Соляная кислота пдк в воздухе рабочей зоны: 857-95. . , , , , . , , , .

Содержание

Хлористый водород предельно допустимая концентраци

    Соляная кислота имеет резкий запах и выделяет на воздухе туман хлористого водорода. Предельно допустимая концентрация H I в воздухе рабочей зоны производственных помещений 0,01 мги. [c.51]

    Полимерные липкие ленты при нормальной температуре безвредны и не взрывоопасны. При длительном воздействии на поливинилхлоридные ленты повышенной температуры (170…220 °С) возможно выделение хлористого водорода, Предельно допустимая концентрация хлористого водорода (ПДК) в воздухе рабочей зоны производственных помещений — 6 мг/м по ГОСТ 12.1.005—76. [c.139]


    Фтор и фтористый водород при большом разбавлении действуют как дезинфицирующее средство. В больших концентрациях и при длительном воздействии раздражают слизистые оболочки, вызывают кашель и удушье. Действие фтористого водорода сильнее действия хлористого водорода. Предельно допустимая концентрация НР 0,001 мг л. [c.96]

    Предельно допустимой концентрацией хлористого водорода в воздухе производственных помещений считается 0,005 мг/л. Наличие уже 0,05 мг/л быстро вызывает раздражение в носу и гортани, колотье в груди, хрипоту и ощущение удушья. При хроническом отравлении малыми концентрациями НС1 особенно страдают зубы, эмаль которых подвергается быстрому разрушению. 

[c.258]

    Хлористый водород — негорючий газ, сухой хлористый водород непожароопасен. Ядовит. Предельно допустимые концентрации в воздухе рабочей зоны ароизводственных помещений — 5 мг/м , в воздухе населенных мест максимальная разовая — 0,05 мг/м и среднесуточная — 0,015 мг/м . [c.638]

    Различные полимеры при разложении образуют не одинаковые по вредности низкомолекулярные вещества [348]. Например, по данным Научно-исследовательского института гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана, в продуктах разложения пентапласта, проводимого при 180° С, обнаруживается фосген, а при 200— 220° С —окись углерода, хлорангидриды кислот, фосген, формальдегид, хлористый водород. Предельно допустимая концентрация 

[c.233]

    При длительном воздействии повышенных температур (170—200 °С) возможно выделение хлористого водорода. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в производственных помещениях — 5 мг/м . [c.310]

    Вредные вещества в производстве хлорида алюминия. На разных стадиях технологического процесса в производственные помещения могут выделяться оксид углерода, фосген, хлор, хлористый водород, цианистый водород, сероводород. Последние два соединения образуются за счет примесей в коксе и кислороде, применяемых для получения окиси углерода. Ниже приведены предельно допустимые концентрации вредных веществ (в мг/м )  [c.173]

    Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе рабочей зоны производственных помещений по ГОСТ 12.1.005-79 должна составлять 6 мг/м . Это содержание определяют методом по ГОСТ 12.1.016-79. 

[c.23]

    Поликарбоновые кислоты, а также их ангидриды и хлорангидриды обладают раздражающим и общетоксическим действием. В частности, фталевый ангидрид вызывает экземы, действует на дыхательную систему и на пищеварительный тракт. Токсичность хлорангидридов кислот усугубляется возможностью их гидролиза с образованием хлористого водорода и свободных кислот. Фосген— отравляющее вещество удушающего действия. Предельно допустимая концентрация фосгена в воздухе производственных помещений 0,5 мг/м . [c.213]

    В качестве ориентировочной предельно допустимой концентрации алюминийтриалкилов и их хлоридов в воздухе рабочих помещений рекомендуются 0,001—0,0007 мг л по аэрозолю алюминия и его окиси и 0,001 лг/л по хлористому водороду [167]. Органические перекиси — высокоактивные вещества, обладающие способностью в определенных условиях легко генерировать свободные радикалы [168, 169], используются как инициаторы полимеризации, вулканизирующие агенты и для многих других целей при синтезе высокополимерных соединений. 

[c.342]

    Чувствительность метода 2 жг/ж . Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе 5 мг/м . [c.380]

    Большинство легко сжижаемых газов принадлежит к числу ядовитых веществ часть из них — цианистый водород, циан, фосфористый водород действуют смертельно даже в небольших дозах. Такие газы, как хлор, хлористый водород, двуокись серы, аммиак, сравнительно безвредные в небольших концентрациях, могут вызвать серьезное заболевание и даже смерть, если их содержание в воздухе превышает предельно допустимые концентрации. При легких отравлениях почти всеми газами рекомендуется промывать глаза и нос, полоскать рот, пить чуть теплое молоко, покой. В более серьезных случаях — вдыхание кислорода. 

[c.94]


    Выделение хлористого водорода в производственные помещения и образование тумана соляной кислоты вызывают сильное раздражение слизистых оболочек и кашель. Однако в производственных помещениях туман соляной кислоты образуется только при выделении значительных количеств хлористого водорода. При этом, чем выше содержание пара воды в воздухе, тем больше образуется тумана при одной и той же концентрации НС1 и тем слабее концентрация выделяющейся соляной кислоты. Например, при Г = 203°К и давлении пара воды в воздухе 1173 н-м (8,8 мм рт. ст.), что соответствует относительной влажности 50%, конденсация соляной кислоты в объеме с образованием тумана наступает при давлении хлористого водорода 133 н-м- (1 мм рт. ст., или около 2 г-м- при нормальных условиях). Концентрация кислоты в каплях тумана составляет около 20%. Предельно допустимая концентрация НС1 в воздухе рабочей зоны производственных помещений составляет 6 мг-м , поэтому туман соляной кислоты образуется в производственном помещении только в тех случаях, когда концентрация НС1 превышает предельно допустимую в сотни раз ( 200 раз). 
[c.253]

    Поливинилхлорид при температуре выше 150° С выделяет хлористый водород, хлорорганические соединения и окись углерода. Эти вещества раздражают слизистые оболочки глаз и носа. Одновременно при получении поливинилхлоридных покрытий в воздух испаряется значительное количество пластификаторов и продуктов их термоокислительного распада. Предельно допустимая концентрация наиболее употребительного пластификатора — дибутилфта-лата в рабочих помещениях не превышает 1 мг/м . [c.234]

    Хлористый водород НС1—бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Молекулярный вес 36,47. Молярный объем 22,24 л. Плотность по воздуху при 0° и 760 мм. рт. ст. 1,2686. Вес одного литра газа при 0° и 760 мм рт. ст. 1,6400 г. Температура кипения —83,7° температура плавления —112°. Хлористый водород ядовит. Предельно допустимая концентрация в воздухе 0,01 мг/л. 

[c.232]

    Соляная кислота НС1. Водный раствор хлористого водорода. Уд. вес чистой НС1 1,17—1,18. Содержание газообразного хлористого водорода 35—38%. Это-бесцветная или слегка желтоватая жидкость с резким запахом, дымит на воздухе. Предельно допустимая концентрация в воздухе 0,005 мг/л. [c.154]

    Хлористый водород — бесцветный газ, хорошо и в больших количествах растворяется в воде с образованием соляной кислоты. Хлористый водород уже в небольших концентрациях вызывает раздражение слизистых оболочек, особенно носоглотки. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе 5 мг/м . Первая помощь при вдыхании хлористого водорода — удаление пострадавшего в спокойное теплое помещение с чистым воздухом, втягивание через нос и полоскание горла 2%-ным раствором двууглекислой соды. При попадании концентрированной соляной кислоты на кожу нужно вначале смыть ее обильным количеством воды, затем пораженное место промыть 2%-ным раствором двууглекислой соды. Для работы с хлористым водородом применяют фильтрующие противогазы марок В и М. 

[c.193]

    Предельно допустимые концентрации вредных веществ для прессового производства следующие 0,005 мг/л фенола 0,001 мг/л формальдегида 0,01 мг/л хлористого водорода 0,001 мг/л хлора 3 мг/м пыли стеклянного и минерального волокна 6 мг/м- пыли фенольных пресс-порошков и аминопластов и т. д. [c.86]

    Концентрированные растворы соляной кислоты опасны и вредны вследствие выделения хлористого водорода и активного хлора и возможности ожогов кожи и слизистых оболочек, а также поражения дыхательных органов. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода 5 мг/м . 

[c.69]

    Дикарбоновые кислоты, особенно малеиновый и фталевый ангидриды, обладают резким раздражающим действием при попадании на кожу. Пары их токсичны (предельно допустимая концентрация 1 мг/м ), раздражающе действуют на слизистую оболочку глаз и дыхательных путей. Более опасны хлорангидриды кислот из-за своей высокой реакционности и выделения хлористого водорода при контакте с водой, влагой воздуха и кожей. [c.251]

    Хлористый водород. При нормальных условиях хлористый водород находится в газообразном состоянии. При вдыхании хлористого впдорода наступает раздражеиие верхних дыхательных путей и лаже удушье. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе производственных номеш с-ний составляет 5 мг/м . 

[c.419]

    Хлористый водород и соляная кислота. Хлористый водород — бесцветный газ, с резким, удушливым запахом. На воздухе дымит вследствие образования с парами воды капелек кислоты. Негорюч, невзрывоопасен. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе производственных помещений 5 мг/м . [c.169]

    Во влажном воздухе хлористый водород образует густой туман — мельчайшие капли соляной кислоты. Вредно действует на организм,раздражая и разрушая слизистые оболочки и дыхательные пути. Предельно допустимая концентрация НС1 в воздухе рабочей зоны производственных помещений 0,01 лгг/л ( I2—0,001 мг л). [c.364]

    Соляная кислота — раствор хлористого водорода в воде, дымящий на воздухе. Пары соляной кислоты сильно раздражают верхние дыхательные пути и слизистые оболочки глаз длительное воздействие может вызвать катар дыхательных путей, помутнение роговицы глаз. При воздействии на кожу соляная кислота вызывает ожоги и раздражение. Она требует осторожного обращения и применения необходимых мер защиты органов дыхания, зрения и кожных покровов. Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе производственных помещений 5 мг/м . 

[c.43]

    Отравление промышленными ядами. В производстве кремнийорганических продуктов используют вещества, вредно влияющие на организм. Это — неорганические соединения (аммиак, хлор, едкий натр и едкое кали, серная и соляная кислоты, хлористый водород) и органические вещества разных классов — углеводороды (метан, бензол и его гомологи), хлорпроизводные (метил- и этилхлорид, хлорбензол), спирты (метиловый, этиловый, н-бутиловый, гидрозит), ацетон, пиридин и др. Сведения об их токсичности, взрывоопасности, влиянии на организм, а также предельно допустимые концентрации газов и паров в воздухе рабочей зоны имеются в специальной литературе. Подробная характеристика кремнийорганических веществ приведена в табл. 29. 

[c.298]

    Предельно допустимая концентрация хлористого водорода и соляной кислоты 0,01 мг л (Санитарные нормы проектирования промышленных предприятий, НСП 101-51). [c.54]

    При 30° жидкий хлористый водород растворяет меньше 0,1% воды. Молярная теплоемкость газообразного хлористого водорода при постоянном давлении вычисляется по формуле Ср = 6,5 + 0,001 Т. Во влажном воздухе хлористый водород образует густой туман — мельчайшие капли соляной кислоты. Вредно действует на организм, раздражая и разрушая слизистые оболочки и дыхательные пути. Предельно допустимая концентрация НС1 в воздухе рабочей зоны производственных помещений 0,01 мг/л ( 12 — 0,001 мг/л). [c.237]

    Соляная кислота широко применяется в промышлеппости, в частности в химической промышленности, в технике, в медицине. В виде так называемой паяльной кислоты — раствора хлорида цинка в соляной кислоте — встречается в быту и неоднократно являлась причиной отравлений. В воздухе производственных помещений соляная кислота находится либо в виде хлористого водорода, либо в виде тумана . Предельно допустимая концентрация 0,01 мг/л. [c.363]


    Кетоны, уксусный ангидрид, сернистый ангидрид, хлористый водород, уксусная кислота и пары сложных эфиров в концентрациях, превышающих предельно допустимые в 10 раз и более [c.239]

    Из-за отсутствия коррозионноустойчивых. материалов в воздушную среду поступают аэрозоли конденсации монохлоруксусной и серной кислот, хлористого водорода, сернистый газ и трихлорэтилен в концентрациях, порою превышающих предельно допустимые. [c.268]

    Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе про изводствеиных помещений составляет 0,01 мг/л. [c.280]

    При систематическом воздействии триизобутилалюминия и диизобутилалюминийхлорида (отдельно) в концентрациях соответственно 0,17—0,03 и 0,47—0,017 мг/л (по аэрозолю) в течение длительного периода (до 5 месяцев) у белых К)рыс замедлялся прирост тела, изменялись функциональное состояние нервной системы (при действии диизобутилалюминийхлорида) и некоторые морфо логические показатели периферической крови. В качестве ориентировочной предельно допустимой концентрации алюминийтриалкилов и алкилалюминийхлоридов в воздухе рабочих помещений рекомендуется концентрация 0,001—0,007 мг/л по аэрозолю алюминия и его окиси и 0,001 мг/л по хлористому водороду 5]. [c.205]

    Чувствительность метода 5 мг м . Предельно допустимая концентрация хлористого водорода в воздухе 10 мг1м . [c.263]

    Полной очистки газов в скрубберах не удается достигнуть. Поэтому на магниевых заводах очищенные газы из скрубберов выбрасывают через трубы высотой 120—150 м. По выходе из трубы после перемешивания с воздухом концентрация вредных примесей падает до допустимых пределов. Допускаются следующие предельные содержания веществ в атмосферном воздухе, мг1м разовые — 0,1 хлора, 1,0 хлористого водорода и [c.242]

    В период, когда выбросов пе было, концентрации токспче -ллх веществ бы. )И значительно ниже, однако превышали предельно допустимые в 2—3—4 раза. Концентрации. хлористого водорода составляли 0,07—0,96 мг/л, монохлоруксусной кислоть  [c.125]

    Хронометраж показал, что аппаратчик и его помощник выполняют одни и те же операции. Таким образом, в процессе работы они находятся в одинаковых условиях, подвергаясь комплексному ЕОЗдейстЕию различных токсических веществ (хлористый водород, пары серной кислоты, монохлоуксусной кислоты, сернистого газа) в концентрациях, превышающих предельно допустимые, при од ювременном воздействии неблагоприятных метеорологических условий. [c.126]

    Рабочие непосредственно контактируют с пылью и парами монохлоруксусной кислоты, соляной кислотой и хлористым водородом, серной кислотой и сернистым ангидридом, хлором хлорбензолом, пылью и парами парадихлорбензола, 1, 2, 4, 5-тетрахлорбензола и многими другими химическими веществами. Довольно часто концентрации этих веществ в воздухе, по данным Уфимского института гигиены и профзаболеваний, значительно превышают предельно допустимые нормы. По литературным данным, эти химические продукты способны вызывать патологию кожи. Так, от монохлоруксусной кислоты развиваются безболезненные ожоги с обширным шелушением кожи (Н. В-Лазарев). При длительном соприкосновении с серной и соляной кислотами наблюдаются гиперкератоз и диффузные омозолело- сти пальцев рук и ладоней сухость и инфильтрация кистей рук, хронические изъязвления типа прижогов Ш. А. Торсуев, М. Н. Иванов). [c.273]

    Концентрации всех компонентов атмосферных загрязнений снижаются по мере удаления от нефтеперерабатывающих заводов. Так, на расстоянии 10 000 метров от заводов по сравнению с полукилометровым радиусом имело место снижение углеводородов в 2—3 раза, окиси углерода в 2,4—3 сероводорода вЗ— 4.8 сернистого газа в 1,4—2,8 хлорированных углеводородов в 1,8—1,9 хлористого водорода в 7—16 раз. Однако загрязнение атмосферы в точках, удаленных от заводов на 10 000—15000 метров, все же остается довольно значительным максимальные разовые концентрации ряда атмосферных загрязнений даже на этом расстоянии превышают предельно допустимые (сернистого газа, сероводорода). [c.499]


КИСЛОТА ХЛОРИСТОВОДОРОДНАЯ № ООН 1789 (UN1789)

1.

Идентификация химической продукции

 1.1.  Идентификация химической продукции  
 1.1.1.  Техническое наименование:  КИСЛОТА ХЛОРИСТОВОДОРОДНАЯ, соляная кислота, хлороводородная, хлористый водород.
 1.1.2  Краткие рекомендации по применению (в т.ч. ограничения по применению): КИСЛОТА ХЛОРИСТОВОДОРОДНАЯ применяется в гидрометаллургии и гальванопластике (травление, декапирование), для очистки поверхности металлов при пайке и лужении, для получения хлоридов цинка, марганца, железа и др. металлов. В смеси с поверхностно-активными веществами используется для очистки керамических и металлических изделий от загрязнений и дезинфекции. В пищевой промышленности зарегистрирована как регулятор кислотности (пищевая добавка E507). Применяется для изготовления зельтерской (содовой) воды.
  2.

Идентификация опасности (опасностей)

  2.1 Степень опасности химической продукции в целом: Класс опасности (по ГОСТ 12.1.007-76) — 2
  2.2. Гигиенические нормативы для продукции в целом в воздухе рабочей зоны:
(ПДКр.з. или ОБУВ р.з.)
5 мг/м3 (1 мг/м3 в пересчете на пары хлора)
  2.3. Сведения о маркировке (по ГОСТ 31340-13)
 2.3.1. Описание опасности: Символы: «Жидкость, выливающаяся из двух пробирок и поражающая металл и руку», «Сухое дерево и мертвая рыба», «Восклицательный знак»
Сигнальное слово: «Опасно». 
Вызывает серьезные ожоги кожи и повреждения глаз. Может вызывать раздражение дыхательных путей. Может вызывать коррозию металлов. Опасно для окружающей среды.
  3.

Информация при перевозках (транспортировании)

 3.1  Номер ООН (UN):                                                                                    в соответствии с рекомендациями ООН по перевозке опасных грузов  (типовые правила), последнее издание) Номер ООН 1789
 3.2   Надлежащее отгрузочное наименование и/или транспортное  наименование: КИСЛОТА ХЛОРИСТОВОДОРОДНАЯ
 3.3  Виды применяемых транспортных средств: Техническую синтетическую соляную кислоту в соответствии с правилами перевозки опасных грузов транспортируют: наливом в железнодорожных цистернах, упакованную в бочки и бутыли в ящиках — железнодорожным транспортом в крытых вагонах повагонными отправками, упакованную в контейнеры, бочки, бутыли — автомобильным и водным транспортом.
 3.4  Классификация опасности груза:                                                            (по ГОСТ 19433 и рекомендациям ООН по перевозке опасных грузов) По ГОСТ 19433-88 — класс 8, подкласс 8.1
классификационный шифр 8012
По рекомендация ООН, СМГС, МПОГ — класс 8, 
классификационный код  С1                               
 3.5  Транспортная маркировка:                                             (манипуляционные знаки; основные, дополнительные и информационные надписи) Знак опасности в соответствии с ГОСТ 19433 по чертежу № 8.
Транспортная маркировка по ГОСТ 14192  с нанесением манипуляционного знака «Спускать с горки осторожно» для вещества в стеклянной таре,  «Берегись ожога», манипуляционного знака «Хрупкое. Осторожно»(для стеклянной тары).
 3.6 Группа упаковки:                                                                                     (в соответствии с рекомендациями ООН по перевозке опасных грузов) II
 3.7 Аварийные карточки:                                                                        (при железнодорожных, морских и др. перевозках)  
При железнодорожных перевозках аварийная карточки № 801.
 3.8 Информация об опасности при международном грузовом сообщении:                                                                                               (по СМГС, ADR (ДОПОГ), RID (МПОГ), IMDG Code (ММОГ), ICAO/IАTA (ИКАО) и др., включая сведения об опасности для окружающей среды, в т.ч. о «загрязнителях моря») Код опасности по СМГС — 80
  4.

Правила хранения химической продукции и обращения с ней при погрузочно-разгрузочных работах

  4.1 Меры безопасности при обращении с химической продукцией  
  4.1.1 Меры безопасности и коллективные средства защиты:                             (в т.ч. система мер пожаровзрывобезопасности) Работающие с соляной кислотой должны быть обеспечены специальной одеждой: костюмами для защиты от кислот из полиэфирных тканей или сукна по ГОСТ 12.4.103, ГОСТ 27652; обувью — ботинками или кожаными сапогами по ГОСТ 12.4.137, резиновыми сапогами по ГОСТ 5375, а также другими средствами индивидуальной защиты: глаз — герметичными защитными очками по ГОСТ 12.4.013; рук — перчатками из полимерных материалов для защиты от растворов кислот по ГОСТ 20010, ГОСТ 12.4.183, специальными рукавицами для защиты от растворов кислот по ГОСТ 12.4.010, защитными дерматологическими средствами по ГОСТ 12.4.068; органов дыхания — респираторами по ГОСТ 12.4.004, противогазами по ГОСТ 12.4.121 с фильтрами марки «Е» или «B». Производственные помещения и лаборатории должны быть обеспечены общеобменной приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021, а оборудование, трубопроводы, арматура должны быть герметизированы. В местах возможного поступления аэрозоля соляной кислоты в воздухе рабочей зоны должны быть предусмотрены местные вытяжные устройства. На производственных участках должен быть запас химических веществ для нейтрализации соляной кислоты при попадании, разливе кислоты на пол и оборудование. Избегать вдыхания паров кислоты. Не допускать разбрызгивания и проливов кислоты. Приливать кислоту в воду. Для химразведки и руководителя работ — ПДУ-3 (в течение 20 минут). Для аварийных бригад — изолирующий защитный костюм КИХ-5 в комплекте с изолирующим противогазом ИП-4М или дыхательным аппаратом АСВ-2. Кислотостойкие перчатки, перчатки из дисперсии бутилкаучука, специальная обувь. При отсутствии указанных образцов: защитный общевойсковой костюм Л-1 или Л-2 в комплекте с промышленным противогазом и патроном А. При возгорании — огнезащитный костюм в комплекте с самоспасателем СПИ-20.
  4.1.2   Меры по защите окружающей среды: Защита окружающей среды должна быть обеспечена герметизацией технологического оборудования, устройством вытяжной вентиляционной системы, очистными сооружениями в местах возможного поступления в окружающую среду аэрозоля серной кислоты. Не следует допускать попадания соляной кислоты в канализацию, водоемы и почву. Места пролива (разлива) соляной кислоты должны быть обвалованы и нейтрализованы известью или содой, продукты нейтрализации должны быть отправлены на утилизацию. Для изоляции паров использовать распыленную воду. Вещество откачать из понижений местности с соблюдением мер предосторожности. Срезать поверхностный слой грунта с загрязнениями, собрать и вывезти для утилизации. Места срезов засыпать свежим слоем грунта. Промыть водой в контрольных (провокационных) целях. Место разлива изолировать песком, воздушно-механической пеной, промыть водой и не допускать попадания вещества в поверхностные воды. Проливы засыпать порошками, содержащими щелочной компонент (известняк, доломит, сода). Смыть водой с максимального расстояния. Поверхности подвижного состава промыть большим количеством воды, моющими композициями.
  4.1.3   Рекомендации по безопасному перемещению и перевозке: Бочки и бутыли при отгрузке пакетами формируют на плоских деревянных поддонах по ГОСТ 9557-87 в соответствии с требованиями ГОСТ 21650, ГОСТ 24597 и ГОСТ 26663. Масса пакета не должна превышать грузоподъемность поддона. В железнодорожном вагоне пакеты устанавливают так, чтобы вместимость (грузоподъемность) вагона была использована полностью. Допускается заливать продукт в цистерны и контейнеры с остатком соляной кислоты, если анализ остатка подтверждает соответствие его качества требованиям настоящего стандарта, В противном случае остаток соляной кислоты удаляют, а цистерну или контейнер промывают. Бочки и бутыли должны быть сухими и чистыми. Наливные люки цистерн, контейнеров и пробки бочек должны быть герметизированы резиновыми или полиэтиленовыми прокладками, как при отправке потребителям (заполненных кислотой), так и при возврате поставщику порожней тары. Горловины бутылей, укупоренные притертыми стеклянными пробками или завинчивающимися крышками, должны быть обернуты полиэтиленовой пленкой и завязаны шпагатом.
 Инструкция по упаковке P001 IBC02, P001 IBC03 LP01 R001 (категория3)
Положение по совместной упаковке MP15, MP19 (категория3) Специальные положения по перевозке грузовых мест W12 Минимальные нормы прикрытия 0-0-1-0
Транспортная категория 2, 3
  4.2   Правила хранения химической продукции  
  4.2.1 Условия и сроки безопасного хранения:                                                   (в т.ч. гарантийный срок хранения, срок годности) Техническую синтетическую соляную кислоту хранят в герметичных резервуарах изготовителя и потребителя, изготовленных из материалов, стойких к соляной кислоте в сухoм, прoхладнoм и хoрoшo прoветриваемoм месте. Хранилища соляной кислоты устраивают на открытом воздухе или в неотапливаемых складских помещениях с хорошей вентиляцией. Строительные материалы, система освещения и вентиляционная система должны быть устойчивыми к корродирующим материалам. Срок хранения продукта неограничен.
  4.2.2   Несовместимые при хранении вещества и материалы: Органические вещества, гипохлорит натрия, сильные основания, азотная кислота, хлорат натрия, некислотостойкие металлы, перманганаты. Вызывает ржавление неблагородных металлов.
  4.2.3   Материалы, рекомендуемые для тары и упаковки: Специальные гуммированные цистерны отправителя или получателя, гуммированные контейнеры, полиэтиленовые бочки вместимостью 50 дм3 и стеклянные бутыли вместимостью 20 дм3 согласно действующей нормативной документации. 
  4.3   Меры безопасности и правила хранения в быту: Не применяется
  5.

Рекомендации по удалению отходов (остатков) 

 5.1  Меры безопасности при обращении с отходами, образующимися при применении, хранении, транспортировании и др. При обращении с отходами использовать меры защиты, такие же как при обращении с исходным веществом.
 5.2 Сведения о местах и способах обезвреживания, утилизации или ликвидации отходов вещества (материала), включая тару (упаковку): Отходы нейтрализуют раствором щелочи. Газовые выбросы улавливают и нейтрализуют. Оборотная тара может быть 
использована повторно после промывки. Утилизировать содержимое/ емкость на
утвержденных станциях утилизации отходов.
 5.3 Рекомендации по удалению отходов, образующихся при применении продукции в быту: Не применяется.

Уральские метрологи разрабатывают новые методики контроля безопасности воздуха

Специалисты УНИИМ — филиала ФГУП «ВНИИМ им. Д. И. Менделеева» продолжают разработку новых методик для контроля показателей качества воздушных сред. Данные методики позволяют измерить показатели состава воздуха рабочей зоны, атмосферного воздуха, промышленных выбросов в атмосферу. Новым разработкам способствует изменение нормативной базы, регулирующей экологическую безопасность в этой сфере.

Так, в январе 2021 года в действие вступило постановление главного санитарного врача РФ о гигиенических нормативах и требованиях к обеспечению безопасности и безвредности среды обитания. Одновременно были отменены старые гигиенические нормативы, такие как ГН 2.2.5.3532-18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны», ГН 2.1.6.3492-17 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) загрязняющих веществ в атмосферном воздухе городских и сельских поселений».

Кроме того, вошли в силу СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий».

В 2020 году специалисты УНИИМ разработали пять методик измерений для определения содержания в воздушных средах следующих показателей: железо и железо в пересчете на оксид железа (III), марганец и марганец в пересчете на оксид марганца (IV), пыль (взвешенные вещества), серная кислота и соляная кислота.

С начала 2021 года ученые института разработали еще две методики измерений: массовой концентрации аммиака в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе и промышленных выбросах в атмосферу фотометрическим методом (номер в Федеральном информационном фонде по обеспечению единства измерений ФР.1.31.2021.39683) и методику измерений массовых концентраций хрома общего, хрома (VI), хрома (III), хрома общего в пересчете на триоксид хрома (хромовый ангидрид) в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе и промышленных выбросах в атмосферу фотометрическим методом (ФР.1.31.2021.40211).

Сейчас в институте работают над созданием методики определения содержания диоксида азота в воздушных средах. В перспективе ученые УНИИМ предполагают заняться разработкой методик измерений в воздушных средах массовой концентрации фенола и формальдегида (фотометрическим методом), а также щелочей (титриметрическим методом).

Аварийно химические опасные вещества

Аварийно химические опасные вещества (аммиак, хлор). Их воздействие на организм человека. Предельно допустимые и поражающие концентрации

Растет ассортимент применяемых в промышленности, сельском хозяйстве и быту химических веществ. Некоторые из них токсичны и вредны. При проливе или выбросе в окружающую среду способны вызвать массовые поражения лю­дей, животных, приводят к заражению воздуха, почвы, воды, растений. Их на­зывают аварийно химические опасные вещества(АХОВ). Определенные виды АХОВ находятся в больших количествах на предприятиях, их производя­щих или использующих в производстве. В случае аварии может произойти по­ражение людей не только непосредственно на объекте, но и за его пределами, в ближайших населенных пунктах.

Крупными запасами опасных веществ располагают предприятия химической, целлюлозно-бумажной, оборонной, нефтеперерабатывающей и не­фтехимической промышленности, черной и цветной металлургии, промыш­ленности минудобрений.

Значительные их количества сосредоточены на объектах пищевой, мясо-мо­лочной промышленности, холодильниках, торговых базах, различных АО, в жилищно-коммунальном хозяйстве.

Наиболее распространенными из них являются хлор, аммиак, сероводород, двуокись серы (сернистый газ), нитрил акриловой кислоты, синильная кислота, фосген, метилмеркаптан, бензол, бромистый водород, фтор, фтористый водо­род.

Хлор

При нормальных условиях газ желто-зеленого цвета с резким раздражающим специфическим запахом. При обычном давлении затвердевает при -101 °С и сжи­жается при -34° С. Тяжелее воздуха примерно в 2,5 раза. Вследствие этого сте­лется по земле, скапливается в низинах, подвалах, колодцах, тоннелях.

Ежегодное потребление хлора в мире достигает 40 млн. т.

Используется он в производстве хлорорганических соединений (винил хло­рида, хлоропренового каучука, дихлорэтана, хлорбензола и др.). В большинстве случаев применяется для отбеливания тканей и бумажной массы, обеззаражи­вания питьевой воды, как дезинфицирующее средство и в различных других отраслях промышленности.

Хранят и перевозят его в стальных баллонах и железнодорожных цистернах под давлением. При выходе в атмосферу дымит, заражает водоемы.

В первую мировую войну применялся в качестве отравляющего вещества уду­шающего действия. Поражает легкие, раздражает слизистые и кожу.

Первые признаки отравления — резкая загрудинная боль, резь в глазах, сле­зоотделение, сухой кашель, рвота, нарушение координации, одышка. Сопри­косновение с парами хлора вызывает ожоги слизистой оболочки дыхательных путей, глаз, кожи.

Воздействие в течение 30 — 60 мин при концентрации 100 — 200 мг/м3 опас­но для жизни.

Если все-таки произошло поражение хлором, пострадавшего немедленно вы­носят на свежий воздух, тепло укрывают и дают дышать парами спирта или воды.

При интенсивной утечке хлора используют распыленный раствор каль­цинированной соды или воду, чтобы осадить газ. Место разлива заливают ам­миачной водой, известковым молоком, раствором кальцинированной соды или каустика с концентрацией 60 —80% и более (примерный расход — 2л раствора на 1 кг хлора).

Аммиак

При нормальных условиях бесцветный газ с характерным резким запахом («нашатырного спирта»), почти в два раза легче воздуха. При выходе в атмос­феру дымит. При обычном давлении затвердевает при температуре -78°С и сжижается при -34°С. С воздухом образует взрывоопасные смеси в пределах 15 — 28 объемных процентов.

Растворимость его в воде больше, чем у всех других газов: один объем воды поглощает при 20°С около 700 объемов аммиака, 10%-й раствор аммиака посту­пает в продажу под названием «нашатырный спирт». Он находит применение в медицине и в домашнем хозяйстве (при стирке белья, выведении пятен и т.д.). 18-20%-й раствор называется аммиачной водой и используется как удобрение.

Жидкий аммиак — хороший растворитель большинства органических и не­органических соединений.

Мировое производство аммиака ежегодно составляет около 90 млн.т. Его используют при получении азотной кислоты, азотосодержащих солей, соды, мочевины, синильной кислоты, удобрений, диазотипных светокопировальных материалов. Жидкий аммиак широко применяется в качестве рабочего веще­ства (хладагента) в холодильных машинах и установках.

Перевозится в сжиженном состоянии под давлением. Предельно допустимые концентрации (ПДК) в воздухе населенных мест: среднесуточная и максималь­но разовая — 0,2 мг/м3, в рабочем помещении промышленного предприятия — 20 мг/м3. Если же его содержание в воздухе достигает 500 мг/м3, он опасен для вдыхания (возможен смертельный исход).

Вызывает поражение дыхательных путей. Признаки: насморк, кашель, зат­рудненное дыхание, удушье, учащается сердцебиение, нарастает частота пуль­са. Пары сильно раздражают слизистые оболочки и кожные покровы, вызыва­ют жжение, покраснение и зуд кожи, резь в глазах, слезотечение. При сопри­косновении жидкого аммиака и его растворов с кожей возникает обмороже­ние, жжение, возможен ожог с пузырями, изъязвления.

Если поражение аммиаком все же произошло, следует немедленно вынести пострадавшего на свежий воздух. Транспортировать надо в лежачем положе­нии. Необходимо обеспечить тепло и покой, дать увлажненный кислород. При отеке легких искусственное дыхание делать нельзя.

В случае аварии необходимо опасную зону изолировать, удалить людей и не допускать никого без средств защиты органов дыхания и кожи. Около зоны следует находиться с наветренной стороны. Место разлива нейтрализуют сла­бым раствором кислоты, промывают большим количеством воды. Если про­изошла утечка газообразного аммиака, то с помощью поливомоечных машин, авторазливочных станций, пожарных машин распыляют воду, чтобы погло­тить пары.

Зоны заражения АХОВ

В большинстве случаев при аварии и разрушении емкости давление над жид­кими веществами падает до атмосферного, АХОВ вскипает и выделяется в атмосферу в виде газа, пара или аэрозоля. Облако газа (пара, аэрозоля) АХОВ, образовавшееся в момент разрушения емкости в пределах первых 3 минут, называется первичным облаком зараженного воздуха. Оно распространяется на большие расстояния. Оставшаяся часть жидкости (особенно с температу­рой кипения выше 20°С) растекается по поверхности и также постепенно ис­паряется. Пары (газы) поступают в атмосферу, образуя вторичное облако зараженного воздуха, которое распространяется на меньшее расстояние.

Таким образом, зона заражения АХОВ — это территория, зараженная ядо­витыми веществами в опасных для жизни людей пределах (концентрациях).

Глубина зоны распространения зараженного воздуха зависит от концентрации АХОВ и скорости ветра. Например, при ветре 1 м/с за один час облако от места аварии удалится на 5 — 7 км, при 2 м/с — на 10 — 14, а при З м/с — на 16 — 21 км. Значительное увеличение скорости ветра (6-7 м/с и более) способствует его быстрому рассеиванию. Повышение температуры почвы и воздуха ускоряет ис­парение АХОВ, а следовательно, увеличивает концентрацию его над заражен­ной территорией. На глубину распространения АХОВ и величину его концент­рации в значительной степени влияют вертикальные перемещения воздуха, как мы говорим, погодные условия.

Форма (вид) зоны заражения АХОВ в значительной мере зависит от скорости ветра. Так, например, при скорости менее 0,5 м/с она принимается за окружность, при скорости от 0,6 до 1 м/с — за полуокружность, при скорости от 1,1 м/с до 2 м/ с — за сектор с углом в 90°, при скорости более 2м/с — за сектор с углом в 45°.

Надо иметь в виду, что здания и сооружения городской застройки нагреваются солнечными лучами быстрее, чем расположенные в сельской местности. По­этому в городе наблюдается интенсивное движение воздуха, связанное обычно с его притоком от периферии к центру по магистральным улицам. Это способ­ствует проникновению АХОВ во дворы, тупики, подвальные помещения и со­здает повышенную опасность поражения населения. В целом можно считать, что стойкость АХОВ в городе выше, чем на открытой местности.

Вот почему все население, проживающее вблизи химически опасного объекта, должно знать, какие АХОВ используются на этом предприятии, какие ПДК уста­новлены для рабочей зоны производственных помещений и для населенных пун­ктов, какие меры безопасности требуют неукоснительного соблюдения, какие средства и способы защиты надо использовать в различных аварийных ситуаци­ях.

Защита от АХОВ


Защитой от АХОВ служат фильтрующие промышленные и гражданские проти­вогазы, промышленные респираторы, изолирующие противогазы, убежища ГО.

Промышленные противогазы надежно предохраняют органы дыхания, глаза и лицо от поражения. Однако их используют только там, где в воздухе содер­жится не менее 18% кислорода, а суммарная объемная доля паро- и газообразных вредных примесей не превышает 0,5%.

Недопустимо применять промышленные противогазы для защиты от ни­зкокипящих, плохо сорбирующихся органических веществ (метан, ацетилен, эти­лен и др.)

Если состав газов и паров неизвестен или их концентрация выше максимально допустимой, применяется только изолирующие противогазы ИП-4 и ИП-5.

    

Коробки промышленных противогазов строго специализированы по на­значению (по составу поглотителей) и отличаются окраской и маркировкой. Некоторые из них изготавливаются с аэрозольными фильтрами, другие без них. Белая вертикальная полоса на коробке означает, что она оснащена филь­тром.

Рассмотрим несколько примеров по основным АХОВ. Для защиты от хлора можно использовать промышленные противогазы марок А (коробка ко­ричневого цвета), БКФ (защитного), В (желтого), Г (половина черная, пол­овина желтая), а также гражданские противогазы ГП-5, ГП-7 и детские.

          

А если их нет? Тогда ватно-марлевую повязку, смоченную водой, а лучше 2%-м раствором питьевой соды.

От аммиака защищает противогаз с другой коробкой, марки КД (серого цве­та) и промышленные респираторы РПГ-67КД, РУ-60МКД.

      

У них две сменных коробки (слева и справа). Они имеют ту же маркировку, что и противогазы. Надо помнить, что гражданские противогазы от аммиака не защищают. В крайнем случае надо воспользоваться ватно-марлевой повязкой, смоченной водой или 5%-м раствором лимонной кислоты.

Для защиты от АХОВ в очаге аварии используются в основном средства ин­дивидуальной защиты кожи (СИЗК) изолирующего типа, общевой­сковой защитный комплект ОЗК.

Для населения рекомендуются подручные средства защиты кожи в комплекте с противогазами. Это могут быть обычные непромокаемые накидки и плащи, а также пальто из плотного толстого материала, ватные куртки. Для ног — рези­новые сапоги, боты, калоши. Для рук — все виды резиновых и кожаных перча­ток и рукавицы.

В случае аварии с выбросом АХОВ убежища обеспечивают надежную за­щиту. Во-первых, если неизвестен вид вещества или его концентрация слиш­ком велика, можно перейти на полную изоляцию (третий режим), можно также какое-то время находиться в помещении с постоянным объемом воздуха. Во-вторых, фильтропоглотители защитных сооружений препятствуют проникно­вению хлора, фосгена, сероводорода и многих других ядовитых веществ, обес­печивая безопасное пребывание людей.

В крайнем случае при распространении газов, которые тяжелее воздуха и сте­лются по земле, как хлор и сероводород, можно спасаться на верхних этажах зда­ний, плотно закрыв все щели в дверях, окнах, задраив вентиляционные отверстия.

Выходить из зоны заражения нужно в одну из сторон, перпендикулярную на­правлению ветра, ориентируясь на показания флюгера, развевание флага или любого другого куска материи, наклон деревьев на открытой местности.

Первая помощь пораженным АХОВ

Она складывается из двух частей. Первая — обязательная для всех случаев поражения, вторая — специфическая, зависящая от характера воздействия вред­ных веществ на организм человека.

Итак, общие требования. Надо как можно скорее прекратить воздействия АХОВ. Для этого необходимо надеть на пострадавшего противогаз и вынести его на свежий воздух, обеспечить полный покой и создать тепло. Расстегнуть ворот, осла­бить поясной ремень. При возможности снять верхнюю одежду, которая может быть заражена парами хлора, сероводорода, фосгена или другого вещества.

Специфические. Например, при поражении хлором, чтобы смягчить раздра­жение дыхательных путей, следует дать вдыхать аэрозоль 0,5%-го раствора пи­тьевой соды. Полезно также вдыхать кислород. Кожу и слизистые промывать 2%-м содовым раствором не менее 15 мин. Из-за удушающего действия хлора пострадавшему передвигаться самостоятельно нельзя. Транспортируют его толь­ко в лежачем положении. Если человек перестал дышать, надо немедленно сде­лать искусственное дыхание методом «изо рта в рот».

При поражении аммиаком пострадавшему следует дышать теплыми водяными парами 10%-го раствора ментола в хлороформе, дать теплое молоко с боржоми или содой. При удушье необходим кислород, при спазме голосовой щели — тепло на область шеи, теплые водяные ингаляции. Если произошел отек легких, искусственное дыхание делать нельзя. Слизистые и глаза промывать не менее 15 мин водой или 2%-м раствором борной кислоты. В глаза закапать 2-3 капли 30%-го раствора альбуцида, в нос — теплое оливковое, персиковое или вазели­новое масло. При поражении кожи обливают чистой водой, накладывают при­мочки из 5%-го раствора уксусной, лимонной или соляной кислоты.


Т — газоанализатор паров соляной кислоты (HCl)


Газоанализатор OKA-Т-HCl

Тип: Стационарный

Анализируемые газы: HCl

Число каналов сигнализации: до 2

Звоните!


Необходимы при обеспечении безопасности в пищевой промышленности. В межповерочный период не требует обслуживания, реактивов и расходным материалов.  

Конструкция удовлетворяет требованиям ГОСТ 13320-81. Безопасность конструкции удовлетворяет требованиям ГОСТ 12.2.007.0-75

Исполнение: стационарные с цифровой индикацией показаний
Индикация показаний: ЖК – дисплей, токовый выход (0–5мА, по запросу 4–20мА)
Число датчиков [каналов] на один блок индикации: до 2 шт.
Длина кабеля между датчиком и блоком индикации: до 1200 м
Назначение: Предназначены для контроля содержания паров соляной кислоты в воздухе рабочей зоны.
Разрешительные документы: Разрешение Ростехнадзора РФ № РРС 00-38055. Сертификат и лицензия Госстандарта РФ.

Особенности:

  • низкая стоимость;
  • малые масса и габариты;
  • встроенная световая и звуковая сигнализация;
  • комплектуется блоками реле для коммутации исполнительных устройств;
  • связь с компьютером;
  • возможно исполнение без цифровой индикации

Диапазон показаний: 0 – 24 мг/м3
Диапазон измерений: 0 – 20 мг/м3
Пороги срабатывания сигнализации по каналам: 1 ПДК (5 мг/м3)
Также: обладает токовым и релейным выходом для управления внешними устройствами — включением аварийной вентиляции, сирены, клапана и т.п.
Время установления показаний по уровню 0.9, не более: 10 с
Относительная погрешность: 25,00%
Потребляемая мощность: 25 Вт
Напряжение питания: 220 В, 50 Гц
Рабочий диапазон температур: от -40° С до +50° С


Масса:

  • блока индикации — 300 г
  • блока питания и коммутации — 700 г
  • блока датчика — 300 г

Габариты:

  • блока индикации — 156x86x58 мм
  • блока питания и коммутации — 156x86x58 мм
  • блока датчика — Ø50х165 мм

Гарантийный срок 12 месяцев. Межповерочный интервал 1 год.
Комплект поставки:

  • блок индикации;
  • блок(и) датчиков;
  • блок(и) коммутации.

Стационарный газоанализатор ГАНК-4С

Температура:

от +5°С до +50°С от -50°С до +5°С (с термостатом)

Средний срок службы:

не менее 8 лет

Расчетное количество разовых измерений в год:

50 000

Продолжительность отбора пробы:

не более 15 мин

Предел основной относительной погрешности:

±20%

Предел допускаемой дополнительной погрешности:

не более 0,2 (от основной)

Потребляемая мощность газоанализатора:

не более 20 ВА

Подвод анализируемого воздуха:

Насосом

Питание/Частота:

220В / 50 Гц

Метрологическое обеспечение:

Государственная поверка, межповерочный интервал — 1 год

Масса:

не более 3,5 кг

Максимальный ток нагрузки контактов подключения аварийного выхода АВ»:

не более 5 А

Максимальное коммутируемое напряжение контактами «АВ»:

не более 250 В

Количество разовых измерений на одной химкассете:

74 000

Интерфейс:

RS-485

Диапазон измерения вредных веществ в воздухе рабочей зоны:

от 0,5 ПДК р.з. до 20 ПДК р.з.

*Давление:

от 86,0 до 106,7 кПа

Гарантия изготовителя:

1 год

Габаритные размеры газоанализатора:

250х200х150 мм

Выходной аналоговый токовый сигнал:

4-20 мА

Время прогрева газоанализатора после включения:

не более 15 мин

Влажность:

до 80% при температуре + 35 °С

Хлорхромат пиридиния (PCC)

Хлорохромовая кислота может быть получена растворением триоксида хрома в 6 M водн. соляная кислота. Добавление пиридина дает хлорхромат пиридиния. как оранжевые кристаллы.

Свойства PCC можно сравнить со свойствами PDC: это не особо гигроскопичен, стабилен, имеется в продаже и может храниться. PCC растворим во многих органических растворителях, и особенно в дихлорметане при комнатной температуре использовались в большинстве случаев, тогда как ДМФ способствует чрезмерному окислению первичных спирты в карбоновые кислоты.

PCC более кислый, чем PDC, но кислотолабильные соединения могут окисляться в присутствие ацетата натрия или других буферов, таких как карбонаты. Еще один недостаток образование вязких материалов, затрудняющих выделение продукта. Добавление целита, порошковых молекулярных сит или сульфата магния к PCC реакционные смеси окисления могут упростить обработку, поскольку соли хрома и другие побочные продукты, полученные из реагентов, откладываются на них. твердые частицы, которые затем можно легко удалить фильтрацией.

Полный обзор реагентов на основе хрома можно найти в книге, написанной Тохо и Фернндес (Окисление Спирты на альдегиды и кетоны, Springer Berlin, 2006 , 1-97.).

Внимание: Соединения хрома (VI) являются токсичен и требует осторожного обращения.


Последняя литература


Хлорхромат пиридиния — это легкодоступный, стабильный реагент, который окисляет широкий спектр спиртов до карбонильных соединений с высокой эффективностью.
Э. Дж. Кори, Дж. У. Саггс, Tetrahedron Lett., 1975 , 16 , 2647-2650.


Окисление первичных спиртов по домино дает α, β-ненасыщенные соединения с использованием комбинация PCC-NaOAc и стабилизированных реагентов Виттига.
Дж. Шет, В. Десаи, С. Тилве, Synthesis , 2004 , г. 1859-1863 гг.


Простое и количественное получение карбоновых кислот с помощью хлорхромат пиридиния (PCC), катализируемый (2 мол.%) окислением первичного спирты и альдегиды с использованием 2.2 эквивалента и 1,1 эквивалента H 5 IO 6 , соответственно, в ацетонитриле.
М. Хунзен, Синтез , 2005 , 2487-2490.


М. Хунзен, Синтез , 2005 , 2487-2490.


А. Барберо, Я. Бланко, К. Гарсия, Synthesis , 2000 , 1223-1228.


Изатины можно синтезировать из α-формиламидов с хорошими выходами в одном реакторе. внутримолекулярная реакция циклизации-окисления в присутствии пиридиния хлорхромат (PCC).Реакция протекала гладко на воздухе, предлагает широкий область субстрата и проста в эксплуатации.
К. Юэ, Ю. Ван, Л. Хай, Л. Го, Х. Инь, Ю. Ву, Synlett , 2016 , 27 , 1292-1296.


Многофункциональный модульный органокатализ позволяет просто и эффективно подход к энантиообогащенным α, β-дизамещенным γ-бутиролактонам через однореакторный последовательная реакция Михаэля-гемиацетализация-окисление. Каталитический процесс предлагает хорошую совместимость с субстратом, и продукты могут быть преобразованы в синтетически полезные молекулы.
П. Махто, Н. К. Рана, К. Шукла, Б. Г. Дас, Х. Джоши, В. К. Сингх, Орг. Lett. , 2019 , 21 , 5962-5966.

Синтез и применение [Zr-UiO-66-PDC-SO3H] Cl MOF для получения дицианометиленпиридинов химическими и электрохимическими методами

Пиридин-2,5-дикарбоновая кислота (H 2 PDC) (Merck, 95 %), Тетрахлорид циркония (ZrCl 4 ) (Sigma Aldrich, 98%), нитрат калия (KNO 3 ) (Sigma-Aldrich, 99%), муравьиная кислота (HCOOH) (Merck, 37%), этанол ( C 2 H 5 OH) (Merck, 99%), перхлорат лития (LiClO 4 ) (Merck, 99%) и другие материалы (Merck) были материалами реактивной чистоты и использовали в полученном виде без дополнительной очистки.Все растворы готовили при комнатной температуре. Известные продукты идентифицировали путем сравнения их температур плавления и спектральных данных с данными, приведенными в литературе. Для наблюдения за ходом реакции использовали пластины с силикагелем SIL G / UV 254. С модели спектрометра BRUKER Ultrashield FT-NMR (δ в м.д.) были записаны 1 H ЯМР (600 или 400 МГц) и 13 C ЯМР (151 или 101 МГц). Температуры плавления регистрировали на приборе Büchi B-545 в открытых капиллярных трубках.На приборе PerkinElmer PE-1600-FTIR регистрировали инфракрасные спектры соединений. СЭМ выполняли с использованием сканирующего электронного микроскопа для полевых публикаций, сделанного TE-SCAN. Термогравиметрия (TG), дифференциальная термогравиметрия (DTG) и дифференциальная термическая обработка (DTA) анализировались Perkin Elmer (модель: Pyris 1). BET и BJH анализировали с помощью высокоточного анализатора BELSORP-mini ii. Площадь поверхности и размер пор.

Установка для электросинтеза

Электросинтез катализатора и соединений дицианометиленпиридина проводили в самодельной неразделенной двухэлектродной ячейке.Ячейка состоит из стеклянной колбы с колпачком, содержащей раствор прекурсора, углеродной пластины в качестве рабочего электрода (100 мм × 20 мм × 5 мм) и U-образного листа нержавеющей стали в качестве вспомогательного электрода. Все эксперименты по электрохимическому синтезу проводились при комнатной температуре и давлении. Электросинтез [Zr-UiO-66-PDC-SO 3 H] Cl и производных дицианометиленпиридина осуществляли путем приложения подходящей плотности тока в течение определенного периода времени.

Химический способ получения Zr-UiO-66-PDC

В круглодонной колбе объемом 100 мл смесь пиридин-2,5-дикарбоновой кислоты (H 2 PDC) (0.366 г, 2,2 ммоль) и ZrCl 4 (0,512 г, 2,2 ммоль) с муравьиной кислотой и H 2 O (9: 1) 50 мл в качестве растворителя перемешивали при 120 ° C в течение 3 ч при кипячении с обратным холодильником 13 . По истечении этого времени суспензию фильтровали центрифугированием (2000 об / мин, 20 мин). Затем к осадку добавляли H 2 O, который отделяли центрифугированием (2000 об / мин, 20 мин, 3 цикла). Наконец, белый осадок сушили в сильном вакууме при 90 ° C с получением Zr-UiO-66-PDC (фиг. 12).

Фиг. 12

Химический синтез [Zr-UiO-66-PDC-SO 3 H] Cl в качестве функционализированного катализатора MOF.

Общая методика приготовления [Zr-UiO-66-PDC-SO

3 H] Cl

В круглодонной колбе объемом 50 мл смесь Zr-UiO-66-PDC (1,0 ммоль, 0,282 g) и хлорсульфоновую кислоту (1,0 ммоль, 0,067 мл) в сухом CH 2 Cl 2 (20,0 мл) при 0 ° C перемешивали в течение 2 часов. Затем появился осадок, который фильтровали центрифугированием (1000 об / мин, 5 мин, 2 раза) и сушили в вакууме с получением белого осадка в виде [Zr-UiO-66-PDC-SO 3 H] Cl (фиг.12).

Химический способ получения производных дицианометиленпиридина с использованием [Zr-UiO-66-PDC-SO

3 H] Cl в качестве эффективного катализатора

В круглодонной колбе на 15 мл смесь альдегида (1,0 ммоль , 0,398 г), 2-аминопроп-1-ен-1,1,3-трикарбонитрил (1,0 ммоль, 0,132 г) и малононитрил (1,1 ммоль, 0,073 г) и [Zr-UiO-66-PDC-SO 3 H] Cl (10,0 мг) в качестве катализатора перемешивали в условиях отсутствия растворителя при 100 ° C. После завершения реакции, за которым следовала ТСХ ( н- гексан: этилацетат; 7: 3), реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры.Затем к смеси добавляли 10 мл этанола и затем удаляли катализатор центрифугированием (1000 об / мин). Наконец, продукт перекристаллизовывали из EtOH (рис. 2).

Электрохимический способ получения Zr-UiO-66-PDC

В типичной методике, (0,512 г, 2,2 ммоль) тетрахлорида циркония в качестве источника катионов (0,366 г, 2,2 ммоль) пиридина-2,5 -дикарбоновую кислоту (H 2 PDC) в качестве лиганда и (0,127 г, 0,1 ммоль) нитрата калия (KNO 3 ) в качестве фонового электролита растворяли в 50.0 мл водного раствора муравьиной кислоты (H 2 O / муравьиная кислота; 1/9). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин перед электролизом (30 мА · см −2 в течение 1800 с). После электролиза раствор центрифугировали 5 мин при 5000 об / мин, осадок дважды промывали дистиллированной водой и этанолом. Затем последний MOF выдерживали в течение ночи при 100 ° C.

Электрохимический метод конвергентного парного электросинтеза дицианометиленпиридинов

Конвергентный парный электросинтез производных дицианометиленпиридинов проводили в 50 мл этанола, содержащего производные альдегида (1.0 ммоль), малононитрил (0,066 г, 1,0 ммоль), 2-аминопроп-1-ен-1,1,3-трикарбонитрил (0,132 г, 1,0 ммоль) и [Zr-UiO-66-PDC-SO 3 H ] Cl (10,0 мг) в качестве катализатора при перемешивании при 1,0 мА · см -2 . За ходом реакции следили с помощью тонкослойной хроматографии ( n -гексан; этилацетат). Кроме того, конечный продукт разделяли с помощью крупномасштабной тонкослойной хроматографии на пластине силикагеля.

Характеристика продуктов

6-Амино-2- (дицианометилен) -4-фенил-1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (1a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .: 280–283 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3374, 3306, 3215, 2218, 2191, 1642. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,80 (с, 3H), 7,60-7,53 (м, 3H), 7,48 (д, J = 1,3 Гц, 2H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 160,5, 160,4, 157,8, 135,3, 129,7, 128,4, 128,3, 116,2, 115,9, 85,4, 80,7, 43,6 (см. SI).

6-амино-4- (4-хлорфенил) -2- (дицианометилен) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (2a)

Желтое твердое вещество; Т. пл .: 290–262 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3363, 3302, 3211, 2228, 2217, 2191, 1645. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,59 (д, J = 8,4 Гц, 2H), 7,46 (д, J = 8,4 Гц, 2H), 6,52 (с, 3H ). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 161,6, 159,5, 158,5, 134,9, 134,9, 130,8, 129,1, 116,8, 116,5, 85,6, 81,0, 44,2 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (п-толил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (3a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3483, 3371, 3202, 2213, 2200, 2171, 1620. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,29 (с, 4H), 6,87 (с, 2H), 2,38 (с, 3H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,7, 159,7, 158,7, 139,0, 132,8, 128,9, 128,3, 116,9, 116,6, 85,0, 80,3, 20,9 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (3-нитрофенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (4a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .: 316–318 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3438, 3339, 3213, 2197, 2181, 1657, 1556, 1352. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 8,38 — 8,35 (м, 1H), 8,33 — 8,30 (м, 1H), 7,93 (д, J = 7,7 Гц, 1H) , 7,83 (т, J = 8,0 Гц, 1H), 7,05 (с, 2H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 163,0, 159,0, 157,9, 148,0, 137,8, 135,9, 130,8, 124,8, 123,9, 117,1, 116,9, 85,3, 80,7, 44,3 (см. SI) .

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (4-гидроксифенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (5a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3342, 3227, 2183, 1652, 1553. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 9,85 (с, 1H), 7,23 (д, J = 8,5 Гц, 2H), 6,89 — 6,78 (м, 4H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 163,4, 160,1, 159,3, 159,1, 130,6, 126,6, 117,7, 117,3, 115,5, 85,6, 80,7, 43,6 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (4-нитрофенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (6a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3336, 2196, 1655, 1556, 1508, 1360. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 8,35 (d, J = 8,7 Гц, 2H), 7,74 (d, J = 8,7 Гц, 2H), 7,05 (с , 2Н). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,9, 159,0, 158,3, 148,5, 142,9, 130,7, 124,1, 116,9, 116,7, 85,0, 80,4, 44,3 (см. SI).

6-амино-4- (2-хлорфенил) -2- (дицианометилен) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (7a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3438, 3342, 3231, 2195, 2164, 1636, 1557. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,61 (dd, J = 7,9, 1,3 Гц, 1H), 7,50 (td, J = 7,7, 1,9 Гц, 1H) , 7,47 (тд, Дж = 7,5, 1,4 Гц, 1H), 7,40 (дд, Дж = 7,4, 1,8 Гц, 1H), 7,00 (с, 2H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,7, 158,9, 157,9, 135,5, 131,6, 131,4, 130,7, 130,0, 128,0, 116,6, 116,3, 86,0, 81,1, 44,0 (см. SI) .

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (3-этокси-4-гидроксифенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (8a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .: 333–335 ° С; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3431, 3342, 3236, 2198, 2165, 1649, 1554. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 9,38 (с, 1H), 6,97 — 6,94 (м, 1H), 6,87 (д, J = 8,1 Гц, 1H), 6,85 — 6,78 (м, 3H), 4,06 (кв, J, = 7,0 Гц, 2H), 1,36 — 1,33 (м, 3H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 163,3, 160,1, 159,3, 148,6, 146,5, 126,8, 122,1, 117,8, 117,4, 115,7, 114,6, 85,6, 80,8, 64,3, 43,6, 15,1 (См. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -1,2-дигидро- [4,4′-бипиридин] -3,5-дикарбонитрил (9a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3443, 3345, 3224, 2211, 2195, 2175, 1650, 1569. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 8,72 (d, J = 5,7 Гц, 2H), 7,46 (d, J = 4,4 Гц, 2H), 7,04 (с , 2Н). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,9, 159,0, 157,7, 150,3, 144,2, 123,6, 116,9, 116,6, 84,7, 80,1, 44,3 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (тиофен-2-ил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (10a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3481, 3345, 3211, 2213, 2189, 2163, 1624, 1555. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,82 (d, J = 4,9 Гц, 1H), 7,37 (d, J = 3,5 Гц, 1H), 7,23 — 7,18 (м, 1H), 6,97 (с, 2H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 163,4, 159,3, 152,2, 135,2, 130,4, 129,6, 127,9, 117,3, 116,9, 85,8, 81,0, 44,2 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (2-нитрофенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (11a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3437, 3341, 3230, 2218, 2195, 1637, 1560, 1517, 1351. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 8,27 (d, J = 8,2 Гц, 1H), 7,92 (т, Дж = 7,5 Гц, 1H), 7,80 (т , J = 7,9 Гц, 1H), 7,60 (д, J = 7,5 Гц, 1H), 7,05 (с, 2H). 13 C ЯМР (151 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 170,8, 162,6, 158,8, 158,1, 147,3, 135,2, 131,8, 131,6, 131,3, 125,4, 116,6, 116,4, 84,9, 80,2, 60,2, 44,1 , 21.2, 14.6 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (3,4-дигидроксифенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (12a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3457, 3334, 3225, 2197, 2168, 1650, 1560. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 9,33 (с, 1H), 9,26 (с, 1H), 6,80 (д, J = 8,0 Гц, 3H), 6,77 (с , 1H), 6,67 (д, J = 8,1 Гц, 1H) (см. SI).

6-амино-2- (дицианометил) -4- (3,4-диметоксифенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (13a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .: 332–335 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3504, 3489, 3374, 2216, 2194, 2172, 1613, 1551. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7 .07 (д, Дж = 8,3 Гц, 1H), 7,03 (д, Дж = 2,1 Гц, 1H), 6,97 (дд, J = 8,2, 2,1 Гц, 1H), 6,88 (с, 2H) , 3,82 (с, 3H), 3,79 (с, 3H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,7, 159,3, 158,8, 149,6, 148,0, 127,7, 121,3, 117,1, 116,7, 112,2, 111,2, 85,1, 80,3, 55,5, 55,4, 43,1 , 40,0 (см. SI).

6′-Амино-2 ‘- (дицианометилен) -1′, 2′-дигидро- [3,4’-бипиридин] -3 ‘, 5’-дикарбонитрил (14a)

Коричневое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3389, 3317, 3161, 2209, 2189, 2156, 1654, 1577, 1514. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 8,79 — 8,47 (м, 2H), 7,91 (dt, Дж, = 7,9, 2,0 Гц, 1H), 7,55 (dd, Дж = 7,9, 4,9 Гц, 1H), 7,03 (с, 2H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,52, 158,57, 156,38, 150,38, 148,47, 136,39, 131,89, 123,40, 116,65, 116,43, 85,08, 80,40, 40,03 (см. SI).

6-амино-4- (4-бромфенил) -2- (дицианометилен) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (15a)

Белое твердое вещество; Т.пл .: 330–332 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3451, 3339, 3224, 2214, 2194, 2170, 1674, 1572, 1511. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,77-7,64 (м, 2H), 7,46-7,30 (м, 2H), 6,97 (с, 2H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 162,5, 158,5, 158,5, 135,0, 131,4, 130,6, 123,0, 116,7, 116,4, 84,8, 80,1, 40,0 (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (3-гидроксифенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (16a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3476, 3330, 3218, 2202, 2171, 1625, 1548. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 9,72 (с, 1H), 7,28 (т, J = 7,8 Гц, 1H), 6,94 — 6,84 (м, 3H), 6,77 (д, Дж, = 7,5 Гц, 1H), 6,73 (с, 1H) (см. SI).

6-амино-2- (дицианометилен) -4- (4-фторфенил) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил (17a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .: 324–326 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3449, 3374, 3309, 3216, 2212, 2194, 2171, 1646. 1 H ЯМР (600 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7 .51 — 7,45 (м, 2H), 7,34 (т, J = 8,6 Гц, 2H), 6,97 (с, 2H) (см. SI).

4,4 ‘, 4’ ‘- (((1,3,5-Триазин-2,4,6-триил) трис (окси)) трис (бензол-4,1-диил)) трис (6- амино-2- (дицианометилен) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил) (18a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3504, 3374, 3224, 2215, 2194, 2166, 1613, 1551. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,53 (td, J = 8,5, 4,3 Гц, 1H), 7,49 — 7,41 (м, 2H), 7.38 (д, J = 8,6 Гц, 1H), 6,95 (с, 1H), 6,91 (с, 1H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 173,3, 163,2, 159,2, 159,1, 153,2, 152,5, 133,9, 132,5, 130,6, 130,1, 122,0, 121,7, 120,6, 117,3, 117,0, 85,5 , 80,8, 40,5, 40,3, 40,1 (см. SI).

4,4 ‘- (1,4-Фенилен) бис (6-амино-2- (дицианометилен) -1,2-дигидропиридин-3,5-дикарбонитрил) (19a)

Желтое твердое вещество; Т.пл .:> 350 ° C; ИК (KBr): υ (см -1 ) = 3395, 3334, 3228, 2192, 2158, 1650, 1549, 1429. 1 H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 7,55 (с, 1H), 6,94 (с, 1H). 13 C ЯМР (101 МГц, ДМСО- d 6 ) δ 159,2, 144,3, 139,6, 135,2, 135,0, 134,8, 132,4, 131,5, 129,1, 128,9, 126,5, 126,4, 121,7, 121,2, 120,1, 119,6 , 118.4, 116.8, 111.1, 111.0, 110.8, 102.8, 42.3 (см. SI).

Инактивация киназы 2 пируватдегидрогеназы митохондриальными реактивными формами кислорода

J Biol Chem. 2012 Oct 12; 287 (42): 35153–35160.

Томас Р. Херд

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Великобритания

Ивонн Коллинз

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

Ирина Абакумова

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Великобритания

Эдвард Т. Чучани

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

Бартломей Барановски Из

Отделение митохондриальной биологии, Совет медицинских исследований, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

Ян М.Fearnley

Из отдела митохондриальной биологии, Совет медицинских исследований, Кембридж CB2 0XY, Великобритания

Трейси А. Прайм

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

Майкл П. Мерфи

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Великобритания

Эндрю М. Джеймс

Из отдела митохондриальной биологии, Совет медицинских исследований, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

Из отдела митохондриальной биологии, Медицинский Исследовательский совет, Кембридж CB2 0XY, Соединенное Королевство

5 Кому следует направлять корреспонденцию: Отделение митохондриальной биологии Совета медицинских исследований (MRC), Wellcome Trust / MRC Building, Hills Rd., Кембридж CB2 0XY, Великобритания, тел .: 44-1223-252900; Факс: 44-1223-252905; Электронная почта: [email protected]

1 Оба автора внесли равный вклад в эту работу.

2 Текущий адрес: Департамент клеточной биологии, Медицинский институт Говарда Хьюза (HHMI) и Центр биологии и медицины Киммела Института Скирбола, Медицинская школа Нью-Йоркского университета, Нью-Йорк, 10016.

3 Текущий адрес: Отделение патологии, Институт невропатологии, Университетская клиника Цюриха, Шмельцбергштрассе 12, 8091 Цюрих, Швейцария.

4 Текущий адрес: UCL Cancer Institute и Samantha Dickson Brain Cancer Unit, University College London, Paul O’Gorman Bldg., Gower St., London WC1E 6BT, United Kingdom.

Поступила 11 июля 2012 г .; Пересмотрено 17 августа 2012 г.

Авторские права © 2012 Американского общества биохимии и молекулярной биологии, Inc. Эта статья цитируется в других статьях в PMC.
Дополнительные материалы

Дополнительные данные

GUID: 77FD8BEC-B05D-4F35-BA9E-54E3488C2372

GUID: 831753BE-8E0F-401A-ADE8-7420667BA946

Abstract

Активные формы кислорода являются побочными продуктами митохондриального дыхания и, следовательно, потенциальными регуляторами митохондриальной функции.Пируватдегидрогеназа киназа 2 (PDHK2) ингибирует комплекс пируватдегидрогеназы, тем самым регулируя вход углеводов в цикл трикарбоновой кислоты (TCA). Здесь мы показываем, что активность PDHK2 подавляется низким уровнем перекиси водорода (H 2 O 2 ), генерируемой дыхательной цепью. Это происходит за счет обратимого окисления цистеиновых остатков 45 и 392 на PDHK2 и приводит к увеличению активности комплекса пируватдегидрогеназы. H 2 O 2 происходит из супероксида (O 2 ), и мы показываем, что условия, которые ингибируют PDHK2, также инактивируют фермент цикла TCA, аконитазу.Эти данные позволяют предположить, что в условиях высокой митохондриальной продукции O 2 ˙̄ , что может происходить при избытке питательных веществ и низкой потребности в АТФ, увеличение O 2 ˙̄ и H 2 O 2 может обеспечивать сигналы обратной связи для модуляции митохондриального метаболизма.

Ключевые слова: Регуляция метаболизма, митохондрии, митохондриальный метаболизм, активные формы кислорода (АФК), редокс-сигнализация, пируватдегидрогеназа киназа 2

Введение

митохондриальные АФК 6 продукция чувствительна к мембранному потенциалу и окислительно-восстановительному состоянию переносчики электронов НАДН и кофермент Q (1).Следовательно, окислительно-восстановительные изменения митохондриальных белков в ответ на АФК, супероксид (O 2 ) и перекись водорода (H 2 O 2 ) могут координировать функцию митохондрий при изменении предложения субстрата, потребности в АТФ. , утечка протонов, поглощение кальция или концентрация кислорода (1, 2). O 2 ˙̄ может напрямую инактивировать белки железосерного центра и превращается в H 2 O 2 супероксиддисмутазой марганца (1, 3).Впоследствии H 2 O 2 обратимо модифицирует активность белка, изменяя окислительно-восстановительное состояние чувствительных остатков цистеина (2, 4, 5). H 2 O 2 модифицирует целевые тиолы цистеина напрямую с образованием сульфеновой кислоты или косвенно, через пероксиредоксины или через пулы глутатиона (GSH) или тиоредоксина (2, 5). Сигналы АФК также генерируются НАДФН-оксидазами посредством активации рецепторов клеточной поверхности, таких как рецепторы ангиотензина II, фактора некроза опухоли-α или инсулина (4, 6, 7).

Чтобы идентифицировать сайты митохондриальной окислительно-восстановительной регуляции с помощью H 2 O 2 , мы разработали протеомный метод, окислительно-восстановительный гель-электрофорез, для скрининга митохондриальных тиоловых белков, которые реагировали с физиологически вероятными уровнями H 2 O 2 (3). Небольшая группа белков была последовательно модифицирована 2,5 мкм H 2 O 2 или аналогичным уровнем эндогенного H 2 O 2 , продуцируемого обратным транспортом электронов (RET) в комплексе I (3).В эту группу входила пируватдегидрогеназа киназа 2 (PDHK2), главный регулятор пируватдегидрогеназного комплекса (PDC) (3, 8). PDC состоит из трех ферментов: пируватдегидрогеназы (PDH, E1), дигидролипоамидацетилтрансферазы (E2) и дигидролипоамиддегидрогеназы (E3), которые катализируют превращение пирувата в ацетил-КоА. Таким образом, активность PDC определяет скорость входа пирувата в цикл TCA, а затем в окислительное фосфорилирование или синтез жирных кислот (9). Активность PDC в первую очередь регулируется посредством фосфорилирования (инактивации) и дефосфорилирования (активации) PDH по сериновым остаткам 293, 300 и 232 субъединицы E1α (10).Фосфорилирование любого из этих сайтов приводит к ингибированию PDC (8), а у млекопитающих фосфорилирование регулируется четырьмя изоформами PDHK и двумя фосфатазами (9, 11, 12). PDHK2 является повсеместно экспрессируемой формой PDHK и, как полагают, оказывает краткосрочный контроль над активностью PDC.

Наше открытие окислительно-восстановительных тиолов на PDHK2 предполагает, что окислительно-восстановительная регуляция активности PDHK2 может контролировать вход пирувата в цикл TCA. Здесь мы исследовали, регулируют ли H 2 O 2 тиоловые модификации PDHK2 PDC и влияют ли на метаболизм углеводов в митохондриях.Мы обнаружили, что низкие микромолярные концентрации H 2 O 2 ингибируют активность PDHK2 путем модификации остатков цистеина 45 и 392, тем самым уменьшая фосфорилирование PDC и увеличивая поток через PDC. Такие же низкие уровни АФК также инактивировали аконитазу, предполагая, что митохондриальные АФК могут модулировать несколько участков митохондриального метаболизма углеводов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРОЦЕДУРЫ

Митохондриальные препараты и инкубации

Митохондрии сердца крысы получали гомогенизацией в STEB (сахароза 250 мм, трис-HCl 5 мм, EGTA 1 мм, 0.БСА без 1% жирных кислот, pH 7,4) с использованием смесителя ULTRA-TURRAX с последующим дифференциальным центрифугированием (3). Если не указано иное, инкубация проводилась при 1 мг митохондриального белка × мл -1 при 37 ° C с осторожным перемешиванием в SHE (250 мм сахароза, 40 мм HEPES, 1 мм EGTA, pH 7,4) с глутаматом 5 мм / 5 мм. малат. RET индуцировали путем инкубации в SHEB (SHE с 0,01% BSA, не содержащим жирных кислот) и 10 мМ сукцината в качестве субстрата. RET предотвращали либо добавлением 4 мкг × мл -1 ротенона или 400 нм карбонилцианида 4- (трифторметокси) фенилгидразона (FCCP), либо отсутствием BSA.Дополнительные подробности доступны в дополнительном материале.

Создание мутаций PDHK2

Homo sapiens PDHK2, включая его N-концевую митохондриальную целевую последовательность, амплифицировали с помощью ПЦР из клона из коллекции генома млекопитающих (Open Biosystems, MHS1011-26) (таблица S2). Продукты ПЦР расщепляли и лигировали в вектор pcDNA5 / FRT / TO, содержащий С-концевые теги FLAG и STREP2. Затем были получены точечные мутации цистеина в аланин перед трансфекцией в клетки HEK293 (Flp-In TM -293, Invitrogen) электропорацией.PDHK2 была сверхэкспрессирована с использованием доксициклина и системы, индуцируемой тетрациклином, от Invitrogen (Flp-In TM T-REx TM ). Клетки HEK293 культивировали при 37 ° C в среде DMEM в увлажненной атмосфере, состоящей из 95% воздуха, 5% CO 2 . За 24 ч до измерения фосфорилирования PDC или клеточного дыхания пируват исключили из культуральной среды, если не указано иное. Дополнительные подробности доступны в дополнительном материале.

PDHK2 и измерения аконитазы

Окислительно-восстановительное состояние PDHK2 измеряли путем блокирования восстановленных тиолов с помощью N -этилмалеимида (NEM), восстановления окисленных тиолов дитиотреитолом (DTT) и алкилирования их малеимидом, конъюгированным с полиэтиленгликолем. PEG) (Iris Biotech GmbH) в соответствии с A (13).Образцы анализировали методом иммуноблоттинга. Антитело против PDHK2 (AP7039b, Abgent) использовали для обнаружения PDHK2 в митохондриях сердца, а антитело против FLAG (мышиное моноклональное, Sigma F1804) использовали для обнаружения FLAG-меченного PDHK2 в клетках HEK293. Изолированный очищенный PDHK2 обнаруживали окрашиванием полиакриламидных гелей кумасси синим (таблица S1). Активность PDHK оценивали по начальной скорости включения [ 32 P] фосфата из [γ- 32 P] АТФ в экзогенный PDC свиньи. Фосфорилирование PDC оценивали иммуноблоттингом с использованием антител Calbiochem®, специфичных для PDC, фосфорилированных по Ser-232 (сайт 3) (AP1063), Ser-293 (сайт 1) (AP1062) и Ser-300 (сайт 2) (AP1064) Субъединица E1α (14).Общий PDC определяли с использованием антитела против субъединицы E1α (A-21323, Sigma). Активность аконитазы измеряли, как описано ранее (15). Дополнительные подробности доступны в дополнительном материале.

Тиолы PDHK2 были обратимо окислены в изолированных митохондриях сердца крысы низкими концентрациями H 2 O 2 . A , измерение окислительно-восстановительного состояния PDHK2. Митохондрии обрабатывали SDS и NEM для дериватизации всех восстановленных тиолов. NEM удаляли, а окисленные тиолы восстанавливали с помощью DTT и реагировали с малеимидом, конъюгированным с полимером полиэтиленгликоля 2 или 5 кДа (Mal-PEG).PDHK2 оценивали с помощью SDS-PAGE и иммуноблоттинга с использованием антитела, специфичного к PDHK2. B и C , низкие уровни менадиона или H 2 O 2 окисляют тиолы PDHK2. Митохондрии инкубировали с менадионом или H 2 O 2 в течение 1 мин. MW , маркеры молекулярной массы. D , RET окисляет тиолы PDHK2. Митохондрии подвергали воздействию RET в течение 5 мин. E , PDHK2 обратимо окисляется H 2 O 2 .Митохондрии обрабатывали 25 мкм H 2 O 2 . F , PDHK2 постоянно окисляется менадионом. Митохондрии обрабатывали менадионом 5 мкм.

Измерения дыхания

Выделенные митохондрии сердца крысы (0,5 мг × мл -1 ) инкубировали в SHEB с 10 мм сукцинатом для индукции RET. RET предотвращали при параллельных инкубациях путем включения 400 нм FCCP или исключения BSA. Через 5 мин добавляли малонат 20 мм, чтобы предотвратить дальнейшее окисление сукцината, вместе с FCCP, если он еще не присутствует.Затем измеряли несвязанное дыхание при 37 ° C с использованием кислородного электрода (Rank Brothers Ltd., Боттишем, Кембридж, Великобритания) после добавления 10 мм глютамата / малата или 10 мм пирувата.

Клеточные линии с избыточной экспрессией

PDHK2 инкубировали до ~ 80% слияния в 24-луночных планшетах с морским коньком, покрытых поли-d-лизином, перед добавлением 50 нг × мл -1 доксициклина в течение 24 часов. Культуральную среду заменяли буфером для анализа морского конька (3,5 мМ KCl, 120 мМ NaCl, 1,8 мМ CaCl 2 , 0.4 мм KH 2 PO 4 , 1,2 мм Na 2 SO 4 , 20 мм Hepes, 2 мм Mg 2 SO 4 , 0,4% (мас. / Об.) BSA, pH 7,4), содержащий 15 мМ глюкозы и 50 нг × мл -1 доксициклина и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C. Потребление кислорода клетками измеряли с помощью анализатора внеклеточного потока Seahorse XF24 (Seahorse Bioscience). Было предпринято четыре начальных цикла измерения для уравновешивания планшета, за которыми следовали восемь циклов измерения без добавления, H 2 O 2 или дихлоруксусной кислоты (DCA).За этим последовали четыре цикла измерения с 4 мкг × мл -1 ротенона и 10 мкМ антимицина для ингибирования митохондриального дыхания. Дополнительные подробности доступны в дополнительном материале.

РЕЗУЛЬТАТЫ

H
2 O 2 Обратимо окисляет тиолы на PDHK2 в изолированных митохондриях

Протеомный скрининг митохондрий сердца на белки, чувствительные к H 2 O 2 предположил, что PDHK2 имеет по крайней мере один тиол, который модифицируется низкими уровнями H 2 O 2 (3).PDHK2 имеет четыре остатка цистеина, поэтому мы разработали процедуру иммуноблоттинга, чтобы визуализировать количество и соотношение восстановленных тиолов к окисленным на PDHK2 ( A ) (13). Мы подвергли изолированные митохондрии воздействию менадиона окислительно-восстановительного цикла ( B ), который постоянно генерирует митохондриальный O 2 ˙̄ , который дисмутируется до H 2 O 2 (16) или болюсного H 2 O 2 ( С ). В отсутствие окислителя PDHK2 находился в значительной степени в восстановленной форме ( B и C ) с идентичной молекулярной массой PDHK2, обработанной только NEM (дополнительный рис.S1). Воздействие менадиона или самого H 2 O 2 приводило к дозозависимой потере восстановленного PDHK2 и образованию более высокомолекулярной окисленной формы PDHK2 (, B и C ). Важно отметить, что физиологически приемлемые концентрации H 2 O 2 , продуцируемые без ингибиторов посредством RET в комплексе I (1), также приводят к ~ 25% окислению PDHK2 ( D ). Чтобы окисление тиола регулировало PDHK2, его следует легко обратить, как только концентрация H 2 O 2 вернется к базовым уровням.Митохондрии инкубировали с 25 мкм H 2 O 2 , и окислительно-восстановительное состояние PDHK2 измеряли по мере метаболизма H 2 O 2 ( E ). Через 10-15 минут PDHK2 в основном вернулся в свое восстановленное состояние ( E ), что коррелирует со скоростью митохондриально-опосредованной деградации H 2 O 2 (2,4 ± 0,3 мкм H 2 O 2 / мин / мг белка, n = 3 среднего ± стандартное отклонение). Напротив, окисление PDHK2 менадионом не было обращено, что согласуется с его непрерывным образованием H 2 O 2 ( F ).Аналогичные эксперименты были проведены с PDHK1, PDHK3 и PDHK4 (12), и только PDHK1 содержал тиолы, которые были окислены H 2 O 2 (дополнительный рис. S2). Поскольку PDHK2 отвечает за краткосрочные метаболические реакции, мы сосредоточились на нем.

Используемые концентрации H 2 O 2 не влияли на общие тиолы митохондриального белка (3) или митохондриальный пул GSH (дополнительный рисунок S3 A ). Однако тиоредоксин 2 и пероксиредоксин III особенно чувствительны к окислению, и оба они были частично окислены низкими уровнями H 2 O 2 (дополнительный рис.S3, B и C ) (17). Таким образом, концентрация H 2 O 2 , способная обратимо окислять PDHK2, действительно влияет на другие окислительно-восстановительные белки, но обычно не окисляет митохондриальные тиолы.

H
2 O 2 Снижает активность PDHK2 в митохондриях и клетках

Чтобы определить, влияет ли окисление тиола на PDHK2 на его киназную активность, мы инкубировали митохондрии с H 2 O 2 , а затем предотвратили дальнейшее развитие киназы и фосфатазы. активности, лизируя их додецилсульфатом натрия (SDS), и использовали специфичное для фосфорилирования антитело, которое выявляет только фосфорилирование Ser-293 (сайт 1) субъединицы E1α PDH ( A ) (10, 14).В митохондриях Ser-293 (сайт 1) фосфорилировался, и инкубация с H 2 O 2 в значительной степени устраняла это ( A ). Чтобы показать, что стимуляция фосфатаз PDC не ответственна за потерю фосфорилирования PDC, митохондрии лизировали Triton X-100 в присутствии ингибитора фосфатазы NaF ( B ) (18). Включение NaF не препятствовало включению этими лизатами [ 32 P] фосфата из [γ- 32 P] АТФ в очищенный свиной PDH чувствительным к H 2 O 2 способом ( B ).Это показывает, что окислительно-восстановительная регуляция не зависит от фосфатазы. Чтобы увидеть, снижает ли H 2 O 2 также активность PDHK2 в интактных клетках, мы лизировали их в SDS и оценили фосфорилирование Ser-293 (сайт 1) в субъединице E1α PDC, как в случае A (, C и D ). В клетках HEK293 PDC фосфорилировался, и это устранялось ингибитором PDHK DCA (, C и D ) (19, 20). Фосфорилирование PDC также снижалось при низких концентрациях H 2 O 2 в течение 5 минут ( C ), и это постепенно восстанавливалось через 30 минут ( D ).Снижение фосфорилирования PDC в митохондриях и клетках, подвергшихся воздействию H 2 O 2 , согласуется с обратимым окислением тиолов на PDHK2, влияющим на статус фосфорилирования и активность PDC.

H 2 O 2 снижает фосфорилирование PDC путем ингибирования PDHK2 в митохондриях и клетках. A , фосфорилирование PDC было снижено в митохондриях, обработанных H 2 O 2 . Митохондрии инкубировали с H 2 O 2 и лизировали в SDS, а фосфорилирование PDC оценивали с использованием антитела против субъединицы PDH E1α PDC, фосфорилированного по Ser-293 ( pS293 ) (Сайт 1) (14).Блот повторно зондировали антителом ко всем формам PDH E1α. MW , маркеры молекулярной массы. B , H 2 O 2 -чувствительное фосфорилирование PDC не опосредуется фосфатазами. Митохондрии обрабатывали H 2 O 2 в течение 5 минут, а затем измеряли способность лизатов Triton X-100, ингибированных NaF, включать [ 32 P] фосфат в очищенный PDC свиньи с помощью фосфорного изображения. C , фосфорилирование PDC было снижено в клетках, обработанных H 2 O 2 .Клетки HEK293 инкубировали с H 2 O 2 в течение 5 минут и лизировали в SDS, и оценивали фосфорилирование PDH E1α. D , фосфорилирование PDC было обратимым в клетках, обработанных H 2 O 2 . Клетки HEK293 подвергали воздействию 25 мкм H 2 O 2 , после чего оценивали фосфорилирование PDH E1α.

Cys-45 и Cys-392 являются редокс-чувствительными остатками цистеина на PDHK2

PDHK2 имеет четыре остатка цистеина: Cys-45, Cys-195, Cys-212 и Cys-392, пронумерованных в соответствии с последовательностью PDHK2 зрелой крысы (21).Несмотря на неизвестную функцию, все они консервативны в PDHK2 у млекопитающих и рыбок данио, тогда как три (Cys-45, Cys-195 и Cys-212) консервативны в PDHKA, гомологе Drosophila (дополнительная фиг. S4). У млекопитающих все четыре остатка цистеина PDHK2 консервативны на PDHK1 и PDHK4, тогда как три из четырех (Cys-45, Cys-195 и Cys-212) консервативны на PDHK3 (дополнительная фигура S5). Чтобы идентифицировать остатки цистеина, окисленные H 2 O 2 , мы заменили каждый цистеин на аланин, чтобы получить пять рекомбинантных версий PDHK2: дикого типа (WT), C45A, C195A, C212A и C395A.После экспрессии в Escherichia coli и выделения мы измерили количество тиолов, окисленных на WT PDHK2 in vitro . Очищенные WT, C195A и C212A PDHK2 спонтанно давали три окислительно-восстановительные формы, соответствующие окислению нуля, одного и двух остатков цистеина ( A ). При замене Cys-45 или Cys-392 полоса PDHK2 с двумя окисленными остатками цистеина была потеряна ( A ). Таким образом, in vitro , окисляемые тиолы PDHK2 являются тиолами Cys-45 и Cys-392.

И Cys-45, и Cys-392 на PDHK2 могут быть окислены. A , очищенный WT PDHK2 содержал два цистеина, которые самопроизвольно окислялись. Очищенные меченные His WT или мутантные версии PDHK2 инкубировали без восстановителя. Редокс-формы разделяли, как в A , а затем визуализировали окрашиванием кумасси синим гелей SDS-PAGE. B , H 2 O 2 может окислять как Cys-45, так и Cys-392 в клетках. Клетки, сверхэкспрессирующие WT или мутантный FLAG-меченный PDHK2, инкубировали с 100 мкМ H 2 O 2 и затем получали, как в A , перед SDS-PAGE и иммуноблоттингом с анти-FLAG.

Формы PDHK2 WT, C45A и C392A были сверхэкспрессированы в клетках HEK293 в системе, индуцируемой тетрациклином, что позволило рекомбинантному белку развести эндогенную PDHK за 24 часа до эксперимента (дополнительный рисунок S6, A и B ). Некоторые конструкции содержали C-концевую метку FLAG для облегчения обнаружения на иммуноблотах. Все возможные тиоловые окислительно-восстановительные состояния PDHK2 можно было увидеть, когда экстракты клеток восстанавливали с помощью DTT и инкубировали с диапазоном соотношений NEM и Mal-PEG (дополнительный рис.S7 A ). Инкубация только с NEM или Mal-PEG приводила к одной полосе PDHK2, тогда как промежуточные отношения NEM / Mal-PEG приводили к пяти отдельным полосам. Объединенные образцы использовали в качестве стандартов, чтобы показать, что в клетках все четыре тиола PDHK2 дикого типа были в значительной степени восстановлены в контрольных условиях (дополнительная фигура S7 B ). Когда клетки подвергались болюсному введению H 2 O 2 ( B ) или постоянным уровням H 2 O 2 через менадион (дополнительный рис.S7 B ), PDHK2 окислялся одним или двумя цистеинами. В отсутствие Cys-45 или Cys-392 окисление PDHK2 снижалось, и ни одна из форм не содержала двух окисленных тиолов ( B ). Таким образом, в клетках PDHK2 в значительной степени восстановлен, но чувствителен к окислению как Cys-45, так и Cys-392.

Мутация Cys-45 или Cys-392 в аланин влияет на активность PDHK2 в клетках

Затем мы оценили, влияют ли мутации C45A или C392A PDHK2 на фосфорилирование Ser-293 (сайт 1) и Ser-300 (сайт 2) PDH E1α. ().Клетки, экспрессирующие PDHK2 дикого типа, могут фосфорилировать как Ser-293 (сайт 1), так и Ser-300 (сайт 2) PDH E1α, и это может ингибироваться H 2 O 2 или менадионом ( A ). Клетки, экспрессирующие форму PDHK2 C392A, также фосфорилировали Ser-293 (сайт 1) и Ser-300 (сайт 2) PDH E1α, но это фосфорилирование было в значительной степени нечувствительным к H 2 O 2 или менадиону ( A ). . Когда Cys-45 был мутирован в аланин, фосфорилирование Ser-293 (сайт 1) и Ser-300 (сайт 2) PDH E1α было слабым даже в отсутствие окислителя ( A ).Фосфорилирование как Ser-293 (сайт 1), так и Ser-300 (сайт 2) PDH E1α отменялось H 2 O 2 или менадионом в клетках, экспрессирующих C45A PDHK2. Это говорит о том, что окисление Cys-392 отвечает за окислительно-восстановительную инактивацию PDHK2, тогда как Cys-45 имеет решающее значение для максимальной активности PDHK2. Изменения фосфорилирования не являются результатом различий в количестве PDH E1α или PDHK2 ( A ).

Окисление Cys-45 или Cys-392 ингибировало активность PDHK2. A , окисление Cys-392 ингибировало фосфорилирование PDC в отсутствие пирувата. Клетки, сверхэкспрессирующие FLAG-меченный WT или мутантный PDHK2, инкубировали с 200 мкМ H 2 O 2 или 25 мкМ менадионом в течение 5 мин. Клетки лизировали перед SDS-PAGE и иммуноблоттингом против Ser-293 (сайт 1) или Ser-300 (сайт 2) -фосфорилированного PDHE1α. Мембраны повторно зондировали анти-FLAG, а затем анти-PDHE 1α. MW , маркеры молекулярной массы; pS293 , фосфорилированный Ser-293. B , конформация PDHK2 влияла на его чувствительность к окислению. Клетки, сверхэкспрессирующие FLAG-меченный WT или мутантный PDHK2, выращивали пируват с точностью ± 1 мм в течение 24 часов. Затем их инкубировали ± 1 мм пирувата и 200 мкм H 2 O 2 или 25 мкм менадиона в течение 5 мин. Клетки лизировали перед SDS-PAGE и иммуноблоттингом против Ser-300 (сайт 2) -фосфорилированного PDH E1α ( pS300 ). C , окисление приводит к межбелковому дисульфиду в WT и C45A PDHK2, не обнаруженному в мутанте C392A.Клетки, сверхэкспрессирующие WT или мутантный PDHK2, инкубировали с 200 мкМ H 2 O 2 или 25 мкМ менадионом в течение 5 мин. Клетки лизировали в присутствии NEM перед невосстанавливающим SDS-PAGE и иммуноблоттингом с анти-FLAG.

PDHK2 кристаллизован в трех структурных формах и активируется доменом L2 PDC, NADH и ацетил-КоА и инактивируется пируватом и ADP (9, 11). Реактивность цистеина зависит от локальной среды вокруг тиола, поэтому, чтобы увидеть, влияет ли конформация PDHK2 на чувствительность к окислению, этот эксперимент был повторен в среде с пируватом ( B ).Это должно способствовать конформациям, не связанным с доменом L2 PDC. В присутствии пирувата Cys-45 оказался важным для активности киназы, поскольку мутант C45A не фосфорилировал PDH E1α даже в отсутствие окислителя. Напротив, пируват мало влиял на WT или C392A PDHK2 в тех же условиях. Наконец, пируват привел к тому, что мутант C392A стал чувствительным либо к H 2 O 2 , либо к менадиону, что означает, что Cys-45 также является редокс-чувствительным в некоторых ситуациях ( B ).Эти результаты предполагают, что реакционная способность Cys-45 и Cys-392 может варьироваться между тремя структурными формами.

PDHK2 может образовывать димер в окислительных условиях

Невосстанавливающий денатурирующий электрофорез изолированной PDHK2 показал, что WT, C45A, C195A и C212A PDHK2 легко образуют ковалентные межмолекулярные димеры с димеризацией S392A A. ). Масс-спектрометрия показала, что in vitro , межмолекулярный дисульфид между двумя остатками Cys-392 присутствует (дополнительный рис.S8 B ). Полоса, содержащая PDHK2 с более высокой молекулярной массой (~ 100 кДа), соответствующая гомодимеру PDHK2, может быть обнаружена в клетках WT и C45A, обработанных окислителем и лизированных в присутствии NEM ( C ). Эта полоса отсутствовала в клетках, несущих мутацию C392A ( C ). Димер, содержащий PDHK2, был восстановлен DTT (дополнительная фиг. S8 C ), что указывает на дисульфид. Слабая корреляция между образованием димера ( C ) и инактивацией PDHK2 (, A и B ) предполагает, что образование димера не является существенным для инактивации PDHK2 посредством окисления Cys-392, хотя оно может усиливать его.

Изменения активности PDC в ответ на редокс-модификацию PDHK2

Фосфорилирование PDH E1α (и) указывает на неактивный PDC, поэтому мы оценили влияние H 2 O 2 на уровни активного PDC путем измерения дыхания. Во-первых, изолированные митохондрии инкубировали в условиях, которые генерируют H 2 O 2 через RET (3) и которые модифицируют PDHK2 ( D ). Митохондрии осаждали и ресуспендировали в буфере с пируватом, малонатом и FCCP перед переносом на кислородный электрод.Воздействие RET увеличивало последующее дыхание пирувата по сравнению с условиями, в которых RET не возникает, поскольку FCCP присутствовал повсюду ( A ) (3). Напротив, дыхание комбинации глутамата и малата, которое не требует активности PDC, не было затронуто RET ( A ).

Поток PDC был чувствителен к DCA, H 2 O 2 и мутации Cys-45 на PDHK2. A , RET увеличивает окисление пирувата. Изолированные митохондрии инкубировали с сукцинатом и БСА для индукции RET (3).RET удалось избежать за счет включения FCCP. Через 5 минут добавляли малонат с FCCP, если он еще не присутствовал, и дыхание измеряли на кислородном электроде после добавления глутамата / малата или пирувата. Данные ± S.D. ( n = 3). Черные полосы — это RET, а заштрихованные полосы — это элементы управления FCCP без RET. ***, p <0,001 по сравнению с контролем по критерию Стьюдента t . B , дыхание увеличивается с помощью DCA и H 2 O 2 в клетках, сверхэкспрессирующих WT PDHK2.Потребление кислорода клетками, сверхэкспрессирующими PDHK2 дикого типа, дышащими глюкозой, измеряли с помощью анализатора потока Seahorse. После четырех циклов носитель ( ромбов ), 10 мм DCA ( кругов ), 100 мкм H 2 O 2 ( треугольников ) или 200 мкм H 2 O 2 ( квадратов) ). После следующих восьми циклов добавляли ротенон и антимицин. Данные представляют собой потребление кислорода, приведенное к потреблению непосредственно перед добавлением H 2 O 2 или DCA ± S.E. ( n = 3). C , дыхание не было изменено H 2 O 2 в клетках, сверхэкспрессирующих C45A PDHK2. Измеряли потребление кислорода клетками, сверхэкспрессирующими WT ( квадратов, ), C45A ( треугольников, ) и C392A ( кружков, ), PDHK2, дышащих на глюкозу. После четырех циклов добавляли либо носитель ( закрашенных символов ), либо 200 мкм H 2 O 2 ( открытых символов ). После следующих восьми циклов добавляли ротенон и антимицин.Данные представляют собой потребление кислорода, приведенное к потреблению непосредственно перед добавлением H 2 O 2 ± S.E. ( n = 3). D , базальное дыхание было повышено в клетках, сверхэкспрессирующих C45A PDHK2. Измеряли потребление кислорода клетками, сверхэкспрессирующими WT ( квадратов, ), C45A ( треугольников, ) и C392A ( кружков, ), PDHK2, дышащих на глюкозу. После четырех циклов добавляли 10 мм DCA ( закрашенных символов ) или 200 мкм H 2 O 2 ( открытых символов ).После следующих восьми циклов добавляли ротенон и антимицин. Данные представляют собой скорость потребления кислорода ± S.E. ( n = 3).

Используя анализатор внеклеточного потока Seahorse, мы измерили скорость потребления кислорода в интактных клетках. Ингибирование PDHK с помощью DCA ( B ) показало, что PDHK может влиять на скорость дыхания в клетках, метаболизирующих глюкозу. Когда добавляли H 2 O 2 , он также стимулировал дыхание на глюкозе ( B ). H 2 O 2 не стимулировал дыхание у мутанта C45A в тех же условиях ( C ), и это произошло потому, что дыхание до добавления H 2 O 2 уже было высоким у в значительной степени неактивного C45A мутантный и аналогичный PDHK2 дикого типа, ингибируемый DCA ( D ).Таким образом, инактивация PDHK2 с помощью DCA или мутации C45A приводит к повышенной частоте дыхания, аналогичной той, которая наблюдается при воздействии H 2 O 2 . Таким образом, PDHK2 содержит окислительно-восстановительные цистеины, которые могут окисляться, что приводит к его инактивации и увеличению потока через PDC.

АФК одновременно инактивируют PDHK2 и аконитазу

H 2 O 2 возникает из-за дисмутации O 2 ˙̄ , и оба образуются, когда увеличение мембранного потенциала и доставки субстрата в дыхательную цепь происходит в отсутствие Спрос на АТФ.Таким образом, активация PDC в ответ на H 2 O 2 может создать повреждающую петлю прямой связи за счет дальнейшего увеличения поступления субстрата в дыхательную цепь. Мы предположили, что эта петля была предотвращена перенаправлением субстратов из дыхательной цепи через быструю инактивацию аконитазы O 2 ˙̄ ( k = ∼10 7 m −1 × s −1 ) (22). Подтверждая это, мы обнаружили, что PDHK2 и аконитаза проявляют аналогичную чувствительность к титрованию менадионом, который генерирует как O 2 ˙ , так и H 2 O 2 ( A ).Наконец, физиологически релевантная генерация O 2 ˙ посредством RET значительно снижает активность аконитазы ( B ). Мы пришли к выводу, что PDHK2, как и аконитаза, очень чувствительна к инактивации ROS и что оба могут быть затронуты одновременно митохондриальными ROS и, таким образом, быть частью скоординированного пути регуляции окислительно-восстановительного потенциала.

Инактивация аконитазы митохондрией O 2 ˙̄ . , аконитаза и PDHK2 были инактивированы аналогичными концентрациями ROS.Митохондрии подвергали воздействию менадиона в течение 1 мин перед измерением активности аконитазы ( кружков, ) и окислительно-восстановительного состояния PDHK2 (процент восстановленного PDHK2 от общего количества; квадратов ). Оба были нормализованы к контролю носителя и находятся в диапазоне ± ( n = 2). B , инактивация аконитазы с помощью RET. Митохондрии инкубировали с сукцинатом ± ротеноном в течение 5 мин. Данные были нормализованы к контролю без инкубации и составляют ± S.E. ( n = 5). *; р <0.05 двусторонний тест Стьюдента t . С RET 1,03 ± 0,08 нмоль H 2 O 2 × мин -1 × мг белка -1 ; без RET, 0,13 ± 0,01 нмоль H 2 O 2 × мин −1 × мг белка −1 .

ОБСУЖДЕНИЕ

Митохондрии генерируют O 2 ˙ и H 2 O 2 как побочные продукты окислительного фосфорилирования, и, следовательно, обратная регуляция функции митохондрий с помощью этих ROS является привлекательной.Эта работа показывает, что воздействие на митохондрии и клетки H 2 O 2 вызывает обратимое окисление одного или двух тиолов цистеина PDHK2 (и). Анализ мутантов PDHK2, лишенных Cys-45 или Cys-392, показал, что это два окислительно-восстановительных активных цистеина (). Более высокие уровни ROS привели к межмолекулярному дисульфиду между двумя остатками Cys-392 (). Низкие концентрации H 2 O 2 , которые модифицировали PDHK2, не вызывали объемных изменений белковых тиолов и GSH, но действительно приводили к окислению тиоредоксина 2 и пероксиредоксина III (дополнительный рис.S3). Следовательно, H 2 O 2 может реагировать непосредственно с PDHK2 с образованием сульфеновой кислоты или может окислять другие окислительно-восстановительные пары тиолов, которые затем модифицируют PDHK2 за счет обмена дисульфида тиола. H 2 O 2 концентрация обратно коррелирует с активностью PDHK2 (и) и прямо коррелирует с потоком через PDC (). Кроме того, мутация Cys-45 или Cys-392 на PDHK2 в аланин изменяет профиль фосфорилирования и поток через PDC в присутствии H 2 O 2 (и).Эти результаты предполагают, что O 2 ˙ , генерируемый дыхательной цепью, дисмутируется до H 2 O 2 , который индуцирует тиоловые модификации PDHK2, и они ингибируют фосфорилирование PDC и увеличивают митохондриальное дыхание.

PDHK2 представляет собой нековалентный димер in vivo , который переходит от неактивного димера с неупорядоченными С-концевыми хвостами в слабоактивный димер с частично упорядоченными С-концевыми хвостами (19, 23, 24). Это создает сайт связывания для домена L2 PDC, что приводит к полному упорядочению С-концевых хвостов и полной киназной активности при связывании с его субстратом PDC ( A ) (24, 25).Cys-392 расположен на гибком C-концевом хвосте PDHK2 рядом с консервативным DW-мотивом, который необходим для частичного упорядочения C-концевых хвостов ( A ) (26). Окислительная модификация Cys-392 может предотвратить образование сайта связывания L2, тогда как мутация C392A может позволить ассоциацию PDHK2 с L2 даже в окислительных условиях ( A ). PDHK2 образовывал ковалентный димер при воздействии ROS, и это не было обнаружено у мутанта C392A ( C ). С-концевые хвосты не разделены в неактивной структуре, но имеется дисульфидная перекрестная связь между остатками Cys-392 ( C и дополнительная фиг.S8) может удерживать PDHK2 в неактивном состоянии. Как Cys-45 влияет на активность PDHK2, очевидно, более сложно и на данном этапе неясно. Активность PDHK2 ингибируется субстратами PDC (пируват, NAD + и CoA) и стимулируется L2 и продуктами PDC (NADH и ацетил-CoA), но только пируват имеет сайт аллостерического связывания. Считается, что эффекты NAD + / NADH и CoA / acetyl-CoA опосредуются окислением, восстановлением и ацетилированием двух тиолов липоильной группы L2 (27).Когда PDHK2 связывает L2, ближайшими к Cys-45 особенностями являются конец полностью упорядоченного C-концевого хвоста и липоилтиолы ( A ). Требование тиола Cys-45 для полной активности PDHK2 (и) может указывать на потерю активации NADH, ацетил-CoA или связывания L2.

Возможные модели редокс-регуляции PDHK2 на молекулярном и метаболическом уровнях. A , модель для окислительно-восстановительного регулирования PDHK2. Cys-45 ( розовый ) и Cys-392 ( красный ) PDHK2 ( синий и зеленый ) восстанавливаются в клетках, благоприятствуя ассоциации с доменом L2 PDC ( желтый ), образуя полностью активную киназу. .Cys-45 находится рядом с двумя липоилтиолами ( фиолетовый ) на L2 и около конца С-концевого хвоста ( полностью сплошная линия ), когда он заказан (3CRL). Окисление Cys-45 может снизить активность PDHK2 за счет ограничения ассоциации с L2 или предотвращения активации NADH и ацетил-CoA. Восстановленный Cys-392, вероятно, потребуется для начального упорядочения С-концевого хвоста ( сплошная и пунктирная линия ) с образованием частично активного свободного фермента (2BTZ). Окисление Cys-392 может полностью нарушить С-концевой хвост ( полностью пунктирная линия ), что приводит к неактивной PDHK2, в которой Cys-392 не расщепляется (2BU8).Дальнейшее окисление Cys-392 до дисульфида может заблокировать PDHK2 в неактивном состоянии. Cys-45 и Cys-392 ближе к известным регуляторным характеристикам PDHK2, липоилтиолов и С-концевого хвоста, чем другие тиолы цистеина на L2 или PDHK2 ( желтых сфер, ). B , модель, в которой инактивация PDHK2 и аконитазы ( Acon ) ROS может сдвинуть метаболизм в сторону синтеза жирных кислот. В этой модели PDC превращает пируват в ацетил-КоА, который входит в цикл TCA, образуя цитрат.Отношение НАДН / НАД + повышается, поскольку выработка НАДН превышает потребность в АТФ. Это приводит к генерации O 2 ˙̄ , которая инактивирует аконитазу и замедляет образование НАДН, ограничивая воздействие АФК. Этот O 2 ˙˙ также превращается в H 2 O 2 супероксиддисмутазой марганца, замедляя β-окисление и инактивируя PDHK2. Это способствует образованию ацетил-КоА из углеводов. Активация PDC и инактивация аконитазы вызывают экспорт цитрата в цитоплазму через цитратный носитель ( CiC ) для синтеза жирных кислот.Поскольку НАДН вырабатывается только PDC и малатдегидрогеназой, увеличение потоков через PDC может происходить без увеличения потребности в АТФ, что позволяет быстро превращать углеводы в жир. Поскольку супероксиддисмутаза марганца защищает аконитазу, но не PDHK2, от инактивации, она может играть важную регулирующую роль в отложении жира. Красный , пути и ферменты инактивированы АФК. Purple , ферменты, активированные в среде с высоким содержанием ROS. CPT1 , карнитин пальмитоилтрансфераза 1; CACT , карнитин: транслоказа ацилкарнитина; CAT , карнитинацетилтрансфераза; MnSOD , супероксиддисмутаза марганца.

Инактивация PDHK2 с помощью ROS увеличивает поток через PDC и доставку субстрата в дыхательную цепь, потенциально способствуя генерации ROS (1). Одним из возможных решений этой повреждающей петли прямой связи является чувствительность аконитазы к инактивации O 2 ˙̄ (22). Ожидается, что инактивация аконитазы замедлит цикл TCA, ограничивая увеличение поступления субстратов в дыхательную цепь в результате инактивации PDHK2 и, таким образом, предотвращая чрезмерный и продолжительный окислительный стресс ( B ).То, что один и тот же сигнал ROS, исходящий из комплекса I посредством RET, инактивирует как PDHK2, так и аконитазу ( D и B ), согласуется с этой гипотезой. В первоначальном скрининге, который идентифицировал PDHK2, почти все другие митохондриальные белки, которые имели тиолы, чувствительные к RET, были вовлечены в образование ацетил-КоА из жира (карнитинацетилтрансфераза, очень длинноцепочечная ацил-КоА дегидрогеназа, митохондриальный трехфункциональный белок, митохондриальный короткий -цепочечная еноил-КоА-гидратаза и пропионил-КоА-карбоксилаза) (3).Область для будущих исследований заключается в том, инактивирует ли избыточное поступление субстрата в митохондрии с низкой потребностью в АТФ (1) PDHK2, аконитазу и ряд ферментов, метаболизирующих жирные кислоты, и подавляет ли это в некоторых тканях β-окисление и создает ли избыток цитрат, который можно экспортировать для синтеза жирных кислот в цитоплазме (28). Такой механизм может изменить баланс между метаболизмом углеводов и жиров и помочь объяснить, почему чрезвычайная чувствительность аконитазы к O 2 ˙˙ не была устранена эволюцией (22), почему мыши с гомозиготным нокаутом супероксиддисмутазы марганца являются переохлаждение, накопление жира и смерть в течение недели после рождения (29), почему гетерозиготные мыши с нокаутом супероксиддисмутазы марганца обладают инсулинорезистентностью (30) и почему антиоксиданты, нацеленные на митохондрии, снижают содержание жира и защищают от инсулинорезистентности (30, 31).

В заключение, здесь мы показали, что PDK2, один из ключевых регуляторов входа углеводов в цикл TCA, регулируется окислительно-восстановительным путем и что идентичные низкие уровни ROS могут также инактивировать аконитазу. Эти данные позволяют предположить, что могут существовать пути, посредством которых продукция O 2 ˙ и H 2 O 2 дыхательной цепью может действовать как окислительно-восстановительные сигналы для модуляции углеводного обмена.

6 Используемые сокращения:

ROS
реакционноспособные формы кислорода
DCA
дихлоруксусная кислота
FCCP
карбонилцианид 4- (трифторметокси) фенилгидразон
NEM
90имид 90-632 90 -632 NEM 90имид 90 -632 малеиновый NEM
90 -632 NEM 90имид 90 -632 NEM 90imide 90-756 PEG
PDC
пируватдегидрогеназный комплекс
PDH
пируватдегидрогеназа
PDHK
пируватдегидрогеназа киназа
ET
обратный транспорт электронов t
TCA
TCA

ССЫЛКИ

2. Janssen-Heininger YM, Mossman BT, Heintz NH, Forman HJ, Kalyanaraman B., Finkel T., Stamler JS, Rhee SG, van der Vliet A. (2008) Регулирование передачи сигнала на основе окислительно-восстановительного потенциала: принципы, подводные камни и обещания . Свободный Радич. Биол. Med. 45, 1–17 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Херд Т. Р., Прайм Т. А., Харбор М. Э., Лилли К. С., Мерфи М. П. (2007) Обнаружение тиоловых белков, чувствительных к реактивным формам кислорода, с помощью электрофореза в гелевом разностном окислительно-восстановительном процессе: значение для митохондриальной окислительно-восстановительной передачи сигналов.J. Biol. Chem. 282, 22040–22051 [PubMed] [Google Scholar] 4. Ри С. Г. (2006) Передача сигналов в клетках. h3O2, необходимое зло для передачи сигналов клетками. Наука 312, 1882–1883 ​​[PubMed] [Google Scholar] 5. Д’Отро Б., Толедано М. Б. (2007) АФК как сигнальные молекулы: механизмы, которые создают специфичность в гомеостазе АФК. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 813–824 [PubMed] [Google Scholar] 6. Сундаресан М., Ю. З. X., Ферранс В. Дж., Ирани К., Финкель Т. (1995) Необходимость генерации H 2 O 2 для передачи сигнала фактора роста тромбоцитов.Наука 270, 296–299 [PubMed] [Google Scholar] 7. Телятина Э. А., Дэй А. М., Морган Б. А. (2007) Чувствительность и передача сигналов перекиси водорода. Мол. Клетка 26, 1–14 [PubMed] [Google Scholar] 8. Патель М. С., Короткина Л. Г. (2006) Регуляция пируватдегидрогеназного комплекса. Biochem. Soc. Пер. 34, 217–222 [PubMed] [Google Scholar] 9. Рэндл П. Дж. (1995) Выбор метаболического топлива: общая интеграция на уровне всего тела. Proc. Nutr. Soc. 54, 317–327 [PubMed] [Google Scholar] 10. Йеман С. Дж., Хатчесон Э.Т., Рош Т. Э., Петтит Ф. Х., Браун Дж. Р., Рид Л. Дж., Уотсон Д. С., Диксон Г. Х. (1978) Сайты фосфорилирования пируватдегидрогеназы из почек и сердца крупного рогатого скота. Биохимия 17, 2364–2370 [PubMed] [Google Scholar] 11. Roche T. E., Baker J. C., Yan X., Hiromasa Y., Gong X., Peng T., Dong J., Turkan A., Kasten S. A. (2001) Отчетливые регуляторные свойства киназы пируватдегидрогеназы и изоформ фосфатазы. Прог. Nucleic Acid Res. Мол. Биол. 70, 33–75 [PubMed] [Google Scholar] 12. Боукер-Кинли М.М., Дэвис В. И., Ву П., Харрис Р. А., Попов К. М. (1998) Доказательства существования тканеспецифической регуляции пируватдегидрогеназного комплекса млекопитающих. Biochem. Дж. 329, 191–196 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Макмура Л., Хаманн М., Ареопагита А., Фурута С., Муньос А., Моманд Дж. (2001) Разработка чувствительного анализа для обнаружения обратимо окисленных сульфгидрильных групп цистеина белка. Антиоксид. Редокс-сигнал. 3, 1105–1118 [PubMed] [Google Scholar] 14. Рардин М. Дж., Уайли С. Э., Naviaux R. K., Murphy A. N., Dixon J. E. (2009) Мониторинг фосфорилирования пируватдегидрогеназного комплекса. Анальный. Biochem. 389, 157–164 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 15. Cochemé H. M., Murphy M. P. (2008) Комплекс I является основным местом производства митохондриального супероксида паракватом. J. Biol. Chem. 283, 1786–1798 [PubMed] [Google Scholar] 16. Thor H., Smith MT, Hartzell P., Bellomo G., Jewell SA, Orrenius S. (1982) Метаболизм менадиона (2-метил-1,4-нафтохинона) изолированными гепатоцитами: исследование последствий окислительного стресс в неповрежденных клетках.J. Biol. Chem. 257, 12419–12425 [PubMed] [Google Scholar] 17. Кокс А. Г., Пуллар Дж. М., Хьюз Г., Леджервуд Э. С., Хэмптон М. Б. (2008) Окисление митохондриального пероксиредоксина 3 во время инициации рецептор-опосредованного апоптоза. Свободный Радич. Биол. Med. 44, 1001–1009 [PubMed] [Google Scholar] 18. Попп Д. А., Кихле Ф. Л., Котагал Н., Джаретт Л. (1980) Стимуляция пируватдегидрогеназы инсулином в изолированной смеси плазматической мембраны и митохондрий происходит путем активации фосфатазы пируватдегидрогеназы.J. Biol. Chem. 255, 7540–7543 [PubMed] [Google Scholar] 19. Knoechel TR, Tucker AD, Robinson CM, Phillips C., Taylor W., Bungay PJ, Kasten SA, Roche TE, Brown DG (2006) Регуляторные роли N-концевого домена на основе кристаллических структур киназы 2 пируватдегидрогеназы человека, содержащей физиологические и синтетические лиганды. Биохимия 45, 402–415 [PubMed] [Google Scholar] 20. Уайтхаус С., Купер Р. Х., Рэндл П. Дж. (1974) Механизм активации пируватдегидрогеназы дихлорацетатом и другими галогенированными карбоновыми кислотами.Biochem. Дж. 141, 761–774 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Попов К. М., Кедишвили Н. Ю., Чжао Ю., Гуди Р., Харрис Р. А. (1994) Молекулярное клонирование субъединицы p45 киназы пируватдегидрогеназы. J. Biol. Chem. 269, 29720–29724 [PubMed] [Google Scholar] 22. Хаусладен А., Фридович И. (1994) Супероксид и пероксинитрит инактивируют аконитазы, а оксид азота — нет. J. Biol. Chem. 269, 29405–29408 [PubMed] [Google Scholar] 23. Грин Т., Григорян А., Клюева А., Туганова А., Луо М., Попов К. М. (2008) Структурные и функциональные представления о молекулярных механизмах, ответственных за регуляцию киназы пируватдегидрогеназы 2. J. Biol. Chem. 283, 15789–15798 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24. Като М., Чуанг Дж. Л., Цо С. С., Винн Р. М., Чуанг Д. Т. (2005) Кристаллическая структура киназы пируватдегидрогеназы 3, связанной с липоильным доменом 2 пируватдегидрогеназного комплекса человека. EMBO J. 24, 1763–1774 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. Винн Р. М., Като М., Chuang J. L., Tso S. C., Li J., Chuang D. T. (2008) Структуры киназы-4 пируватдегидрогеназы обнаруживают метастабильную открытую конформацию, способствующую устойчивой базальной активности без ядра. J. Biol. Chem. 283, 25305–25315 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 26. Ли Дж., Като М., Чуанг Д. Т. (2009) Ключевая роль С-концевого DW-мотива в опосредовании ингибирования киназы 2 пируватдегидрогеназы дихлорацетатом. J. Biol. Chem. 284, 34458–34467 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27. Стейсси К.Н., Попов К. М., Боукер-Кинли М. М., Слоан Р. Б., младший, Харрис Р. А., Гамильтон Дж. А. (2001) Структура киназы пируватдегидрогеназы: новый паттерн сворачивания для сериновой протеинкиназы. J. Biol. Chem. 276, 37443–37450 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Джеймс А. М., Коллинз Ю., Логан А., Мерфи М. П. (2012) Митохондриальный оксидативный стресс и метаболический синдром. Тенденции Эндокринол. Метаб. 23, 429–434 [PubMed] [Google Scholar] 29. Ли Ю., Хуанг Т. Т., Карлсон Э. Дж., Мелов С., Урселл П.К., Олсон Дж. Л., Нобл Л. Дж., Йошимура М. П., Бергер С., Чан П. Х., Уоллес Д. К., Эпштейн С. Дж. (1995) Дилатационная кардиомиопатия и неонатальная летальность у мутантных мышей, лишенных супероксиддисмутазы марганца. Nat. Genet. 11, 376–381 [PubMed] [Google Scholar] 30. Hoehn KL, Salmon AB, Hohnen-Behrens C., Turner N., Hoy AJ, Maghzal GJ, Stocker R., Van Remmen H., Kraegen EW, Cooney GJ, Richardson AR, James DE (2009) Инсулинорезистентность — это клеточная механизм антиоксидантной защиты.Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 106, 17787–17792 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 31. Родригес-Куэнка С., Кохеме Х.М., Логан А., Абакумова И., Прайм Т.А., Роуз К., Видаль-Пуч А., Смит А.С., Рубинштейн Д.К., Фернли И.М., Джонс Б.А., Поуп С., Хилс С.Дж., Лам BY, Neogi SG, McFarlane I., James AM, Smith RA, Murphy MP (2010) Последствия длительного перорального введения митохондриально-направленного антиоксиданта MitoQ мышам дикого типа. Свободный Радич. Биол. Med. 48, 161–172 [PubMed] [Google Scholar]

Вторичный алкоголь — обзор

3.04.1.5.1. (Iii) Использование окислителей на основе галогенов

Вторичные спирты плавно окисляются до кетонов с использованием элементарного брома в присутствии каталитического количества N t -бутилнитробензолсульфенамид, карбонат калия и молекулярные сита <2003CL182>. Бром, адсорбированный на нейтральном оксиде алюминия, также оказался эффективным реагентом для окисления вторичных спиртов <2000SC963>.

Гипохлорит натрия (отбеливатель) представляет собой дешевый окисляющий реагент, который превращает вторичные спирты в кетоны с высоким выходом в мягких условиях <1998TL7263>.Множество вторичных спиртов окисляют с высоким выходом, используя водный раствор гипохлорита натрия в смеси этилацетат: вода в присутствии катализатора межфазного переноса при комнатной температуре. Примером реагента, окисляющего бром (I), является гексафторфосфат бис (коллидин) брома (I) <2000TL8881>. Это соединение окисляет большое количество вторичных спиртов, используя простую в эксплуатации процедуру, но несовместимо с присутствием p -метоксибензиловых эфиров.

Доступен ряд окислителей на основе галогенов с более высокой степенью окисления.Самым важным из них, несомненно, является периодинан Десса – Мартина. Хотя этот реагент является популярным некислотным, мягкие окислители, первые препараты приводили к образованию больших количеств брома и часто приводили к выделению продукта плохого качества. В настоящее время разработан ряд модифицированных препаратов периодинан Десса-Мартина из 2-йодбензойной кислоты, в частности, препарат Бекмана и его сотрудников <2000OS141> с использованием бромата калия в качестве окислителя и препарат Фриджерио с сотрудниками <1999JOC4537>, который позволяет избежать опасное образование брома при использовании Oxone ® в качестве окислителя.Окисление Десса – Мартина было модифицировано для использования в синтезе химической библиотеки в фазе раствора <1999T6785>. Окисление проводят в мягких условиях, и обработка тиосульфатной смолой с последующей функционализацией основанием смолы приводит к секвестрации и быстрому удалению побочных продуктов реагентов.

Другие соединения йода (V) были исследованы как окислители. 2-Йодоксибензойная кислота (IBX) является исходным продуктом, образующимся во время синтеза периодинан Десса-Мартина, и это соединение также легко окисляет вторичные спирты <1995JOC7272>.Реагент устойчив к влаге, но нерастворимость IBX требует использования высокополярных растворителей, таких как ДМСО. Связанная с полимером версия IBX была синтезирована и исследована в качестве окислителя для использования в создании химической библиотеки <2001AC (E) 4395>. Связанная с полистиролом 2-йодбензойная кислота обрабатывается оксоном тетрабутиламмония с получением иммобилизованной версии IBX, устойчивой к воздуху и влаге, окисляющей различные спирты.

Реагенты на основе йода (V) потенциально взрывоопасны и нестабильны, и некоторые исследования были направлены на использование более стабильных производных.2-Йодоксибензамиды, легко получаемые окислением диметилдиоксираном соответствующего 2-иодбензамида, проявляют окислительные свойства, аналогичные IBX, но обладают большей стабильностью и большей растворимостью в органических растворителях <2003AC (E) 2194>. Реагенты йода (III) также начинают исследовать как окислители. Йодозобензол окисляет различные вторичные спирты до кетонов в воде в присутствии бромида калия <2000AC (E) 1306>. Связанный с полимером (диацетоксийод) бензол также вызывает такое же преобразование в присутствии бромида калия.

Электростанция Соответствие

AES Newhall — AES
Американская технология когенерации. Spreckels Power
Проект расширения когенерации Argus (ACE) — ACE C Generation Company
Avenal Energy Center — Avenal Power Center LLC
Аварийный генератор на барже — PG&E Проект по восстановлению ресурсов района
Bay Area — Combustion Engineering, Inc Проект
Beacon Solar Energy — Beacon Solar LLC
Black Rock 1 2 3 Geothermal Power Project [ранее Salton Sea Geothermal] — Cal Energy
Blythe Energy Project, Фаза II [петиция Sonoran Energy Project об изменении отзыва] — AltaGas Sonoran Energy, Inc.
Bullard Energy Center — Energy Investors Fund, LLC
Calico Solar — SES Solar One LLC
Carrizo Energy Solar Farm — Carrizo Energy LLC / Ausra
CCPA # 1 Coldwater Creek
CENCO Electric Peaker Project — CENCO Electric Company
Chevron Replacement — Chevron Oil Компания
Модернизация нефтеперерабатывающего завода Chevron Richmond — Chevron Oil Company
Chula Vista — RAMCO
Colusa — Reliant Energy
Community Power Plant — Район охраны реки Кингс
DWR Южные гейзеры — Департамент водных ресурсов
Ист-Алтамонт — Кальпин
Подстанция Восточного побережья — Калпин c * Power
Eastshore Energy Center — Eastshore Energy LLC
ENRON South Belridge — ENRON
Evergreen Concord — Evergreen Power Company
FPL Tesla — Florida Power & Light
Gilroy Energy Center — Calpine
Hanford Электростанция комбинированного цикла — GWF Energy LLC
Hidden Солнечная электрическая генерирующая система Hills — BrightSources Energy, Inc.
Highgrove Peaker — AES
Hydrogen Energy California (HECA) — Hydrogen Energy International, LLC
IBM San Jose C Generation — IBM Corporation
Imperial Valley Solar (ранее SES Solar Two) — SES Solar Two LLC
Inland Empire Energy Center
Совместные владельцы GPPL Линия электропередачи
La Jolla Baldwin — La Jolla Energy Development
Lancaster — Electricity Provider Inc
Los Banos Peaker — Cummins West Inc
Luz SEGS XI — Luz Engineering
Luz SEGS XII — Luz Engineering
Мальбург Город Вернон — Город Вернон
Мартин Подстанция — Calpine c * Power
Mission Rock Energy Center — Mission Rock Energy Center, LLC
Mobil Oil — Когенерация Belridge — Mobile Oil Company
Mobil Oil — Когенерация San Ardo — Mobile Oil Company
Модернизация Morro Bay — Duke Energy
NCPA Roseville
Подстанция Ньюарк — Calpine c * Power
Nueva Azalea — Sunlaw C Generation Partners
Генераторная станция Oakley — Contra Costa ООО «Генерирующая станция»
Энергетический проект Окотилло — Окотилло Энерджи
Апельсиновая роща — J-Power
Пасифик Термонетикс Крокетт
Тихоокеанское Управление отходами Ирвиндейл MSW
Проект солнечной энергетики Пален — Маверик Солар, ООО
Энергетический проект Палмдейла (ранее — Проект гибридной энергетики Палмдейл) — Palmdale Energy, LLC
Проект расширения энергосистемы Пастории (добавление простого цикла) — Pastoria Energy LLC
Проект Pastoria II — Calpine
Pegasus Energy — Pegasus Power Partners
PG&E Geysers 21
PG&E Potrero Unit 7 — PG&E
Pio Pico Energy Center — Pio ООО «Пико Энерджи Центр» Проект
Pomona Repower — AltaGas Pomona Energy Inc.
Puente Power Project (P3) — NRG Oxnard Energy Center LLC
Проект по производству щеток для перепелов — Quail Brush Genco, LLC
Redondo Beach Repower — AES Southland Development, LLC
Rice Solar Energy Project — Rice Solar Energy LLC
Ridgecrest Solar Power Project — Solar Millennium LLC и Chevron Energy Solutions
Rio Linda Elverta — Florida Power & Light
Rio Mesa Solar Electric Generating Facility — BrightSource Energy
Roseville Energy Facility — Enron
Sacramento Ethanol Partners Cogen (SEPCO) — Sacramento Power Inc
San Francisco Energy Company
Проект обеспечения надежности в Сан-Франциско — Город и округ Сан-Франциско
Электростанция Сан-Габриэль — Reliant Energy
Сан-Хоакин Солар 1 и 2 — Сан-Хоакин Солар LLC
Энергетический центр Сан-Хоакин-Вэлли — Кальпин
Подстанция Сан-Матео — Кальпин c * Power
Санта Maria Aggregate
SCE Coolwater Coal Gasification — Южная Калифорния Эдисон
SCE Долина Люцерн — Юг эрн Калифорния Эдисон
SCE Solar 100 — Южная Калифорния Эдисон
Подстанция Скотта — Calpine c * Power
SDG & E Silver Gate — SDG & E
SDG & E Расширение Южного залива
Производство Shell в Калифорнии — Нефтяная компания Shell
Signal Environmental Systems
Замена Южного залива — L.S. Power South Bay, LLC
South Bay Repower
Проект когенерации South Star — South Star Holdings
Юго-восточный региональный энергетический центр (бывший город Вернон) Проект электростанции — город Вернон
Энергетический центр Spartan I — Spartan Energy
Sun Valley Energy Проект (Пикер) — NRG
Индустриальный парк Санло # 1
Санло США Growers # 2
TEXACO Cool Water Coal Gas — Компания Texaco
Три горы — Три горы Пауэр / Кованта
United Golden Gate (Пикер) — Эль-Пасо Мерчант Энерджи
United Golden Gate II — El Paso Merchant Energy
Станция Vaca — Competitive Power Ventures (CPV) Vacaville, LLC
Электростанция Вернон — Город Вернон
Проект гибридной электростанции Victorville 2 (газ-солнечная энергия) — Город Викторвилль
Подстанция Warnerville — Calpine c * Проект энергоснабжения Power
Watson по обеспечению надежности пара и электричества — Watson C Generation Company Проект модернизации энергоснабжения Чула-Виста — MMC Energy Inc.
Western Midway Sunset Project — Когенерационная компания Midway Sunset
Willow Pass Generating Station — Mirant Corporation

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Анализ

основных элементов для роста растений с использованием инструментального анализа нейтронной активации . Экспериментальные результаты показывают хорошее согласие с сертифицированными или литературными значениями в пределах согласованного процентного диапазона от ± 2,35% до ± 8,69%. Однако распределение концентраций десяти идентифицированных элементов в образцах почвы в пределах исследуемой территории для роста растений выявило следующее: Fe (123.4 ppm), Mn (2100,7 ppm), K (5544,3 ppm), Al (54752,4 ppm), Ti (3082,9 ppm), Ca (4635 ppm), V (54,3 ppm), Na (857,5 ppm), Mg (13924,1 ppm ) и Dy (12,1 м.д.). Дальнейший анализ двух основных физических параметров почвы для здорового роста некоторых распространенных сельскохозяйственных культур, таких как эгусимелон, арахис, рис, ямс, соя, маниока и картофель, проанализированный в этой работе, выявил диапазон pH от 4,0 до 8,0 pH и диапазон температур. от 28,0 ° C до 29,3 ° C, что является оптимальным для доступности питательных веществ для растений в почвах в пределах исследуемой территории.

1. Введение

Растениям требуется не менее шестнадцати элементов для нормального роста и завершения их жизненного цикла. Им требуется относительно большое количество азота, фосфора и калия, которые считаются основными питательными веществами, обычно поставляемыми с удобрениями [1]. Три вторичных элемента Ca, Mg и S практически необходимы в меньших количествах. Ca и Mg обычно поставляются с известковательными материалами, а S — с удобрениями [2]. Загрязняющие вещества в дождевых осадках также приносят 4,5 кг для 9.1 кг азота и серы на акр ежегодно в зависимости от качества местного воздуха [3].

Микроэлементы состоят из семи основных элементов: бора, меди, хлора, железа, марганца, молибдена и цинка. Эти элементы присутствуют в очень малых количествах как в почве, так и в растениях, но их роль так же важна, как и основных питательных веществ [4, 5]. Дефицит одного или нескольких микроэлементов может привести к серьезному снижению роста, урожайности и качества урожая. Некоторые почвы не содержат достаточного количества этих питательных веществ, чтобы удовлетворить потребности растений в быстром росте и хорошей урожайности.В этом случае дополнительные питательные микроэлементы для быстрого роста и хорошего урожая должны применяться в форме опрыскивания листьев с достаточным знанием концентраций элементов. Таким образом, эта работа направлена ​​на анализ основных элементов для роста растений с использованием инструментального нейтронно-активационного анализа в семи районах местного самоуправления (LGA) штата Нигер, а именно в районах местного самоуправления Пайкоро, Лапай, Моква, Катча, Бида, Агайе и Суледжа. Штат Нигер.

Растения в различных формах поглощают основные элементы через корневую систему или листья [1].В общем, почва содержит большое количество всех элементов, но только очень небольшой процент от этих общих количеств действительно полезен для роста растений [6]. Это наблюдается в случае, если содержание железа превышает 50 000 частей на миллион, а доступная для растений часть составляет менее 5 частей на миллион [7]. Доступность питательных веществ для растений в форме, показанной в таблице 1, во многом зависит от химических свойств элемента, pH почвы, взаимодействия с почвенными коллоидами и физических условий почвы, таких как температура и влажность [8].


Элементы Символы Формы, используемые растениями

Азот 8 N
9118 N 9118 9189 9118 9189 P 9189 9189 P
Калий K K +
Кальций Ca Ca 2+
Магний Mg 00 3 9180 9118 Mg
00 9182 9180 9180 9182 Fe 9180
Fe 2+ и Fe 3+
Марганец Mn Mn 2+
цинк Zn 109 802
Cu Cu 2+
Молибден Mo 91 808
Никель Ni Ni 2+
Натрий Na Na +

питательные вещества
содержит больше всего питательных веществ в почве. формы, указанные в таблице 1, пропорционально количествам, хранящимся в почве [9].Растения поглощают как катионы, так и анионы из почвенного раствора с равновесной скоростью, которую часто называют буферным процессом. Подробно об этом процессе обсуждается в [1].

Однако почва содержит тринадцать из пятнадцати элементов, необходимых для питания высших растений, которые должны быть доступны постоянно и в сбалансированных пропорциях для поддержки фотосинтеза и других метаболических процессов растений. Зоны саванны Гвинеи в штате Нигер, как показано на Рисунке 1, представляют собой богатые железом ферралитовые и железистые почвы [10, 11].


Основными типами почв, способствующими агроэкологическому развитию, являются альфизоли, инцептисоли, энтисоли и вертисоли. Альфисоль — самый распространенный в регионе саванны Гвинеи. Выщелоченные и слабокислые почвы с pH от 5,0 до 7,0, происходящие из докембрийского кристаллического комплекса фундамента, обычно встречаются в зонах саванны Гвинеи [11]. На протяжении многих лет почвы нигерийской саванны исследовались авторами [2, 10, 11] на предмет морфологии и выживаемости зерновых и других культур в условиях засухи.Однако характеристики и решение проблем, связанных с почвами нигерийской саванны, с упором на морфологические свойства, размер частиц и химические свойства были изучены и опубликованы [12]. Некоторые работы были выполнены в области анализа основных и второстепенных микроэлементов в водной и наземной среде, такой как отложения, горные породы и почвы [13–15]. Кроме того, [16] исследовал серу в почвах Северной Нигерии, а [17] в равной степени изучал Alfisols из саванны только по одному элементу (железу).Однако оценка восстановления плодородия почвы под паром в нигерийской саванне, включающая свойства почвы, органическое вещество и несколько неорганических элементов, была выполнена [2]. Типы почв Гвинейской саванны подвержены эрозии из-за их песчаной природы [11]. Именно по этой причине процессы улучшения почвы, в основном внесение удобрений и внесение навоза, постоянно применялись в зонах саванны Гвинеи. Однако такие аграрные мероприятия нельзя назначать самостоятельно, если микро- и макроэлементы почвы в форме микроэлементов неизвестны.

1.1. Теория нейтронно-активационного анализа

Нейтронно-активационный анализ, называемый аналитическим методом, был введен Харвеси и Леви в 1936 г. [18]. De Soete et al. [19] следили за развитием метода с самого начала и дали подробный отчет о различных аспектах. В период с 1980-х по 90-е годы было выпущено несколько публикаций по уточненной теории и методам нейтронно-активационного анализа (НАА) [20–26]. Чувствительность метода была описана в нескольких местах, в недавнем обзоре [24], и ее можно рассматривать как уровень около миллиардных долей для реакторного облучения.Чувствительность является функцией ядерных параметров рассматриваемого элемента: нейтронного сечения, содержания изотопа, периода полураспада, содержания гамма-излучения, доступного потока нейтронов, продолжительности облучения, эффективности детектора, состава матрицы и общего размера образца.

При определении активированных микроэлементов селективность метода NAA демонстрирует поразительные свойства достоверности и универсальности [27]. Помимо точных измерений периода полураспада и типа энергии произведенных изотопов, отношение активности интересующего изотопа к мешающей активности может быть увеличено путем изменения облучения и времени распада перед подсчетом.Также было показано [19], что изменение нейтронного спектра минимизирует помехи из-за реакций, индуцированных быстрыми нейтронами, путем выбора места облучения в реакторе с чистым тепловым потоком. NAA превосходит другие методы из-за возможности одновременного анализа большинства элементов в репрезентативной массе вещества со значительной чувствительностью по сравнению с другими традиционными методами, которые требуют специальных процедур подготовки проб перед анализом [28].

Показано [19], что в аппаратном нейтронно-активационном анализе реактора разложение и радиохимическое разделение радиоактивного образца не требуется.Все проблемы, связанные с разложением пробы и разделением (растворение, загрязнение и потери), исключаются. Радионуклиды определяются неразрушающим методом на основе различий в скорости их распада посредством измерений в различных интервалах распада с использованием детекторов с высоким разрешением. Также не требует сложного обращения. Этот аспект очень важен при анализе основных элементов для роста растений или в случае трудно растворяемых материалов, например, образцов на основе кремния или керамики.Лучшие пределы обнаружения требуемых элементов могут быть достигнуты путем оптимизации параметров облучения (энергии, скорости нейтронов, времени облучения, а также времени затухания и счета). Влияние матрицы обычно незначительно, поскольку большинство матриц кажутся прозрачными. Большинство образцов состоят из H, C, O, N, P и Si и практически не образуют радиоактивных изотопов. Это делает метод очень чувствительным для измерения микроэлементов с низкими пределами обнаружения.

В методе относительной стандартизации NAA, использованном в этой работе, концентрация элемента в неизвестном образце была рассчитана путем облучения неизвестного образца и стандарта, содержащего известное количество интересующего элемента вместе в реакторе.Если неизвестный образец и стандарт измеряются на одном и том же детекторе и времена распада и облучения между ними корректируются, масса неизвестного элемента будет рассчитана с использованием периода полураспада измеренного изотопа. Уравнение, обычно используемое для расчета массы элемента в неизвестном образце относительно эталона, выглядит следующим образом: где — наведенная активность образца (sam) и стандарта (std), — масса элемента, — константа распада изотопа, — время распада.

Для стабильного потока в реакторе и при выполнении коротких облучений время облучения, затухания и счета обычно фиксировано для всех образцов и стандартов, так что зависящие от времени факторы исключаются. Таким образом, (1) упрощается где — концентрация элемента, — масса образца и стандарта.

Метод нейтронной активации, благодаря своему ядерному характеру, позволяет анализировать широкий спектр элементов в самых разных матрицах, что делает его мощным аналитическим инструментом не только для анализа следов, но и для определения элементов сплава и второстепенных составляющих [29] .Как мощный аналитический метод он находит применение в широком спектре дисциплин, таких как питательные вещества для растений, археология, мониторинг окружающей среды, геология, анализ человеческих проб и материаловедение [30].

Основным преимуществом INAA питательных веществ для матриксов роста растений является то, что матричные элементы C, H, N и O производят незначительную лучевую активность, мешающую определению микроэлементов. Реакции 13 C () 14 C и 2 H () 3 H вызывают очень малую активность неэмиттеров 3 H и 14 C, а также 18 O () 19 O и 15 N () 16 N реакции дают очень короткоживущие 19 O (27 сек) и 16 N (7.1 сек). Все эти реакции имеют чрезвычайно низкое сечение тепловых нейтронов. Однако высокая концентрация P во многих биологических тканях (например, в костях) снижает чувствительность некоторых -эмиттеров, потому что 32 P из реакции 31 P () 32 P, хотя и не является -эмиттером, дает тормозной континуум в области 0–1,7 МэВ спектра γ-лучей. Точно так же следы Na, K и C1 в образцах растений могут давать высокую активность 24 Na (15 ч), 42 K (12 ч) и 38 Cl (37 мин) [31].

Основным принципом INAA являются реакции, индуцированные нейтронами, которым предшествует взаимодействие нейтрона с ядром-мишенью через неупругое столкновение и образование составного ядра в возбужденном состоянии. Энергия возбуждения составного ядра обусловлена ​​энергией связи нейтрона с ядром. Составное ядро ​​почти мгновенно деактивируется в более стабильную конфигурацию за счет испускания одного или нескольких характерных мгновенных гамма-лучей. Во многих случаях эта новая конфигурация дает радиоактивное ядро, которое также дезактивирует (или распадается) за счет испускания одного или нескольких характерных запаздывающих гамма-лучей, но с гораздо меньшей скоростью в соответствии с уникальным периодом полураспада радиоактивного ядра.В зависимости от конкретного радиоактивного вида период полураспада может составлять от долей секунды до нескольких лет. Что касается времени измерения, NAA подразделяется на две категории: мгновенный нейтронно-активационный анализ гамма-излучения (PGNAA), когда измерения проводятся во время облучения, и активационный анализ замедленного гамма-нейтрона (DGNAA), когда измерения следуют за радиоактивным распадом. . Последний режим работы более распространен; таким образом, когда кто-то упоминает NAA, обычно предполагается, что предполагается измерение задержанных гамма-лучей.Около 70% элементов имеют свойства, подходящие для измерения NAA.

Основное уравнение, которое будет использоваться для расчета основных элементов для роста растений после облучения образцов почвы с помощью миниатюрного исследовательского реактора с учетом распавшихся γ-лучей в НАА, имеет следующий вид: NAA использует тот факт, что количество атомов образующихся радиоизотопов зависит от поперечного сечения нейтронно-нуклидной реакции, продолжительности облучения и периода полураспада образующегося радиоизотопа.Оценка активности после облучения образцов почвы основана на уравнении, которое имеет вид где — количество атомов мишени, — поперечное сечение, — параметр потока, — время облучения, — постоянная распада.

Член в (4) называется фракцией насыщения. Он приближается к единице, когда скорость образования радиоизотопов равна скорости его распада. Измеренная скорость счета β-лучей от распада определенного изотопа в облученных образцах почвы связана с количествами исходного стабильного изотопа в образце через где — эффективность используемого детектора, а — абсолютное содержание гамма-излучения.

2. Отбор проб почвы

Поверхности соскребали для удаления размазанной почвы. Это было необходимо для сведения к минимуму воздействия помех миграции загрязняющих веществ из-за размазывания материала с других уровней. Ручные шнеки с 4-дюймовыми шнековыми ковшами из нержавеющей стали с режущими головками диаметром 10 см, выдвигающимися путем одновременного толкания и поворота с помощью прикрепленной ручки с удлинителями, использовались для продвижения скважин и сбора образцов почвы в неглубоких подповерхностных интервалах 30 см.Образцы почвы весом около 1 кг были собраны и сохранены в полиэтиленовом контейнере, как показано в таблице 2. Образцы были высушены на воздухе, а корни и любые другие посторонние материалы были удалены вручную. Образцы были запечатаны в пластиковые пакеты для транспортировки в лабораторию Центра энергетических исследований и обучения Университета Ахмаду Белло, Зария.

9182 9189 9180 9 -J1 918 918 918 13 KATCHA 2 918 918 918UL8 918UL8 9180 918UL8 IE2

Район местного самоуправления в штате Нигер Идентификация лаборатории Глубина по вертикали

Пайкоро 1 80 9180 Paikoro 1 80 9180 9189 PAI2 Paikoro 2 PAI-C2 30 см
Lapai 1 LAP-E1 30 см
Lapai 2 LAP-E2 30 см 9181
30 см
Mokwa 2 MOK-J2 30 см
Katcha 1 KAT-K1 30 см
K2 9180 см
Bida 1 BID-L1 30 см
Bida 2 BID-L2 30 см
Agaie 1 AGA-AE1 30 см
Agaie 2 AGA-AE2 30 см
Suleja 1 SUL-IE1 — 30 см
30 см

Цифры 1 и 2 указывают на два случайных местоположения в пределах района местного самоуправления.

Записи основных физических характеристик на каждом участке основывались на стандартных процедурах. Около 20 г образцов почвы из каждого полученного образца взвешивали с помощью весов Mettler, и в каждую точку добавляли 40 мл дистиллированной воды для образования раствора. Растворы перемешивали в течение 30 минут для гомогенизации смеси. На этом этапе измеряли pH почвы с помощью универсального индикатора MERCK pH. Термометр также был погружен в каждый из растворов в семи LGA для измерения температуры.

В CERT эти образцы просеивали в сухом виде через нейлоновую сетку 2 мм, а часть просеивали мокрым способом через сетку 150 мкм. Фракции сушили на воздухе в пакетах из крафт-бумаги при температуре окружающей среды, а затем сушили в печи при температуре приблизительно 80 ° C в течение 2 дней, измельчали, гомогенизировали и хранили в полиэтиленовых контейнерах, подкисленных азотной кислотой и промытых дистиллированной водой.

Переваривание образцов почвы проводили с использованием азотной кислоты (чистота 69%), хлорной кислоты (чистота 65%) и соляной кислоты (чистота 28%).Образец почвы размером 0,5000 ± 0,0002 г переваривали в смеси 10 мл концентрированной азотной кислоты, 3 мл хлорной кислоты и 2 мл соляной кислоты в течение 30 минут с использованием реакционной системы с ускорением с помощью микроволнового излучения.

Образцы переваренной почвы были проанализированы вместе со стандартным эталонным материалом (SRM) Национального института стандартов и технологий (NIST, 2709 San Joaquin Soil, в частности угольная зола-унос 1633b и IAEA-почва-7 для обеспечения качества и контроля).

3. Методика эксперимента

Каждый из образцов почвы был измельчен до мелкого порошка с помощью измельчения и немедленно упакован в пластиковые контейнеры.Эти образцы были плотно закрыты, смазывая внутренние края крышки каждого контейнера вазелиновым воском, а зазор крышки — воском свечи перед нанесением маскирующей клейкой ленты. Затем эти образцы хранили в течение 35 дней для достижения векового равновесия. Процедуры облучения проводились как радионуклидами с коротким периодом полураспада, так и радионуклидами с длительным периодом полураспада.

3.1. Протоколы облучения

Для радионуклидов с коротким периодом полураспада все образцы с одинаковым количеством и структурой матрицы из угольной летучей золы 1633b (NIST) стандартные стандартные образцы (SRM) и грунт-7 МАГАТЭ с массой 150–250 мг были облучение в течение двух минут во внешнем канале (B4), который находится далеко от активной зоны реактора, при настройке потока нейтронов 2.5 × 10 11 н / см 2 / сек. Для радионуклидов с длительным периодом полураспада образцы массой 150–250 мг вместе с некоторым количеством SRM облучались в течение шести часов во внутреннем канале (B2), который находится недалеко от активной зоны ядерного исследовательского реактора в установка нейтронного потока 5,0 × 10 11 н / см 2 / сек.

После облучения образцы и стандарт были выброшены из реактора с помощью процесса пневматического переноса и оставлены для разложения до подходящего мертвого времени.В случае коротких облученных образцов интересующие элементы с коротким периодом полураспада Al, Ca, Mg, Ti, V, Mn, Dy, Na, K и Cl были получены на основе двух протоколов. (I) Первый короткий период подсчет проводился сразу после облучения, и каждый из образцов и стандартов подсчитывался в течение пяти минут с использованием детектора из высокочистого германия (HPGe). (ii) Второй короткий подсчет проводился после периода распада в течение двух часов после облучения, и подсчет гамма-лучей в виде энергий проводился с использованием детектора HPGe в течение 2–3 часов для SRM и всех других образцов.

В случае длинно облученных образцов были установлены два протокола для получения любого из следующих элементов: As, Br, La, Sm, Yb, U, Sc, Cr, Fe, Co, Zn, Se, Rb. , Cs, Ba, Eu, Lu, Hf, Ta, Sb и Tb. (I) Первые этапы подсчета были выполнены через 4–5 дней распада, и оба типа образцов (SRM и все другие образцы) подсчитали в течение 10 минут. (ii) Второй этап подсчета был выполнен через девять дней для каждого типа, то есть SRM, и всех остальных образцов, считавшихся в течение шестидесяти минут.Все вышеупомянутые процедуры подсчета были выполнены на основе таблицы 3 в отдельной установке с детектором гамма-излучения HPGe и Pd-экраном для обеспечения безопасности аналитика и связанных электронных компонентов. Гамма-излучение от образцов измерялось детектором HPGe. Версия многоцелевого программного обеспечения для гамма-анализа WINSPAN 2004 [32] использовалась для идентификации пиков, спектрального анализа и количественной оценки присутствующих элементов.

918 918 9189 918 918 918 918 918 9189 Катача 1 9189 9ib радиоактивные источники: 137 Cs, излучающий гамма-излучение с энергией 662 кэВ и 60 Co, излучающее два гамма-излучения с энергией 1172 и 1332,5 кэВ. Кривая эффективности для детектора гамма-излучения из высокочистого германия (HPGe) (ORTEC), номер модели «GEM-30195», была разработана и опубликована [33].

4. Результаты и обсуждение

Из распределения температуры и значений pH в таблице 3 видно, что питательные вещества для растений на этих участках оптимальны для нормального роста. Это потому, что диапазон значений pH для нормального роста растений составляет 5,5 и 7,0. Однако PAI-C2 (Paikoro2) и AGA-AE1 (Agaie1) были исключительными со значениями pH 7,1 и 7,3 соответственно, демонстрируя свойства щелочных почв.

Данные контроля качества — это процесс управления использованием данных с известными показателями качества для приложения или процесса.Это достигается, когда был выполнен процесс обеспечения качества данных, который представляет собой оценку несогласованности данных или исправлений. На основании результатов, показанных в Таблице 4, процентное отклонение от сертифицированных (PDC) эталонных материалов зола уноса угля 1633b и МАГАТЭ-почва-7 показала согласованный процентный диапазон от ± 2,35% до ± 8,69%, за исключением случая Mg с отклонение -80% для угольной золы-уноса 1633b и 39,82% для МАГАТЭ-почва-7. Этот результат очень очевиден из-за двух ядерных реакций; 27 Al () 27 Mg и 26 Mg () 27 Mg.Эта ошибка была исправлена ​​путем измерения вклада реакции из () из-за 27 Al и вычитания этого же из () реакции из-за 26 Mg.


Район местного самоуправления в штате Нигер Лабораторная идентификация Значения pH Характер почвы Температура ° C

PA -С1 6.8 Слабокислая почва 29,00
Пайкоро 2 PAI-C2 7,1 Слабощелочная почва 28,90
Lapai 1
Lapai 1 28,80
Lapai 2 LAP-E2 6,2 Слабокислая почва 28,87
Mokwa 1 MOK-J1 62 Слабокислая почва 28,68
Mokwa 2 MOK-J2 6,2 Слабокислая почва 28,50
Катача 1 28,67
Katcha 2 KAT-K2 6,8 Слабокислая почва 28,30
Bida 1 BID-L1 6.7 Слабокислая почва 28,70
Bida 2 BID-L2 6,5 Слабокислая почва 28,22
Agaie 1 91 AGAie 1 91 AGAie 1 91 AGAie легкая 28,35
Agaie 2 AGA-AE2 6,4 Слабокислая почва 28,18
Suleja 1 SUL-IE13 6 .808 9808 92 Слабокислая почва 29.80
Suleja 2 SUL-IE2 6,5 Слабокислая почва 29.10

9
9 Сертифицированные значения Сертифицированные значения 1 1813 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 .41 66138 0 0 0 0 9

Элементы Летучая зола угля 1633b Значения PDC IAEA-почва-7 Значения PDC
1813 918 918

Dy (%) 18.10 17,00
Na (%) 0,21 0,20 0,26 0,24 9 9180 9 9180 9 0,49 0,68 1,13 39,82
Al (%) 14,6 15,05 2,99 4,94 1,51 6,62 0,31 0,30
Ti (%) 0,74 0,79 6,33 16,11 8 80 16,11 8 80 91 1,80 1,95 7,69 1,23 1,21
V (частей на миллион) 280,00 295,60 5,28
128.70 131.80 2.35 647.00 631.00

Из процедур анализа данных по обеспечению качества случайно были получены концентрации элементов в двух стратегических сельскохозяйственных образцах. Районы местного самоуправления Пайкоро, Лапай, Моква, Катча, Бида, Агаи и Суледжа в штате Нигер, Нигерия, показаны в таблице 5.

918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 9189 0 9118 9188 9188 9188

Участки отбора проб Mn K K Fe Al Ti Ca V Na Mg Dy

Paikoro 1 8 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918
Пайкоро 2 91 808
Lapai 1 2 9118 2
Mokwa 1 9180 9118 8 8 9180 9118 9189 9180 9118 8 9180 9118 8 9180
Катча 1 80 9118 9180 9118 9180 9118 9180 9118 80 9118
Катча 2
Бида 1
80 9118 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918
Bida 2
Agaie 1 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918 918
Agaie 2
9118 9188 9188 9188
Suleja 2 9180 9182 9182 9180 9180 9 9180 9 концентрации семи LGA, средние значения каждого из девяти элементов в таблице 5 были преобразованы в таблицу 6, где оцениваются средние значения каждого из десяти элементов из двух точек отбора проб в каждом LGA.

7 91 25,3

Площадки для отбора проб Mn K Fe Al Ti Ca V Na 9180 9180 Na 9180 9180 9189 9189 9189 9180 9189 9189 9180 9189
Paikoro (Av) 1722,5 3695 19,61 8560 2215 3135 18,95 210,2 2038 41813 413
Лапай (Av) 1022,4 8020 162,67 131057 3175 5175 79 282,45 8 1250 91,918 8 9182 9189 9182 9182 9182 9182 9182 9182 9182 8145 210,42 62950 3415 9810 96,345 480,25 2015 16,5
Katcha18 9138
Katcha18 9138 9188 47950 2830 1720 51 394,5 20050 1,41
Бида (Av) 6755 2830 9188
2830 9188
830
2830
374 9430 34,39
Agaie (Av) 648,5 6990 10,51 32000 4380 5490.55 800 48185 8,28
Suleja (Av) 413 4775 15,51 70050 3490 4340 3490 4340 4340 4340
Среднее значение 2100,8 5544,3 123,4 54752,4 3082,9 4635 54.3 857,5 13924,1 12,1

Av означает средние значения.
Концентрации измеряются в миллионных долях.

Железо в почве существует в железной (Fe ++ ) и трехвалентной (Fe +++ ) формах [34]. Зоны саванны Гвинеи в штате Нигер представляют собой богатые железом ферралитовые и железистые почвы. Соединения трехвалентного железа имеют низкую растворимость в почвенном растворе, а условия, способствующие образованию этих соединений, уменьшают доступность железа.Значения pH почвы для семи LGA варьировались от 6,2 до 7,3, что неизменно снижает концентрацию железа. Это имело место в Сулейе с минимальным средним значением концентрации Fe 15 51 ppm, в Agaie с минимальным значением 10,51 ppm и в Paikora с минимальным значением 19,61 ppm. Значения pH в двух случайных точках этих трех LGA составляли 6,2 и 6,5 для Suleja 1 и 2, 6,4 и 7,3 для Agaie 1 и 2, и 6,8 и 7,1 для Paikoro 1 и 2. На основе интерпретации анализа металлургического завода для некоторые общие культуры гвинейской саванны в Таблице 7, средние результаты, показанные в Таблице 6, показывают, что содержание Fe в Пайкоро составляет 19.61 ч. / Млн. Эта интерпретация с точки зрения сои и маниоки недостаточна и достаточна для картофеля, как показано в таблице 7. Для кача со средним значением 361,97 частей на миллион содержание Fe является высоким для всех культур, перечисленных в таблице 7. Для остальных LGAs Lapai, Mokwa, и Бида, концентрации Fe достаточны для культур, перечисленных в Таблице 7. Однако распределение Fe-столбца на Рисунке 2 показывает, что процентное распределение Fe в Моква и Лапаи составляло приблизительно 20%, а в Каче — 40%.В Пайкоро и Суледжа распределение составляет 2%, а в Агаи — 1,5%.

ppm –1880 918 / мин. 350 частей на миллион

Урожай Дефицит Низкий Достаточно Высокий

> 350 частей на миллион
Кукуруза <10 частей на миллион 10–50 частей на миллион 51–250 частей на миллион > 250 частей на миллион
Картофель 8 918 –300 частей на миллион > 300 частей на миллион
Арахис <10 частей на миллион 10–50 частей на миллион 51–250 частей на миллион > 250 частей на миллион
Кассава 30 918–21 ppm 31–250 ppm > 250 ppm


Вероятное изменение содержания Fe в проанализированных образцах почвы может быть связано с типами выращиваемых культур и системы земледелия, применяемой в регионах, где были собраны образцы.Штат Нигер — это регион саванны, где растения выращивают с корнями на глубине от 10 до 30 см для получения питательных веществ для растений [35]. Другая причина может быть связана с системой залежи земли [2], которая практикуется на семи территориях местного самоуправления, позволяя почве пополнять запасы питательных веществ после некоторого периода залежи. Результат этого анализа показывает, что концентрации этих десяти элементов находятся в ожидаемом диапазоне для почв [1]. Десять элементов в таблицах 5 и 6 были разделены на основные, второстепенные и следовые уровни.Основные элементы включают магний, алюминий, кальций, титан и калий, в то время как натрий и марганец находятся в незначительных количествах, а диспрозий — в следовых количествах.

Средняя концентрация алюминия в таблице 6 колеблется от 8560 частей на миллион в Пайкоро (2%) до 13 1057 частей на миллион в Лапаи (32%) и в целом была высокой в ​​образцах почвы, которые были проанализированы в семи районах местного самоуправления в штате Нигер. Такие факторы, как выжигание кустов и чрезмерная расчистка поля, могли повлиять на общую концентрацию Al в матрице почвы.Хотя физиологическая функция Al в растениях не ясна, очевидно, что высокие уровни Al могут оказывать отрицательное влияние на рост растений, особенно на нетолерантные к Al виды растений, такие как пшеница.

Марганец — это микроэлемент, концентрация которого в растениях способствует росту сои, арахиса, маниоки, картофеля, эгусимелона, риса и кукурузы [34]. Диапазон концентрации марганца в 7 районах местного самоуправления составил 2015,0 ppm в Моква с минимальным процентным значением 1.8%. Максимальная концентрация 50%, эквивалентная значению концентрации 12505,5 ppm, наблюдалась в Lapai. Среднее значение 13866,1 ppm наблюдалось для семи LGA. Средний диапазон концентрации натрия (Таблица 6) наблюдался в Paikoro LGA с минимальным процентным значением 2,2%, эквивалентным значению концентрации 210,2 ppm, как показано на Рисунке 1. Максимальное процентное значение 58% и концентрация 3350,5 ppm были наблюдается в Suleja LGA. Между тем, среднее значение Na 857.5 частей на миллион наблюдались в десяти LGA. Na, как питательное вещество, обычно поддерживает выращивание таких культур, как шпинат, получаемый через его корень глубиной около 5-10 см, и товарные культуры, выращиваемые с корнями относительно глубоко внутри почвы (~ 60 см вниз), такие как какао, колануты, горькая кола и т. Д. и так далее, полученные в рамках выборки LGA. На гистограмме (рис. 1) процентные распределения средней концентрации каждого из десяти элементов, проанализированных в семи LGA, показаны на каждой из полос.По шкале Mn процентное распределение (%) в каждом LGA показывает, что Mn составлял примерно 48% в Бида, затем 25% в Катча и 7% в Лапаи. В Агаи и Моква он составил 4% и 2% соответственно. Потребление магния некоторыми масличными семенами, такими как арахис, соя, эгусимелон, бенин, очень важно. Эти культуры серьезно выращиваются в штате Нигер, и эта работа показала, что в рамках семи исследований LGA среднее значение магния составляло 13924,1 частей на миллион, что является относительно высоким показателем.Как показано в таблицах 5 и 6, наблюдается равномерное распределение магния. Средняя концентрация кальция в семи LGA колеблется от 1720,0 промилле в Катче до 9810,0 промилле в Моква. Диапазон концентрации кальция, необходимый для растений [31], составляет от 0,1 до 0,2% (% = 1000 ppm). Однако кальций показывает относительно равномерное распределение в пределах семи LGA, потому что такой фактор обогащения, как кости мертвых животных, которые разложились или сгорели во время выжигания кустов, может неизменно приводить к увеличению содержания кальция в почвах.

Низкая концентрация ванадия полезна для микроорганизмов, животных и высших растений [1]. Увеличение роста растений наблюдалось у риса и кукурузы, связанного с ванадием [7]. Нормальная концентрация ванадия, необходимая для роста растений, составляет 2,0 частей на миллиард (частей на миллиард), тогда как нормальная концентрация ванадия в растительном материале составляет в среднем около 1,0 частей на миллион [36]. Концентрация ванадия в семи LGA была в среднем низкой (54,3 частей на миллион), а в Agaie LGA наблюдалась диапазон 11,6 частей на миллион и высокое среднее значение 96.В мокве наблюдались 3 промилле. Кроме того, калий требуется растению обычно в диапазоне от 1,0 до 4,0% [5] для правильных функций растений, включая метаболизм углеводов, активацию ферментов, осмотическое регулирование и эффективное использование воды [36]. Средняя концентрация калия колеблется от 3695,0 промилле в Пайкоро до 8145,0 промилле в Моква LGA.

Средняя концентрация титана, полученная в семи LGA, колеблется от 2075,0 ppm в Bida до 4380,0 ppm в Agaie. Тем не менее, нет четких доказательств биохимической роли титана.В [37] описана его возможная каталитическая функция в фиксации азота симбиотическими микроорганизмами и в фотоокислении соединений азота высшими растениями и некоторых процессах фотосинтеза. Титан не является важным элементом для питания растений. В [38] наблюдалось увеличение содержания хлорофилла в растениях томатов, выращенных в культуральном растворе, после опрыскивания раствором хелата Ti, что свидетельствует о биохимической роли титана в растениях. Средняя концентрация диспрозия, полученная в семи LGAS, колеблется от 1.От 405 промилле в катче до 1650,0 промилле в мокве. Было замечено, что средний диапазон концентрации диспрозия в почве должен составлять от 3,8 до 5 частей на миллион [9, 39].

Диспрозий, следовательно, можно описать как присутствующий на следовом уровне. Диспрозий входит в группу элементов, относящихся к редким элементам. Таким образом, этот минерал может не требоваться для питания растений, хотя может быть использован в других целях [40]. Среднее значение диспрозия в Бида, Моква и Лапаи составило 34.39 частей на миллион, 16,5 частей на миллион и 13,72 частей на миллион соответственно. Однако низкая концентрация диспрозия наблюдалась в LGA Катча, Пайкоро Агаи и Сулейя со значениями 1,41, 4,13, 8,28 и 6,01 частей на миллион соответственно.

5. Заключение

Всего десять элементов были идентифицированы в образцах почв как важные элементы для роста растений в семи LGA (Пайкоро, Лапай, Моква, Катча, Бида, Агаие и Суледжа) в районе саванны Гвинеи. штата Нигер в Северной Нигерии с использованием инструментального нейтронно-активационного анализа.Точность измерений, оцененная путем анализа летучей золы угля 1633b SRM и почвы МАГАТЭ-7, хорошо сравнивалась с сертифицированными значениями выявленных микроэлементов, представляющих интерес. Экспериментальные результаты показывают хорошее согласие с сертифицированными или литературными значениями в пределах согласованного процентного диапазона от ± 2,35% до ± 8,69%. Изучение образцов почвы из сельскохозяйственных угодий в семи LGA было проанализировано на предмет основных элементов, пригодных для роста растений. Средние значения Fe (123,4 г / т), Mn (2100.7 ppm), K (5544,3 ppm), Al (54752,4 ppm), Ti (3082,9 ppm), Ca (4635 ppm), V (54,3 ppm), Na (857,5 ppm), Mg (13924,1 ppm) и Dy (12,1 ppm) были получены в пределах сельскохозяйственных угодий. Однако наиболее распространенный диапазон pH почвы составляет 4,0–8,0 pH, а диапазон оптимальной доступности питательных веществ для растений для большинства культур составляет от 6,5 до 7,0 pH, в то время как температура составляет от 28,0 ° C до 29,3 ° C, как было получено в этой работе.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*

© 2011-2021 Компания "Кондиционеры"