 при 20 °С. Наилучшие кристаллы комплекса Se-Met-меченого RLD2 V1057M, связанного с LZY3, были получены из растворов, содержащих 1,5–2,5 мМ белкового комплекса, и резервуарного раствора, содержащего 0,05 М цитратного буфера натрия (рН 6,5), 0,1 М ацетата натрия, и 10–15% ПЭГ 4000 при 20 °С. Кристаллы поэтапно переносили в криозащитный раствор, содержащий 10% этиленгликоля для кристаллов RLD2-LZY3, и мгновенно охлаждали при 100 К. Данные рентгеноструктурного анализа собирали при длине волны 1.000 Å (для нативного кристалла) или 0,9658 Å (для кристалла Se-Met) на каналах BL41XU и BL44XU на канале SPring-8 или BL-1A на Photon Factory. Все данные были обработаны и масштабированы с использованием HKL-2000 53 . Данные о кристаллах приведены в дополнительной таблице 3.

Определение и уточнение структуры

Фазы комплексного кристалла RLD2 V1057M-LZY3, меченного Se-Met, были рассчитаны методом одноволновой аномальной дисперсии с использованием данных, собранных при длине волны пика селен.Позиции селена определяли с помощью программы SOLVE/RESOLVE 54 . Два комплекса RLD2 V1057M-LZY3 присутствовали в асимметричной ячейке кристалла. Построенная модель уточнялась чередованием циклов с использованием программ Coot 55 и PHENIX 56 . Структуру бинарного комплекса RLD2-LZY3 определяли методом молекулярного замещения, используя структуру комплекса RLD2 V1057M-LZY3 в качестве исходной модели. Молекулярную замену проводили с помощью Phaser 57 .Построение и уточнение модели выполнены так же, как и для сложной структуры RLD2 V1057M-LZY3. Статистика уточнения обобщена в дополнительной таблице 3. Координаты и структурные факторы были депонированы в банке белковых данных под кодами доступа 6L0W (комплекс RLD2 V1057M-LZY3, меченный Se-Met) и 6L0V (комплекс RLD2-LZY3).

Сравнение структуры и последовательности

Множественное выравнивание последовательностей доменов BRX и белков семейства LZY было выполнено с использованием CLUSTALW 58 .Парные структурные сравнения были выполнены с использованием положений атомов C α с помощью сервера PDBeFOLD 59 , а структурные рисунки были подготовлены с использованием системы молекулярной графики PyMOL, версия 1.7 Schrödinger, LLC. Электростатические потенциалы были рассчитаны с помощью APBS 60 и представлены в PyMol.

Исследование связывания с помощью анализа ITC

ITC проводили с использованием калориметра (iTC200, GE Healthcare) при 20 °C. Образцы очищенного белка подвергали диализу в течение ночи в буфере, содержащем 20 мМ Tris-HCl (pH 8.0) и 150 мМ NaCl. Мы выполнили подгонку данных с моделью связывания 1:1 с использованием программного обеспечения ORIGIN TM , поставляемого с прибором. Профиль ITC для связывания домена BRX RLD2 с CCL LZY3 был получен путем введения 1 мкл 200 мкМ LZY3 (остатки 274–287) в раствор домена BRX RLD2 (20 мкМ) при 20 °С. Исходные данные для 40 последовательных инъекций и график выделения тепла (ккал) на моль добавленного LZY3 CCL, с поправкой на теплоту LZY3 CCL при разбавлении, в зависимости от молярного отношения LZY3 CCL к домену RLD2 BRX.

Анализ связывания методом pull-down

Все мутации были получены с помощью сайт-направленного мутагенеза. Для анализа связывания методом pull-down in vitro очищенный белок и слитый с GST белок смешивали с взвесью глутатион-сефарозы 4B и инкубировали при 4 °C. После промывки инкубационным буфером собранные элюаты подвергали SDS-PAGE. Относительное количество выпавших белков измеряли с помощью планок погрешностей, представляющих собой стандартное отклонение от трех независимых измерений.

Анализ гравитационной стимуляции

Проростки выращивали в вертикальном положении на чашках MS в течение 8 дней, а затем поворачивали на 180° и инкубировали еще 5, 30 и 60 мин соответственно.Образец LR был вырезан из блока геллановой камеди и помещен в пробирку объемом 1,5 мл, удерживая образец в вертикальной ориентации. Образцы фиксировали в 4% (вес/объем) параформальдегиде в MTSB (15,1 г/л PIPES, 1,23 г/л MgSO 4 ·7H 2 O и 1,9 г/л EGTA; pH 7,0) при комнатной температуре в течение более 30 мин, сохраняя образцы в вертикальной ориентации. После фиксации образцы дважды промывали буфером MTSB в течение 1 мин и очищали раствором ClearSee при комнатной температуре более 4 дней 32 .Для наблюдения LZY3-mCherry образцы были помещены в раствор ClearSee, и было получено конфокальное изображение LZY3-mCherry с использованием LSM780 (Zeiss), оснащенного масляным иммерсионным объективом Plan-Apochromat ×40 с числовой апертурой 1,4 (Zeiss). ). Спектральное разделение и обработку изображений проводили с помощью программного обеспечения ZEN2012 (Zeiss). Для количественного анализа локализации LZY3-mCherry анализу подвергали флуоресцентные изображения LZY3-mCherry. Были проанализированы клетки центральной колумеллы и клетки латеральной колумеллы, которые расположены во втором самом внешнем слое кончика LR.ТЧ на концевой стороне клетки выбирали в качестве интересующей области (ROI), и интенсивность флуоресценции LZY3-mCherry измеряли с использованием программного обеспечения ImageJ. ROI была в равной степени сегментирована на четыре отсека от базальной стороны к апикальной стороне, что дало ROI-1 (самая базальная), ROI-2 (вторая базальная), ROI-3 (вторая апикальная) и ROI-4 (самая апикальная). ). Соотношение ROI-1/ROI-4 интенсивности флуоресценции LZY3-mCherry рассчитывали как базальное/апикальное соотношение (дополнительная рис. 19). Для сравнения локализации LZY3-mCherry различия в базально-апикальном соотношении интенсивности флуоресценции LZY3-mCherry между периодами до вращения, через 5 минут после вращения, через 30 минут после вращения и через 60 минут после вращения были протестированы с использованием метода Тьюки-Крамера с порог значимости P  < 0.05. Для наблюдения RLD1-GFP или PIN3-GFP образцы были помещены в раствор ClearSee, и было получено конфокальное изображение RLD1-GFP или PIN3-GFP с использованием DLS TCS SP8 (Leica), оснащенного Plan-Apochromat ×63. масляный иммерсионный объектив с числовой апертурой 1,4 (Leica). Для количественного анализа локализации PIN3-GFP в кончиках LR анализировали латеральные клетки колумеллы, прилегающие к центральным клеткам колумеллы, которые расположены во втором самом внешнем слое кончика LR. Интенсивность флуоресценции PIN3-GFP на внешних латеральных доменах PM измеряли с использованием программного обеспечения ImageJ.Отношение интенсивности флуоресценции GFP на апикальных флангах к интенсивности на базальных флангах рассчитывали как базально-апикальное отношение (рис. 6r).

Окрашивание крахмалом

Из 8-дневных проростков вырезали фрагменты ФР, содержащие БК длиной <2.5 мм. Образцы фиксировали в 4% (мас./об.) параформальдегиде в МТСБ в течение более 30 мин с направлением силы тяжести. После двукратной промывки MTSB в течение 1 мин фиксированные образцы очищались раствором ClearSee более 4 дней 32 .Затем очищенные образцы переносили в 10% (масса/объем) ксилит, 25% (масса/объем) мочевина и 2,1% (масса/объем) хлорид натрия в течение более 1 мин и окрашивали в 400 мкМ растворе йода (Wako ), 10% ксилит, 25% мочевина и 2,1% хлорид натрия. Этот метод окрашивания был модифицирован по сравнению с недавно опубликованным методом 61 .

Количественная и полуколичественная ОТ-ПЦР

Для количественной ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени (кОТ-ПЦР) проростки, вертикально выращенные на среде МС в течение 7 дней, переносят в новую среду МС с 1 мкМ эстрадиола или без него ( Использовали 10  мМ маточного раствора в EtOH), инкубировали вертикально при 23 °C при постоянном освещении в течение дополнительных 3 дней.Суммарную РНК экстрагировали с помощью набора RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). Комплементарную ДНК (кДНК) синтезировали из 0,5  мг тотальной РНК, обработанной ReverTra Ace qPCR RT Master Mix с gDNA Remover (Toyobo) в соответствии с инструкциями производителя. Набор KAPA SYBER FAST qPCR был использован для приготовления смеси для qPCR в реальном времени, а затем была проведена qPCR в реальном времени с использованием системы LightCycler 96 Real-Time PCR. На основании результатов трех технических повторов для трех биологических повторов относительные уровни экспрессии мзенгерной РНК (в условных единицах) определяли с использованием стандартных кривых для LZY3-mCherry и ACT8 , полученных серийными разведениями кДНК.Для полуколичественной ОТ-ПЦР кДНК синтезировали из 1  мкг тотальной РНК из 10-дневных проростков с помощью ReverTra Ace qPCR RT Master Mix с gDNA Remover (Toyobo) в соответствии с инструкциями производителя. ACT8 использовали в качестве внутреннего контроля. Все последовательности праймеров перечислены в дополнительной таблице 4. , RLD1p:RLD1-GFP , ADF9p:RLD1 , ATHB8p:RLD1-mCherry и 35S:RLD1-GFP .2866, 2178, 1016 и 2419 п.н. выше стартового кодона RLD1 , RLD2 , RLD3 и RLD4 , соответственно, использовали в качестве промоторных областей и сливали с фрагментами ДНК. содержащий гена GUS и терминатора NOS на векторе pENTR . Впоследствии они были введены в pFAST-R01 62 . Фрагменты длиной 3122 и 1700 п.н. выше стартового кодона ADF9 и ATHB8 использовали в качестве промоторов ADF9 и ATHB8 13,63 соответственно.Промоторные области RLD1 , ADF9 и ATHB8 объединяли с сайтами клонирования и терминатором NOS в векторе pENTR . Полноразмерная кДНК слитого гена RLD1 , RLD1-GFP/mCherry , BRXd RLD2 [3′-конец RLD2 CDS (219  п.н.)] была клонирована между промотором 5 и NOS 9009 , с последующим введением в pGWB501 64 ( RLD1p:RLD1-GFP , ADF9p:RLD1 , ATHB8p:RLD1-mCherry , X ADF9p:).Полноразмерную кДНК RLD1 клонировали в вектор pENTR с последующим введением в вектор pFAST-R02 62 ( 35S:RLD1-GFP ). Для введения мутаций в K275 и L285 LZY3 в векторе LZY3p:LZY3-mCherry была проведена ПЦР-амплификация с использованием праймеров, содержащих соответствующую мутацию, а затем мутантный CDS LZY3 был заменен CDS дикого типа на LZY3p:LZY3-mCherry pENTR. с последующим введением в pGWB501 ( LZY3p:LZY3(K275A&L285A)-mCherry ).Для конструирования G10-90p:XVE»LZY2-mCherry полноразмерный CDS LZY2 , слитый с mCherry, вставляли в сайт множественного клонирования pER8 вектора 65 . Для конструирования ADF9p:XVE»LZY3-mCherry промоторную область G10–90 заменяли промоторной областью ADF9 в векторе pER8 . Гибридный ген LZY3-mCherry был вставлен в сайт множественного клонирования вектора pER8 ADF9p . Бинарными векторами, несущими эти конструкции, растения стабильно трансформировали с использованием стандартного протокола для -опосредованной Agrobacterium (штамм GV3101) трансформации 66 .Полная длина RLD1 CDS (3309 bp), усеченная кДНК RLD1ΔPH (2927 bp, удаленный 5′-конец 375 bp, соответствующий домену PH), усеченная кДНК RLD1ΔBRX (3051 8’3bp, удалено 2 домен BRX), а полноразмерные CDS RLD2 , RLD3 и RLD4 амплифицировали методом ОТ-ПЦР из Col дикого типа, и их фрагменты сливали с фрагментами ДНК, содержащими ген GFP и NOS . Terminator ( GFP-NOST ) на PUC19 Вектор под капустой вирус мозаики из цветной капусты 35S ( 35S: RLD1-GFP , 35S: RLD1ΔPH-GFP , 35S: RLD1ΔBRX-GFP , 35S :RLD2-GFP , 35S:RLD3-GFP , 35S:RLD4-GFP ).Для конструирования 35S:RLD1ΔRCC1-GFP и 35S:RLD1ΔFYVE-GFP переднюю область соответствующих доменов в RLD1 CDS и нижнюю область домена амплифицировали с помощью ОТ-ПЦР из Col дикого типа, и амплифицированные фрагменты вставляли между промотором 35S и слитым геном GFP-NOSt в векторе pUC19 с использованием набора для клонирования In-Fusion HD (Clontech). 3′-конец CDS RLD1 (258 bp), соответствующий домену BRX, сливали с фрагментами ДНК, содержащими гена mCherry и терминатора NOS ( mCherry-NOSt ) на векторе pUC19 под цветной капустой. вирус мозаики 35S промотор ( 35S:BRXd-mCherry ). гена mCherry без стоп-кодона и LTI6b CDS амплифицировали с помощью ПЦР и вставляли в сайт множественного клонирования вектора pUC19 с использованием набора для клонирования In-Fusion HD ( 35S:mCherry-LTI6b ). Затем CCL сливали с фрагментами ДНК, содержащими гена слияния mCherry-LTI6b и NOSt на векторе pUC19 ( 35S:mCherry-LTI6b-CCL ). Кроме того, мы вводили мутации одну за другой в F1052 и W1066 RLD1 в векторе RLD1p:RLD1-GFP с помощью ПЦР-амплификации с использованием праймеров, содержащих соответствующие мутации, а затем мутировавшие RLD1 CDS заменяли CDS дикого типа на 35 . S:RLD1-GFP вектор [ 35S:RLD1(F1052A&W1066A)-GFP , 35S:RLD1(F1052R&W1066R)-GFP ].Для введения мутаций в K275 и L285 LZY3 в векторе 35S:LZY3-mCherry была проведена ПЦР-амплификация с использованием праймеров, содержащих соответствующую мутацию, а затем мутантный CDS LZY3 был заменен CDS дикого типа на 35 S:LZY3-mCherry. вектор [ 35S:LZY3(K275A&L285A)-mCherry ].

Сводка отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

%PDF-1.7 % 1 0 объект > эндообъект 5 0 объект >/Шрифт>>>/Поля[]>> эндообъект 2 0 объект >поток 2018-10-11T09:43:29+09:002018-10-11T09:43:29+09:002018-10-11T09:43:29+09:00Adobe InDesign CS6 (Macintosh)application/pdfuuid:840ce187-7998- 449e-b495-33af92c93aaduuid:375d1f2b-4c65-4d11-a1c4-fe2a42b3cdedБиблиотека Adobe PDF 10.0.1False конечный поток эндообъект 6 0 объект > эндообъект 3 0 объект > эндообъект 11 0 объект >/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/Properties>/XObject>>>/Rotate 0/TrimBox[0.0 0,0 595,276 841,89]/Тип/Страница>> эндообъект 12 0 объект >/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageB/ImageC]/Properties>/XObject>>>/Rotate 0/TrimBox[0.0 0.0 595,276 841,89]/Type/Page>> эндообъект 33 0 объект >поток HW] +zlVW_7Aa}»8FvZJ]_»#RyH}4O |y3~7Olμyczgym?Sli)gJٺy?w3U5ddSO̿taU*P.DIM R+6(EMhsh/.\cjC,by7/z#l6-h~̏pV3?G,j[ b4ɕ\M n-Lm.s$Y6b.%

Herc2 Домен HECT и RLD, содержащий убиквитин-протеинлигазу E3 2 [Mus musculus (домовая мышь)] — Гена

НОВЫЙ Попробуйте новую таблицу расшифровки

RefSeq поддерживается независимо от Annotated Геномы

Эти эталонные последовательности существуют независимо от построения генома.Объясни

Эти эталонные последовательности курируются независимо от генома цикл аннотаций, поэтому их версии могут не совпадать с версиями RefSeq в текущем построение генома. Определите несоответствие версий, сравнив версию RefSeq в этот раздел к тому, о котором сообщается в геномных регионах, стенограммы и продукты выше.

мРНК и белок (белки)
  1. НМ_001360080.1 → NP_001347009.1  Е3 убиквитин-протеинлигаза HERC2

    Статус: ПРОВЕРЕНО

    Описание
    Вариант транскрипта
    : этот вариант (2) отличается 5′-UTR по сравнению с вариантом 1. Оба варианта 1 и 2 кодируют один и тот же белок.
    Исходная последовательность(и)
    АС102121, АС102150
    Консенсус CDS
    CCDS21318.1
    Связанные
    ENSMUSP00000131573.2, ENSMUST00000164095.3
    Сохраненные домены (9) сводка
    cd08664
    Местоположение: 2766 → 2911
    АПК10-HERC2; APC10-подобный домен DOC1 присутствует в HERC2 (домен HECT и RLD2)
    COG5184
    Местоположение: 2957 → 3323
    АТС1; Супрессор альфа-тубулина и родственные белки, содержащие домен RCC1 [контроль клеточного цикла, деление клеток, разделение хромосом, цитоскелет]
    cd00078
    Расположение:4423 → 4794
    HECTc; домен HECT; С-концевой каталитический домен подкласса убиквитин-протеинлигазы (Е3).Он связывает специфические убиквитин-конъюгирующие ферменты (Е2), принимает убиквитин от Е2, переносит убиквитин на боковые цепи субстрата лизина и переносит дополнительные …
    cd02344
    Местоположение: 2707 → 2751
    ZZ_HERC2; Цинковый палец, тип ZZ. Цинковый палец присутствует в HERC2 и родственных белках. HERC2 представляет собой потенциальную убиквитин-протеинлигазу Е3 и/или фактор обмена гуаниновых нуклеотидов. Мотив ZZ координирует два иона цинка и, скорее всего, участвует в связывании лиганда или …
    cd14402
    Местоположение: 2461 → 2508
    УБА_HERC2; Домен UBA обнаружен в вероятной убиквитин-протеинлигазе E3 HERC2 и подобных белках
    pfam00173
    Расположение:1212 → 1283
    Cyt-b5; Цитохром b5-подобный домен связывания гема/стероида
    pfam06701
    Местоположение:1871 → 1930
    MIB_HERC2; Mib_herc2
    pfam11515
    Местоположение: 2555 → 2632
    кул7; Белок развития и клеточной пролиферации мышей Cullin-7
    pfam18346
    Местоположение: 2640 → 2697
    Ш4_15; Ментальная бомба Sh4 повторяет домен
  2. НМ_010418.2 → NP_034548.2 Убиквитин-протеинлигаза E3 HERC2

    См. идентичные белки и их аннотированные местоположения для NP_034548.2.

    Статус: ПРОВЕРЕНО

    Описание
    Вариант расшифровки: этот вариант (1) представляет собой более длинную расшифровку. Варианты 1 и 2 кодируют один и тот же белок.
    Исходная последовательность(и)
    AF061529, AF071173, AK148361, BP754028, BY241058
    Консенсус CDS
    CCDS21318.1
    UniProtKB/Swiss-Prot
    Q4U2R1
    Связанные
    ENSMUSP00000075579.7, ENSMUST00000076226.13
    Сохраненные домены (9) сводка
    cd08664
    Местоположение: 2766 → 2911
    АПК10-HERC2; APC10-подобный домен DOC1 присутствует в HERC2 (домен HECT и RLD2)
    COG5184
    Местоположение: 2957 → 3323
    АТС1; Супрессор альфа-тубулина и родственные белки, содержащие домен RCC1 [контроль клеточного цикла, деление клеток, разделение хромосом, цитоскелет]
    cd00078
    Расположение:4423 → 4794
    HECTc; домен HECT; С-концевой каталитический домен подкласса убиквитин-протеинлигазы (Е3).Он связывает специфические убиквитин-конъюгирующие ферменты (Е2), принимает убиквитин от Е2, переносит убиквитин на боковые цепи субстрата лизина и переносит дополнительные …
    cd02344
    Местоположение: 2707 → 2751
    ZZ_HERC2; Цинковый палец, тип ZZ. Цинковый палец присутствует в HERC2 и родственных белках. HERC2 представляет собой потенциальную убиквитин-протеинлигазу Е3 и/или фактор обмена гуаниновых нуклеотидов. Мотив ZZ координирует два иона цинка и, скорее всего, участвует в связывании лиганда или …
    cd14402
    Местоположение: 2461 → 2508
    УБА_HERC2; Домен UBA обнаружен в вероятной убиквитин-протеинлигазе E3 HERC2 и подобных белках
    pfam00173
    Расположение:1212 → 1283
    Cyt-b5; Цитохром b5-подобный домен связывания гема/стероида
    pfam06701
    Местоположение:1871 → 1930
    MIB_HERC2; Mib_herc2
    pfam11515
    Местоположение: 2555 → 2632
    кул7; Белок развития и клеточной пролиферации мышей Cullin-7
    pfam18346
    Местоположение: 2640 → 2697
    Ш4_15; Ментальная бомба Sh4 повторяет домен

RefSeqs аннотированных геномов: аннотация Mus musculus, выпуск 109 подробности…

Следующие разделы содержат эталонные последовательности, принадлежащие конкретное построение генома. Объясни

Этот раздел включает геномную справку Последовательности (RefSeqs) из всех сборок, на которых аннотирован этот ген, например RefSeqs для хромосом и каркасов (контигов) как из эталонного, так и из альтернативного сборки. Здесь также сообщается о модельных РНК и белках.

Артикул GRCm39 C57BL/6J

Геномный
  1. NC_000073.7 Артикул GRCm39 C57BL/6J

    Диапазон
    55699872..55884373
    Скачать
    GenBank, FASTA, средство просмотра последовательности (графика)
мРНК и белок (белки)
  1. XM_006540639.3 → XP_006540702.1  Е3 убиквитин-протеинлигаза HERC2 изоформа X2

    UniProtKB/Swiss-Prot
    Q4U2R1
    Связанные
    ЭНСМУСП00000145997.2, ENSMUST00000205303.2
    Сохраненные домены (9) сводка
    cd08664
    Местоположение: 2766 → 2911
    АПК10-HERC2; APC10-подобный домен DOC1 присутствует в HERC2 (домен HECT и RLD2)
    COG5184
    Местоположение: 2957 → 3323
    АТС1; Супрессор альфа-тубулина и родственные белки, содержащие домен RCC1 [контроль клеточного цикла, деление клеток, разделение хромосом, цитоскелет]
    cd00078
    Расположение:4387 → 4758
    HECTc; домен HECT; С-концевой каталитический домен подкласса убиквитин-протеинлигазы (Е3).Он связывает специфические убиквитин-конъюгирующие ферменты (Е2), принимает убиквитин от Е2, переносит убиквитин на боковые цепи субстрата лизина и переносит дополнительные …
    cd02344
    Местоположение: 2707 → 2751
    ZZ_HERC2; Цинковый палец, тип ZZ. Цинковый палец присутствует в HERC2 и родственных белках. HERC2 представляет собой потенциальную убиквитин-протеинлигазу Е3 и/или фактор обмена гуаниновых нуклеотидов. Мотив ZZ координирует два иона цинка и, скорее всего, участвует в связывании лиганда или …
    cd14402
    Местоположение: 2461 → 2508
    УБА_HERC2; Домен UBA обнаружен в вероятной убиквитин-протеинлигазе E3 HERC2 и подобных белках
    pfam00173
    Расположение:1212 → 1283
    Cyt-b5; Цитохром b5-подобный домен связывания гема/стероида
    pfam06701
    Местоположение:1871 → 1930
    MIB_HERC2; Mib_herc2
    pfam11515
    Местоположение: 2555 → 2632
    кул7; Белок развития и клеточной пролиферации мышей Cullin-7
    pfam18346
    Местоположение: 2640 → 2697
    Ш4_15; Ментальная бомба Sh4 повторяет домен
  2. ХМ_006540637.4 → XP_006540700.1  E3 убиквитин-протеинлигаза HERC2 изоформа X1

    См. идентичные белки и их аннотированные местоположения для XP_006540700.1.

    UniProtKB/Swiss-Prot
    Q4U2R1
    Сохраненные домены (9) сводка
    cd08664
    Местоположение: 2766 → 2911
    АПК10-HERC2; APC10-подобный домен DOC1 присутствует в HERC2 (домен HECT и RLD2)
    COG5184
    Местоположение: 2957 → 3323
    АТС1; Супрессор альфа-тубулина и родственные белки, содержащие домен RCC1 [контроль клеточного цикла, деление клеток, разделение хромосом, цитоскелет]
    cd00078
    Расположение:4423 → 4794
    HECTc; домен HECT; С-концевой каталитический домен подкласса убиквитин-протеинлигазы (Е3).Он связывает специфические убиквитин-конъюгирующие ферменты (Е2), принимает убиквитин от Е2, переносит убиквитин на боковые цепи субстрата лизина и переносит дополнительные …
    cd02344
    Местоположение: 2707 → 2751
    ZZ_HERC2; Цинковый палец, тип ZZ. Цинковый палец присутствует в HERC2 и родственных белках. HERC2 представляет собой потенциальную убиквитин-протеинлигазу Е3 и/или фактор обмена гуаниновых нуклеотидов. Мотив ZZ координирует два иона цинка и, скорее всего, участвует в связывании лиганда или …
    cd14402
    Местоположение: 2461 → 2508
    УБА_HERC2; Домен UBA обнаружен в вероятной убиквитин-протеинлигазе E3 HERC2 и подобных белках
    pfam00173
    Расположение:1212 → 1283
    Cyt-b5; Цитохром b5-подобный домен связывания гема/стероида
    pfam06701
    Местоположение:1871 → 1930
    MIB_HERC2; Mib_herc2
    pfam11515
    Местоположение: 2555 → 2632
    кул7; Белок развития и клеточной пролиферации мышей Cullin-7
    pfam18346
    Местоположение: 2640 → 2697
    Ш4_15; Ментальная бомба Sh4 повторяет домен

Офис главного юрисконсульта

Для связи с офисом главного юрисконсульта по вопросам, не связанным с обслуживанием или процессом или ходатайствами о нормотворчестве:

По почте

Офис главного юрисконсульта
U.S. Департамент внутренней безопасности
2707 Martin Luther King Jr. Ave, SE
Mail Stop 0485
Washington, DC 20528-0485

По электронной почте

[email protected]

По телефону

202-282-9822

По факсу

202-282-9186

УВЕДОМЛЕНИЕ

Вступает в силу немедленно и до дальнейшего уведомления, Управление главного юрисконсульта Министерства внутренней безопасности США не принимает личное вручение процессуальных документов для действий против Министерства или его персонала в их официальном качестве из-за нехватки персонала на месте, вызванной в связи с обстоятельствами COVID-19.Следующие процедуры не изменяют требования Федеральных правил гражданского судопроизводства, правило 4(i)(3) в отношении вручения должностному лицу или сотруднику, против которого предъявляется иск в его или ее личном качестве, и не должны использоваться в каких-либо действиях, направленных на улучшение обслуживания. против любого сотрудника или сотрудника Департамента, против которого подан иск в его или ее личном качестве.

Кроме того, мы внесли поправки в правило DHS 6 C.F.R. часть 5, чтобы пересмотреть процедурные требования, связанные с вручением процессуальных повесток, жалоб и повесток в суд в Министерстве внутренней безопасности и его компонентах.Почтовый адрес для каждого компонента для обслуживания процесса можно найти здесь. Повестки, жалобы и повестки в суд для учреждений, входящих в состав DHS, следует направлять непосредственно в это учреждение по указанному адресу. ТОЛЬКО услуги, предназначенные для самого Департамента или сотрудников Департамента в их официальном качестве, должны быть отправлены по указанным ниже почтовым адресам.

Служба обработки повесток и жалоб

В соответствии с Федеральными правилами гражданского судопроизводства, правило 4(i)(2), вызовы и жалобы на Департамент или его сотрудников в их официальном качестве заказным или заказным письмом по адресу:

Офис главного юрисконсульта
U.S. Департамент внутренней безопасности
2707 Martin Luther King Jr. Ave, SE
Washington, DC 20528-0485

Служба обработки вызовов в суд

Отправить повестку в суд против Департамента или его сотрудников в их официальном качестве по адресу:

[email protected]

Ходатайства о нормотворчестве, только по почте:

Кому: Юридический отдел по вопросам регулирования
Офис главного юрисконсульта
Министерство внутренней безопасности США
2707 Martin Luther King Jr.Ave, SE
Почтовая станция 0485
Вашингтон, округ Колумбия 20528-0485

ПРИМЕЧАНИЕ. Правила DHS в 6 CFR, часть 3, более подробно описывают процесс подачи петиции о нормотворчестве и включают дополнительные требования и информацию, относящиеся к надлежащему формату, отправке по почте и содержанию петиции о нормотворчестве. Например, DHS принимает петиции о нормотворчестве только по почте; DHS не принимает петиции по номеру , а не , направленные по электронной почте, факсу или курьером.

Пересмотренный MAPP FDA описывает процедуры внесения изменений в маркировку непатентованных лекарств

Опубликовано 27 июля 2021 г. | Джоанн С.Эглович

Отдел непатентованных лекарственных средств Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) недавно выпустил пересмотренное Руководство по политике и процедурам (MAPP), описывающее внутренние процедуры агентства по обработке изменений в маркировке непатентованных лекарств, включая перечень обязанностей внутреннего персонала FDA, ответственного за управление этими лекарствами. меняется маркировка.

16-страничный MAPP реализует раздел 10609 Закона о защите пациентов и доступном медицинском обслуживании (PPACA), который был принят в 2010 году и добавлен к 505(j)(10) Федерального закона о пищевых продуктах, лекарствах и косметических средствах .Он обновляет предыдущую версию MAPP, выпущенную в феврале 2013 года. (СВЯЗАННО: FDA теперь может временно одобрять непатентованные лекарства, использующие другую маркировку, чем RLD , Regulatory Focus 14 февраля 2013 г.)

FDA написало в электронном письме по адресу Focus что пересмотренный MAPP «уточняет, что соглашение о представлении измененной маркировки после утверждения в соответствии с положениями 505 (j) (10) является законодательным требованием, которое теперь определяется как Требование к маркировке после утверждения (PALR). В результате шаблоны теперь ссылайтесь на PALR, а MAPP теперь включает язык для выпуска из PALR.

MAPP также включает новый шаблон для ситуаций, когда заявитель не представляет дополнение к маркировке в ответ на PALR, отмечает FDA. Другие изменения были внесены для дальнейшего уточнения ролей и обязанностей по принятию и документированию этих решений.

MAPP также включает шаблон нового письма спонсорам о требовании маркировки после утверждения в соответствии с разделом 505(j)(10).

PPACA позволяет FDA одобрять заявку на непатентованный дженерик, поданную по схеме 505(j), даже если одобрение сокращенной заявки на новый лекарственный препарат (ANDA) происходит одновременно с одобрением FDA определенных изменений в маркировке референтного препарата (RLD). ).Однако FDA выдает одобрение ANDA только в том случае, если заявитель на получение дженерика соглашается представить измененную маркировку, которая соответствует изменениям в маркировке RLD, в течение 60 дней с момента уведомления об изменении.

Закон предназначен для расширения доступа потребителей к непатентованным лекарствам путем закрытия лазейки, используемой некоторыми фирменными фармацевтическими компаниями для задержки выхода на рынок непатентованных лекарств, которые ссылаются на их лекарства, путем внесения изменений в маркировку в последнюю минуту. Это вынуждает заявителей повторно подавать свои ANDA с ​​новой информацией о маркировке.

В соответствии с прежним законом, таким как Pliva против Mensing , Верховный суд постановил, что производители непатентованных фармацевтических препаратов не несут ответственности по деликтным искам штата на основании маркировки, поскольку федеральный закон требует, чтобы этикетка препарата была идентична препарату, включенному в референтный список (RLD).

FDA MAPP 5230.3 Rev. 1

 

© 2022 Общество профессионалов в области регулирования.

Непатентованные и гибридные лекарства | Европейское агентство по лекарственным средствам

Европейское агентство по лекарственным средствам (EMA) оценивает заявки компаний на продажу непатентованных лекарств в Европейском Союзе (ЕС).Непатентованное лекарство разрабатывается таким же образом, как уже зарегистрированное лекарство, называемое эталонным лекарством.

Непатентованный препарат содержит то же активное вещество (вещества) , что и референтный препарат, и используется в той же дозе (дозах) для лечения того же заболевания (заболеваний). Однако неактивные ингредиенты, название, внешний вид и упаковка непатентованного лекарства могут отличаться.

Лекарственные препараты-генерики производятся в соответствии с теми же стандартами качества , что и все другие лекарства.

Компания может подать заявку на получение разрешения на продажу непатентованного лекарственного средства только после истечения периода эксклюзивности данных эталонного лекарственного средства. Дженерики могут продаваться только после истечения срока действия маркетинговой защиты, обычно через 10 или 11 лет с даты первого разрешения на эталонный продукт.

Список непатентованных лекарственных средств, одобренных Агентством, см.:

Роль агентства

EMA оценивает заявки, если референтное лекарственное средство было централизованно одобрено или если непатентованное лекарственное средство обеспечивает значительные инновации или преимущества для пациентов.

Поскольку информация о безопасности и эффективности активного вещества (веществ) уже имеется в эталонном лекарственном средстве, компаниям, производящим непатентованные лекарственные средства, обычно достаточно:

  • предоставить информацию о качестве лекарственного средства;
  • демонстрируют, что непатентованный лекарственный препарат производит те же уровни активного вещества в организме человека, что и эталонный лекарственный препарат.

После того, как они были разрешены, Агентство контролирует безопасность непатентованных лекарств.

Консультация по процедурам

Заявители, готовящиеся запросить разрешение на продажу непатентованного лекарственного средства через EMA, должны следовать процедурным рекомендациям Агентства по централизованной авторизации непатентованных и гибридных лекарственных средств.

Гибридные лекарственные средства

Гибридные лекарственные средства — это лекарственные средства, разрешение на получение которых частично зависит от результатов испытаний референтного лекарственного средства и частично от новых данных клинических испытаний.

Это происходит, когда производитель разрабатывает непатентованное лекарственное средство, основанное на эталонном лекарственном средстве, но имеющее другую дозу , другой способ введения или немного отличающееся показание от эталонного лекарственного средства.

Красный свет Часто задаваемые вопросы

Система RLD содержит только просроченные долги. Задолженность означает требование или задолженность, которые не были оплачены к дате, указанной агентством, если к этой дате не были приняты другие удовлетворительные платежные меры, или в любое время после этого должник не выполнил обязательство по платежному соглашению или документ с агентством или в соответствии с правилом Комиссии. Только для целей настоящего подраздела платеж в рассрочку согласно 47 CFR 1.2110(g) не будет считаться просроченным до истечения всех применимых льготных периодов и любых других применимых периодов в соответствии с правилами Комиссии для осуществления платежа. Следующие типы долгов являются примерами просроченных долгов, перечисленных в системе RLD:

  • регуляторные сборы , которые не были уплачены, были недоплачены или были представлены после закрытия окна оплаты регуляторных сборов и облагаются штрафом за просрочку платежа в размере 25%;
  • сборы за подачу заявления , которые не были оплачены или оплачены в недостаточной мере;
  • договоров рассрочки просроченных;
  • Плата за поиск и копирование Закона о свободе информации , которая не оплачена или недоплачена;
  • Раздел 1353 спонсировал путевые расходы , которые просрочены;
  • Просроченные платежи Фонда универсального обслуживания, Службы ретрансляции электросвязи или Административного плана Североамериканского плана нумерации ; или
  • аукционные платежи просроченные

Если все ваши FRN имеют один и тот же идентификационный номер налогоплательщика (TIN), вы можете запросить систему Red Light Display по вашему FRN, чтобы получить список всех FRN, имеющих один и тот же TIN.Когда у вас есть список FRN, имеющих общий ИНН, вы можете определить, какой FRN имеет просроченную задолженность. RLD отображает список всех FRN, имеющих одинаковый TIN, и для каждого FRN список просроченных долгов перед Комиссией. Систему RLD можно найти на сайте www.fcc.gov/redlight.

У вас есть возможность позвонить в справочную службу Fee Filer (877-480-3201 вариант 6), где кто-то может предоставить дополнительную информацию и отправить вам по факсу копию основного счета FCC, чтобы помочь вам.

Если вы отправили платеж, не указав свой FRN или другой идентификатор FCC в форме 159, возможно, мы не зачислили ваш платеж на соответствующий счет.Когда вы оплачиваете счет, очень важно указать свой FRN и номер счета (или соответствующий позывной или идентификатор FCC) в форме 159 в соответствующих полях. Отправьте нам по факсу или электронной почте ([email protected]) копию подтверждения оплаты вместе с этой информацией, и мы убедимся, что платеж был отправлен на соответствующий счет. Отправьте по факсу подтверждение оплаты в справочную службу Fee Filer по номеру факса 202-418-2980.

Правила Комиссии в отношении освобождения от сборов (пошлины за подачу заявления) и регулирующих сборов изложены в 47 C.Ф.Р. §§ 1.1114 и 1.1162 соответственно. Заявители, лица, получившие разрешение, и лицензиаты должны подать документацию об их освобожденном статусе во время подачи заявки, в течение шестидесяти (60) дней с момента изменения статуса некоммерческой организации (лицензиата или получателя разрешения, заявившего о статусе некоммерческой организации в соответствии с разделом 501 Внутреннего Кодекса доходов), в течение шестидесяти (60) дней с даты вступления в силу покупки или перевода из некоммерческой в ​​коммерческую, и в то время, когда в ином случае должна была бы быть произведена выплата вознаграждения, или в такое другое время, которое требуется Управляющим Директор.Чтобы убедиться, что у нас есть ваш последний освобожденный статус, ежегодно предоставляйте свою сертификацию. Ежегодная подача документации поможет нам упростить этот процесс. Заявители, претендующие на освобождение от платы за подачу заявки, должны подтвердить свое право на освобождение посредством сопроводительного письма, прилагаемого к заявке или подаче заявки, за исключением случаев, когда в применимой форме FCC запрашивается информация, обосновывающая освобождение. Любой получатель разрешений, лицензиат или другое лицо, подлежащее уплате регулирующего сбора и претендующее на освобождение от регулирующего сбора, должно подать письменную документацию, устанавливающую основание для его освобождения, Секретарю Комиссии (Вниманию: Управляющий директор).После того, как мы получим надлежащую документацию об освобождении от налогов за соответствующий финансовый год, мы аннулируем задолженность по оплате за этот год.

Любой получатель разрешений, лицензиат или другое лицо, подлежащее уплате сбора за регулирование и требующее освобождения от сбора за регулирование на основании статуса, изложенного в 47 C.F.R. § 1.1162 (например, государственное учреждение, некоммерческая организация, службы специального аварийного радио и радио службы общественной безопасности, определенные лица, имеющие разрешения и лицензии некоммерческих образовательных радиовещательных станций, а также определенные организации, предоставляющие учебные услуги) должны подать заявление секретарю Комиссии по адресу 45 L Street NE. , Washington, DC 20554 (Кому: Управляющий директор) письменная документация, устанавливающая основание для его освобождения в течение шестидесяти (60) дней после того, как он подпадает под регулирующую юрисдикцию Комиссии, или в то время, когда в ином случае должна была бы быть уплачена его пошлина, в зависимости от того, что наступит раньше. или в другое время по требованию Управляющего директора.Приемлемая документация может включать, например, рекомендательные письма Службы внутренних доходов, государственные или правительственные сертификаты или другую документацию о том, что некоммерческий статус был одобрен штатом или другим государственным органом.

Чтобы убедиться, что у нас есть ваш последний освобожденный статус, ежегодно предоставляйте сертификат. Эта обязательная ежегодная подача документации поможет нам упростить этот процесс. (См. FAQ № 5 выше.)

Мы отправим нашим должникам одно уведомление, прежде чем предпринимать более активные действия по взысканию задолженности.

Чтобы защитить коммерческие записи от несанкционированного доступа, мы ограничиваем доступ к информации в наших государственных финансовых системах для лиц, имеющих FRN, или их уполномоченных представителей. Ваш клиент должен будет предоставить вам свой FRN и пароль, чтобы вы могли получить информацию об их учетной записи в FCC.

Вы можете отправить свой письменный запрос, подкрепленный соответствующей документацией, по следующим адресам:

Федеральная комиссия по связи
Вниманию: Операционная группа по доходам и дебиторской задолженности

NE
, улица Л., 45 Вашингтон, округ Колумбия, 20554

или

Электронная почта: [email protected]правительство

Ваш письменный запрос на возврат должен включать ваш FRN, сумму, подлежащую возврату, документацию, подтверждающую причину возврата, копию вашего уведомления о денежном переводе (форма 159 FCC) и/или краткое описание подачи вашего заявления, включая дату подачи и способ оплаты.

Как правило, если была приложена соответствующая документация, подтверждающая основание для возмещения, нам требуется приблизительно две (2) недели для рассмотрения и обработки вашего возмещения.Однако в некоторых случаях, когда требуется дополнительная проверка или информация, время может быть больше.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

*