Крепыш 2: Прицеп Крепыш 2 для легкового автомобиля купить в городе

Содержание

Легковой прицеп Крепыш 2 с размерами кузова 2х1,25

Подробнее о конструкции прицепа.

Рама и дышло. В основе прицепа – оцинкованная рама, укрепленная в центре силовым подрамником, предотвращающим деформацию на скручивание. Дышло прицепа выполнено в V-образной форме, лучи которого соединены между собой двумя прочными стальными пластинами с возможностью установки удлинителя дышла. Удлинитель может быть установлен в трех положениях: 1,35 м, 1,6 м и 2 м от переднего борта прицепа. В повседневной эксплуатации это позволит использовать прицеп в том числе и для перевозки длинномерных грузов, выступающих далеко за габариты прицепа.

Возможности перевозки грузов. По сравнению с классическим «Крепышом» новый прицеп получил увеличенный полезный размер кузова – шириной 1260 мм и длиной 2000 мм. Это расширяет возможности по перевозке объемных грузов! Например, обеспечивает свободное размещение внутри двух евро-паллетов, распространённых листовых стройматериалов и других габаритных и сыпучих грузов.

Как и многие курганские прицепы, «Крепыш 2» тоже имеет самосвальную систему, что значительно облегает погрузочно-разгрузочные работы. Замки дышла имеют надёжную оригинальную конструкцию собственной разработки, просты и удобны в использовании.

Прочные оцинкованные борта прицепа имеют высоту 320 мм и оснащены замками-защелками. Сами борта выполнены таким образом, что не имеют никаких выступающих элементов: груз не повредится при транспортировке. Передний и задний борта открываются. Для фиксации заднего борта имеются жесткие тяги или стальные тросики с карабином, для того чтобы зафиксировать его в горизонтальном положении, что увеличивает погрузочную площадь и не заслоняет панель задних световых приборов при перевозке длинномеров. Дополнительно прицеп можно укомплектовать надставными бортами высотой 200 мм, что увеличивает объём кузова.

Для защиты груза от атмосферных осадков и дорожной грязи на прицеп можно установить комплект дуг и тенты разной высоты: низкий — высотой 600 мм или высокий — 1100 мм от днища.

Днище прицепа изготовлено из транспортной влагостойкой фанеры.

Ходовая часть. Рессорно-амортизаторная подвеска прицепа «Крепыш 2» представлена в двух вариантах:

4-х листовая плавающая рессора воплощает в себе высокую надежность и доступность, простоту исполнения;
6-и листовая рессора с подрессорником собственной разработки нашего завода, которая зарекомендовала себя как «неубиваемая». Рессоры состоят из шести листов: 3 основных и 3 листа подрессорника с изменяемой (прогрессивной) от загрузки характеристикой, что дает ряд преимуществ: более бережное отношение к грузу, высокая устойчивость прицепа на дороге, низкая высота упрощает погрузочно-разгрузочные работы и делает прицеп более аэродинамичным, что экономит топливо тягача.

Колебания при движении по неровностям дорожного покрытия гасят гидравлические масляные амортизаторы.

Прицеп оснащен кованными ступицами собственного производства с усиленными подшипниками, рама и подвеска сконструированы так, что на прицеп можно устанавливать колеса разного диаметра 13, 15 и 16 дюймов по желанию потребителя.

Также прицеп может быть оснащен опорным колесом-автомат или обычном колесом (по выбору потребителя), благодаря чему можно легко перекатывать прицеп без автомобиля тягача. Особенность конструкции колеса-автомат заключается в том, что в процессе подъема колесо автоматически складывается вверх и не занимает пространства под дышлом прицепа. Это исключает повреждение колеса при движении по неровной дороге и позволяет не снимать его с прицепа. Также опорное колесо-автомат оснащено системой стояночного фиксатора, предотвращающего самопроизвольное скатывание прицепа на наклонной поверхности. Однако рекомендуется использовать противооткатный упор под колесо (башмак), который входит в комплект прицепа.

Прицеп «Крепыш» (8213 03) 2 ряда бортов, тент 0.6 метра, база ВАЗ R13

Модификации прицепа

2 ряда бортов, тент 1.1 метра, база ВАЗ R13 — 51 000 руб

2 ряда бортов, тент 0.6 метра, база Нива R15 — 65 000 руб

2 ряда бортов, тент 1.1 метра, база Нива R15 — 67 500 руб

2 ряда бортов, тент 0.6 метра, база УАЗ R16 — 63 500 руб

2 ряда бортов, тент 1.1 метра, база УАЗ R16 — 66 000 руб

Прицеп крепыш

Крепкий, надежный и удобный прицеп для легкового автомобиля «Крепыш» поможет Вам в перевозке различных грузов. Укрепленные борта из оцинкованного металла и V-образное дышло обеспечивают высокую прочность и долговечность прицепа. Рессорно-амортизаторная (с подрессорниками) подвеска с прогрессивной характеристикой позволяет добиться высокой плавности хода и устойчивости на дороге. Прицеп можно оснастить дополнительными рядами надставных бортов, тентом разной высоты и удлинителем дышла — перечисленное оборудование позволяет существенно увеличить возможности Вашего грузового прицепа. Для правильного положения курганского прицепа «Крепыш» при эксплуатации с внедорожниками, на прицеп ставят усиленные ступицы и колеса большего диаметра (R15, R16). Возможность увеличения дорожного просвета прицепа (на 5 см.) позволяет уверенно передвигаться по грунтовой дороге.

СПЕЦИАЛЬНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИЦЕПА «КРЕПЫШ»

Перевозка длинных грузов до 5,5 метров. С помощью удлинителя дышла, идущего в базовой комплектации прицепа, Вы сможете перевозить длинные грузы.

Увеличение дорожного просвета прицепа «Крепыш».

Увеличение высоты кузова прицепа. Установка дополнительного ряда бортов на прицеп «Крепыш» позволяет увеличить кузов на 25 сантиметров.

Купить прицеп Крепыш

Для того что бы купить прицеп в Новосибирске, оставьте заявку на нашем сайте или позвоните по контактному телефону, наши специалисты проконсультируют вас.

Прицеп для автомобиля Курганские прицепы Курганский Крепыш 2 / 161163

Обратите внимание!

Все прицепы доставляются в собранном виде, с комплектом всех необходимых документов для постановки на учет и выдается временный номер для безопасной транспортировки по дорогам общего пользования к месту регистрации.

В основе прицепа – оцинкованная рама, укрепленная в центре силовым подрамником, предотвращающим деформацию на скручивание. Дышло прицепа выполнено в V-образной форме, лучи которого соединены между собой двумя прочными стальными пластинами с возможностью установки удлинителя дышла. Удлинитель может быть установлен в трех положениях: 1,35 м, 1,6 м и 2 м от переднего борта прицепа. В повседневной эксплуатации это позволит использовать прицеп в том числе и для перевозки длинномерных грузов, выступающих далеко за габариты прицепа.

Колебания при движении по неровностям дорожного покрытия гасят гидравлические масляные амортизаторы.

Что можно перевозить на прицепе «Крепыш 2»:
— Листовые строительные материалы: ДВП, фанера, OSB, гипсокартон, МДФ, ДСП и т.д;

Сыпучие строительные материалы: щебень, песок, грунт и т.д;
— Кирпич, цемент, металлопрокат, доски, брус, кровельные материалы, евроокна;
— Бытовая техника и мебель;
— Малогабаритная мото-техника;
— Оборудование: генераторы, компрессоры, емкости для жидкостей и т.д.

Тип прицеп для автомобиля

Количество осей 1

Грузоподъемность 585 кг

Тип подвески рессорная

Тягово-сцепное устройство сцепной шар

Откидной борт есть

Съемные борты нет

Наклонная платформа есть

Размер колес R13 (98х4)

Нагрузка на сцепное устройство 750 кг

Длина 3455 мм

Ширина 1710 мм

Высота 980 мм

Длина платформы 2000 мм

Ширина платформы 1260 мм

Высота борта 320 мм

Масса прицепа 165 кг

Масса полная 750 кг

В комплект входят тент, опорное колесо, колеса, каркас, удлинитель дышла

Страна производства: Россия
Производитель: ЗАО Торговый дом «Курганские прицепы», ул. Омская, д. 82а, г. Курган, РФ
Импортер в РБ: ЧТУП «ТехноАгро», Гомельская обл., г. Гомель, ул. Борисенко 3″В», кабинет 14

Прицеп «Крепыш 2» 8213 03 (2000х1260) в Тюмени

Дополнительная информация:

Прицеп «Крепыш 2» 8213 03 имеет обширную базовую комплектацию и функционал. В базе, «Крепыш 2» укомплектован:

удлинителем дышла для перевозки 6 метровых материалов,
опорным колесом-автоматом для удобства маневрирования прицепом,
самосвальной сиситемой для легкой выгрузки сыпучих грузов,
комплектом оцинкованных бортов с удобными защёлками фляжного типа,
водонепроницаемым тентом для защиты груза от осадков и дорожной грязи,
а также крепкими страховочными цепями и гнездом для вилки.

В основе прицепа «Крепыш 2» – оцинкованная рама, укрепленная в центре силовым подрамником, предотвращающим деформацию на скручивание. Дышло прицепа выполнено в V-образной форме, лучи которого соединены между собой двумя прочными стальными пластинами с возможностью установки удлинителя дышла. Удлинитель дышла может быть установлен в трех положениях: 1,35 м, 1,6 м и 2 м от переднего борта прицепа. В повседневной эксплуатации это позволит использовать прицеп в том числе и для перевозки длинномерных грузов, выступающих далеко за габариты прицепа.

По сравнению с классическим «Крепышом» новый прицеп получил увеличенный полезный размер кузова – шириной 1260 мм и длиной 2000 мм. Это расширяет возможности по перевозке объемных грузов! Например, обеспечивает свободное размещение внутри двух евро-паллетов, распространённых листовых стройматериалов и других габаритных и сыпучих грузов.

Как и многие курганские прицепы, «Крепыш 2» тоже имеет самосвальную систему, что значительно облегает погрузочно-разгрузочные работы. Замки дышла имеют надёжную оригинальную конструкцию собственной разработки, просты и удобны в использовании.

Прочные оцинкованные борта прицепа имеют высоту 320 мм и оснащены замками-защелками. Сами борта выполнены таким образом, что не имеют никаких выступающих элементов: груз не повредится при транспортировке. Передний и задний борта открываются. Для фиксации заднего борта в горизонт положении прицеп можно до оснастить жесткими тягами или стальными тросиками с карабином — это увеличивает погрузочную площадь прицепа и позволяет не заслонять панель задних световых приборов при перевозке длинномеров. Дополнительно прицеп можно укомплектовать надставными бортами высотой 180 мм, что увеличивает объём кузова.

Для защиты груза от атмосферных осадков и дорожной грязи на прицеп можно установить комплект дуг и тенты разной высоты: низкий — высотой 600 мм или высокий — 1100 мм от пола прицепа. Пол прицепа изготовлен из транспортной влагостойкой фанеры.

Рессорно-амортизаторная подвеска прицепа «Крепыш 2» представлена 6-и листовой рессорой с подрессорником собственной разработки, которая зарекомендовала себя как «не убиваемая». Рессоры состоят из шести листов: 3 основных и 3 листа подрессорника с изменяемой (прогрессивной) от загрузки характеристикой, что дает ряд преимуществ: более бережное отношение к грузу, высокая устойчивость прицепа на дороге, низкая высота упрощает погрузочно-разгрузочные работы и делает прицеп более аэродинамичным, что экономит топливо тягача. Колебания при движении по неровностям дорожного покрытия гасят гидравлические масляные амортизаторы. Прицеп «Крепыш 2» оснащен кованными ступицами собственного производства с усиленными подшипниками, рама и подвеска сконструированы так, что на прицеп можно устанавливать колеса разного диаметра 13, 15 и 16 дюймов по желанию.

Размеры кузова заточены по листовые строительные материалы — ДВП, фанера, OSB, гипсокартон, МДФ, ДСП и т.д., но кроме них «Крепыш 2» с лёгкостью перевезёт сыпучие строительные материалы — щебень, песок, грунт и т.д., кирпич, цемент, металлопрокат, доски, брус, кровельные материалы, евроокна, бытовую технику и мебель, оборудование — генераторы, компрессоры, емкости для жидкостей и т.д..

В стоимость базовой комплектации входит:

Прицеп с одним уровнем бортов 320 мм;
Тент с дугами высотой 280 мм от бортов;
Удлинитель дышла в сборе;
Опорное колесо-автомат в сборе с хомутом;
Противооткатный упор 2шт.

Дополнительно, можно приобрести и укомплектовать прицеп:

Комплект оцинкованных надставных бортов высотой 180 мм = 5000 руб;
Подвеска R15 (Колеса R15 195/70, усиленная ступица 5*139,7 — Нива) (взамен базовой) = 11000 руб;
Подвеска R16 (Колеса R16 225/75, усиленная ступица 5*139,7 — УАЗ) (взамен базовой) = 16000 руб;
Тент с дугами высотой 750 мм от борта (взамен базового) = 2000 руб;
Усиленное опорное колесо в сборе с хомутом и крепежом (динамическая нагрузка 300 кг.) (взамен базового) = 2000 руб;
Опорное колесо с пневмошиной AL-KO в сборе с хомутом и крепежом (динамическая нагрузка 300 кг.) = 2000 руб;
Кронштейн крепления запасного колеса на дышло = 2100 руб;
Кронштейн крепления запасного колеса под кузов = 2100 руб;
Запасное колесо 165/70 R13 = 3500 руб;
Запасное колесо 195/70 R15/R16 = 5500 руб;
Лебёдка с установочным кронштейном (длина фала 5 м., тяговая нагрузка 450 кг) = 6500 руб;
Лебёдка с установочным кронштейном (длина фала 10 м., тяговая нагрузка 1100 кг) = 7500 руб;
Подступок боковой (с установкой) = 1000 руб;
Цепи с карабинами для фиксации заднего борта в горизонтальном положении (с установкой) = 900 руб;
Держатель вилки (с установкой) = 200 руб;
Противоугонный замок = 350 руб;
Брызговики резиновые (с установкой) = 500 руб;
Задняя опора в сборе (с установкой) = 2500 руб;
Светодиодные задние фонари (с установкой, взамен базовых) = 4800 руб;
Светодиодные контурные фонари (с установкой) = 1500 руб;
Стяжной ремень (400 кг, ширина 20 мм, длина 5 м) = 350 руб;
Стяжной ремень (1500 кг, ширина 30 мм, длина 5 м) = 700 руб;
Стяжной ремень (4000 кг, ширина 50 мм, длина 10 м) = 1100 руб.

Машинка Paw Patrol Мегащенки 2 с Крепышом 6056874

Отважный Крепыш из команды «Щенячьего Патруля» Мега Щенки Электролапы готов к новым подвигам на своем новом прокачанном грузовике! Крепыш (фигурка входит в комплект) уже сидит за рулем своего строительного грузовика, самое время спешить на помощь! Прокачанная машина Крепыша специально оборудована для захватывающих спасательных операций световыми и звуковыми сигналами, а также настоящими самоориентирующимися колесами, которые позволяют сделать разворот на 360 градусов в любом направлении! Нажми кнопку на передней панели автомобиля, чтобы включить световые эффекты и звуки — полупрозрачные детали машины подсвечиваются и раздаются захватывающие звуковые сигналы! Собери в коллекцию все прокачанные автомобили щенков-супергероев (каждый продается отдельно), чтобы всем вместе отправиться в увлекательные спасательные операции! Присоединяйся к Крепышу на его супер-машине и участвуй в сложнейших спасательных миссиях команды «Щенячий Патруль»!

АВТОМОБИЛЬ С ПОДСВЕТКОЙ И ЗВУКОВЫМИ ЭФФЕКТАМИ: У грузовика Крепыша из серии Мега Щенки «Электролапы» есть подсветка и звуковые эффекты, а также самоориентирующиеся колеса, которые позволяют ехать в любом направлении! Нажми на кнопку, чтобы активировать подсветку и звуки!
КАК НА ВОЗДУШНОЙ ПОДУШКЕ: С настоящими самоориентирующимися колесами как никогда легко спешить на помощь! Крутись и разворачивайся на 360 градусов в любом направлении, чтобы успеть помочь всем!
ФИГУРКА КРЕПЫША ВХОДИТ В КОМПЛЕКТ: Крепыш одет в свою желтую форму в тематике «Электролапы». Посади его за руль его роскошного автомобиля. Этот отважный щенок готов преодолеть любые сложности на своем пути!

Машинка Крепыша «Щенячий Патруль» Мега Щенки — Электролапы — отличный подарок для детей в возрасте от 3 лет и старше. Поспеши на помощь с отважными щенками из мультсериала «Щенячий патруль» и их супертехникой!

ВНИМАНИЕ! Для работы требуются батарейки: 3 x LR44.

Тент на прицеп крепыш (2,0х1,5) без аэроскоса

Изготовление автотентов на прицеп крепыш из материалов высшего качества по индивидуальным заказам

Специалисты ООО «Производственная Компания ЭлитТент» изготовят для вас морозостойкий, легкий в эксплуатации автотент на прицеп крепыш с гарантией на работы 1 год и сроком службы более 5 лет. Так же мы дадим гарантию на стыковочные швы, на весь срок эксплуатации тента.

У нас вы сможете заказать автотент на прицеп крепыш под боковую и верхнюю погрузку, выполненный индивидуально под ваш автомобиль, согласно требованиям.

Более 1501 автотента изготовлено для наших клиентов в числе которых прицеп крепыш

Практически все автотенты на прицеп крепыш изготавливаются и монтируются в течении 1 рабочего дня;
При изготовлении в местах стыка мы используем термосварку. В отличии от прошивания, где швы со временем расползаются, а места прокола ткани иголкой пропускают воду, термосварка при изготовлении вулканизирует места стыка материалов и препятствует пропусканию влаги и служит до окончания срока эксплуатации автотента на прицеп крепыш;
Тенты на прицеп крепыш изготавливаются из тканей с поливинилхлоридной (ПВХ) пропиткой в литом исполнении, что гарантирует изломоустойчивость, в отличии от дешевых автотентов на изготовленных из полиэтиленовых тканей методом ламинирования, эти тенты подвержены задубенею, из-за чего уже через несколько месяцев лопаются и пропускают влагу;
При изготовлении автотентов на прицеп крепыш, мы используем импортные ткани ПВХ с большей плотностью, в сравнении с дешевыми тентами из ламинированных материалов, которые при первом механическом воздействии рвутся. Автотенты на прицеп крепыш изготовленные на нашем производстве менее подвержены порыву и в большинстве случаев, от механических воздействий остаются только царапины;

Подбор материалов для автотента прицеп крепыш

При изготовлении для вас автотента на прицеп крепыш мы учитываем: эстетический вид, его будущую надежность и удобство в использовании, поэтому мы даем возможность вам выбрать свой будущий тент прицеп крепыш по трем параметрам:

Цвет: на выбор всегда есть красный, оранжевый, желтый, зеленый, голубой, синий, бордовый, черный, серый, белый, серебро, розовый, хаки;
Морозоустойчивость: В наличии всегда ткани ПВХ с МРЗ от -25 град. С. до -45 град. С.;
Плотность ткани (износостойкость): мы готовы предложить ткань ПВХ от 630 г/м2 до 900 г/м2;

Этапы оценки качества изготовленного автотента на прицеп крепыш

Автотенты на прицеп крепыш изготовленные у нас — это изделия высокого качества. Качество работ достигается благодаря трехэтапному контролю при изготовлении:

1 этап: Проверка правильности замеров, используемых материалов и раскройки;
2 этап: Технологическая проверка последовательности работ, качества стыковочных швов и мест установки люверсов;
3 этап: Проверка готового изделия после изготовления и монтажа;

Благодаря внедрению пошаговых, проверок соответствия внутренним регламентам изготовления изделия на мы смогли добиться максимального качества тента на прицеп крепыш на выходе с производства, о чем свидетельствуют многочисленные отзывы и благодарственные письма наших клиентов, среди которых, частные лица – владельцы собственного грузового автомобиля и крупнейшие транспортные компании, а также предприятия с собственным грузовым автотранспортом.

Подводя итог, можно сказать, что за рыночную стоимость автотента на прицеп крепыш вы получаете:

На весь срок эксплуатации автотента на прицеп крепыш, гарантию на стыковочные швы, благодаря технологии вулканизации;
Гарантию на изделие 1 год — это достаточный срок для проверки соответствия заявленного качества изделия;
Тент на прицеп крепыш со сроком службы пять лет и более, в зависимости от эксплуатации;
Установку изделия в течении одного рабочего дня;
Автотент на прицеп крепыш из морозостойкой ткани ПВХ;
Гарантию достижения оговоренного качества, за счет трех этапного контроля при производстве;
Изделие на прицеп крепыш с повышенной износостойкостью из литой ПВХ ткани;
Техническую поддержку на весь срок эксплуатации тента на прицеп крепыш;
Персонального менеджера;

Мы всегда рады видеть вас в числе наших клиентов, партнеров и друзей!

Арктос КРЕПЫШ-2

Электрические тепловентиляторы являются мощным и надежным источником теплого воздуха в помещениях, когда отсутствует или недостаточно центральное отопление. Их эксплуатация не требует специальных условий и коммуникаций, достаточно, чтобы к месту установки подводилась необходимая электрическая мощность. Тепловентиляторы «КРЕПЫШ» просты в управлении, компактны, легко переносятся на новое место. Они могут использоваться в помещениях различного назначения: на строительных площадках, в магазинах, торговых павильонах, киосках, производственных цехах, ангарах, в складских помещениях, в гараже или на даче, в мастерской или в жилом доме, в сельском хозяйстве и прочих местах, где требуется временный или постоянный дополнительный обогрев помещения или отдельных участков. Возможно применения тепловентиляторов для осушения поверхностей после окраски.
Крепыш-6, в отличие от других тепловентиляторов этого типа, распределяет тепловой поток в трёх направлениях, а Крепыш-12 – в шести .
Стандартный цвет – синий (RAL 5010).

Тепловентиляторы отвечают всем требованиям, предъявляемым к современному тепловому электрооборудованию:

Современный дизайн хорошо сочетается с интерьером различных помещений коммерческого, технического или жилого назначения;
Компактный и прочный корпус из оцинкованной стали покрыт долговечным полимерным порошковым покрытием, устраняющим вероятность коррозии;
Надежный импортный двигатель обеспечивает низкий уровень шума и рассчитан на долгую безотказную работу в течение многих лет;
Энергоэффективные металлокерамические ТЭНы не сжигают кислород и имеют увеличенный ресурс работы;
Встроенная защита от перегрева. Термопредохранитель отключают напряжение на нагревательном элементе без использования каких-либо промежуточных контактных устройств. Этим исключается возникновение пожара и выход из строя самого изделия;
Встроенный регулируемый термостат автоматически поддерживает постоянную температуру в помещении в диапазоне 5-45°С, обеспечивая для пользователя наиболее комфортные климатические условия;
Удобная система управления позволяет выбрать нужный режим работы:
вентиляция;
вентиляция с частичной мощностью нагрева;
вентиляция с полной мощностью нагрева.
Степень защиты IP 21;
Наружная решетка предотвращает попадание внутрь прибора посторонних предметов;
Могут использоваться в сухих, влажных и сырых помещениях;

Тепловентиляторы изготавливаются из импортных комплектующих, соответствуют Российским и Европейским нормам и отвечают стандартам.

Баллон с лекарственным покрытием для лечения стриктуры уретры: промежуточные результаты исследования ROBUST I

Вступление: Мы стремились изучить безопасность и предварительную эффективность баллона Optilume ™, покрытого паклитакселом, для лечения рецидивирующей стриктуры уретры.

Методы: Мужчины с бульбарными стриктурами уретры ≤2 см, прошедшие 1–4 предшествующих эндоскопических лечения, были включены в четыре исследовательских центра после одобрения этическим комитетом.Все пациенты прошли лечение с помощью механической баллонной дилатации или внутренней уретротомии с прямой визуализацией до лечения с использованием баллона с лекарственным покрытием. Пациентов оценивали через 2-5 дней, 14 дней, три, шесть и 12 месяцев после лечения. Первичной конечной точкой безопасности были серьезные осложнения через 90 дней после процедуры. Предварительной конечной точкой эффективности был анатомический успех, определенный как просвет уретры ≥14 Fr через 12 месяцев.

Полученные результаты: Всего было зарегистрировано и пролечено 53 субъекта; 46 завершили 12-месячное наблюдение.Сорок три процента мужчин ранее перенесли более 1 дилатацию; среднее значение для всей исследуемой популяции составило 1,7 предшествующих дилатаций. В течение 90 дней серьезных побочных эффектов, связанных с лечением, не было. Анатомический успех был достигнут у 32 из 46 пациентов (70%; 95% доверительный интервал [ДИ] 54–82%) через 12 месяцев. 14 неудачных попыток включали семь рецидивов цистоскопии, пять повторных курсов лечения и двух пациентов, которые рано вышли из исследования из-за рецидива симптомов.

Выводы: Годовые данные показывают, что баллон Optilume, покрытый паклитакселом, безопасен для лечения рецидивирующих стриктур бульбарной уретры.Ранние результаты по эффективности обнадеживают и поддерживают дальнейшее наблюдение за этими мужчинами в течение пяти лет, а также дальнейшее исследование с рандомизированным исследованием.

Разработка прочных линкеров на основе 2,2′-бипиридинового лиганда для стабильной иммобилизации молекулярных катализаторов на поверхностях кремния (111)

Прикрепление 2,2′-бипиридиновых (bpy) фрагментов к поверхности плоских кремниевых (111) (фото) электродов было исследовано с использованием ab initio моделирования , выполненного на новой кластерной модели кремния с концевыми метильными группами.Теория функционала плотности (B3LYP) с неявными методами сольватации показала, что дополнительные атомы хлора, когда они присутствуют в основной цепи органического линкера, приводят к нестабильности при очень отрицательных потенциалах электрода с модифицированной поверхностью. В предыдущей экспериментальной работе атомы хлора присутствовали в виде следовых примесей на поверхности из-за требуемой химии обработки поверхности и, таким образом, могли правдоподобно привести к наблюдаемой нестабильности поверхности линкера. Расчеты свободной энергии для процесса высвобождения атома Cl с модельными конструкциями силил-линкера выявили умеренный барьер (14.9 ккал моль ^-1 ), которое уменьшалось по мере того, как электродный потенциал становился более отрицательным. Небольшая библиотека новых структур, производных от bpy, была дополнительно исследована с помощью вычислений, чтобы определить стратегии, которые могут минимизировать индуцированную хлором нестабильность линкера. Предполагается, что структуры с фторсодержащими заместителями будут более стабильными, чем их хлорные аналоги, тогда как полностью негалогенированные структуры будут демонстрировать наивысшую стабильность. Поведение выделяющего водород молекулярного катализатора Cp * Rh (bpy) (Cp * = пентаметилциклопентадиенил), иммобилизованного на кремниевом (111) кластере, было теоретически исследовано для оценки различий между гомогенным и поверхностно-присоединенным поведением этого вещества в реакции таутомеризации. наблюдается в восстановительных условиях для каталитического выделения H ₂ .Рассчитанная разница в свободной энергии между таутомерами мала, поэтому результаты показывают, что использование восстановительно стабильных линкеров может обеспечить надежное прикрепление катализаторов при сохранении химического поведения на электроде, аналогичном тому, которое проявляется в гомогенном растворе.

Эта статья в открытом доступе

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуйте снова?

Вакцина против COVID-19 AZD1222 показала устойчивый иммунный ответ у всех участников исследования фазы I / II

Промежуточные результаты продолжающегося исследования COV001 фазы I / II, проводимого Оксфордским университетом, показали, что AZD1222 переносится и вызывал устойчивые иммунные ответы против вируса SARS-CoV-2 у всех оцениваемых участников.

COV001 — это слепое многоцентровое рандомизированное контролируемое исследование фазы I / II с 1077 здоровыми взрослыми участниками в возрасте 18–55 лет. Он оценивал однократную дозу AZD1222 против менингококковой конъюгированной вакцины сравнения, MenACWY. Десять участников также получили две дозы AZD1222 с интервалом в один месяц.

Результаты, опубликованные в журнале The Lancet , подтвердили, что однократная доза AZD1222 привела к четырехкратному увеличению количества антител к спайковому белку вируса SARS-CoV-2 у 95% участников через месяц после инъекции.У всех участников индуцировался Т-клеточный ответ, достигающий пика на 14 день и сохраняющийся через два месяца после инъекции.

Нейтрализующая активность против SARS-CoV-2 (по оценке с помощью анализа MNA80) наблюдалась у 91% участников через месяц после вакцинации и у 100% участников, получивших вторую дозу. Уровни нейтрализующих антител, наблюдаемые у участников, получавших одну или две дозы, были в том же диапазоне, что и у выздоравливающих пациентов с COVID-19. Сильные корреляции наблюдались во всех анализах нейтрализации.

Ранние ответные меры безопасности подтвердили, что временные местные и системные реакции были обычными в группе AZD1222 и были сопоставимы с предыдущими испытаниями и другими аденовирусными векторными вакцинами. ^1-4 Они включали временную боль и болезненность в месте инъекции, головную боль от легкой до умеренной, утомляемость, озноб, лихорадку, недомогание и мышечные боли. При приеме AZD1222 не сообщалось о серьезных побочных эффектах, реакции уменьшались при использовании профилактического парацетамола, болеутоляющего, и возникали реже после приема второй дозы.

Профессор Эндрю Поллард, главный исследователь Оксфордского испытания вакцины в Оксфордском университете и соавтор испытания, сказал: «Промежуточные данные фазы I / II для нашей вакцины против коронавируса показывают, что вакцина не вызвала каких-либо неожиданных реакций и имела профиль безопасности аналогичен предыдущим вакцинам этого типа. Иммунные ответы, наблюдаемые после вакцинации, соответствуют тому, что мы ожидаем, будет связано с защитой от вируса SARS-CoV-2, хотя мы должны продолжить нашу строгую программу клинических испытаний, чтобы подтвердить это.Мы наблюдали самый сильный иммунный ответ у участников, получивших две дозы вакцины, что указывает на то, что это может быть хорошей стратегией для вакцинации ».

Мене Пангалос, исполнительный вице-президент BioPharmaceuticals R&D, сказал: «Нас обнадеживают промежуточные данные фазы I / II, показывающие, что AZD1222 способен быстро генерировать антитела и Т-клеточный ответ против SARS-CoV-2. Хотя предстоит еще много работы, сегодняшние данные повышают нашу уверенность в том, что вакцина будет работать, и позволяют нам продолжать наши планы по производству вакцины в масштабах для широкого и равноправного доступа по всему миру.”

Испытания на поздних стадиях фазы II / III в настоящее время проходят в Великобритании, Бразилии и Южной Африке и должны начаться в США. Испытания определят, насколько хорошо вакцина защитит от болезни COVID-19, и измерит безопасность и иммунный ответ в разных возрастных группах и в различных дозах.

Параллельно AstraZeneca продолжает выполнять свои обязательства по обеспечению широкого и справедливого доступа к вакцине, если клинические испытания на поздних стадиях окажутся успешными. На данный момент обязательства по поставке более двух миллиардов доз вакцины согласованы с Великобританией, США, Европейским союзом инклюзивных вакцин, Коалицией по обеспечению готовности к эпидемиям, Альянсом Гави по вакцинам и Институтом сыворотки Индии.

Финансовые соображения

Ожидается, что сегодняшнее объявление не повлияет на финансовые прогнозы Компании на 2020 год, поскольку ожидается, что расходы на разработку вакцины будут компенсированы финансированием со стороны правительств и международных организаций.

Иммунные корреляты защиты от болезни COVID-19 ⁵

Корреляты защиты вакцины от COVID-19 еще не определены. Высокие уровни нейтрализующих антител были продемонстрированы у людей, выздоровевших от инфекции SARS-CoV-2.Кроме того, новые данные предполагают, что ответ Т-клеток может играть важную роль в смягчении заболевания. У некоторых людей, которые были инфицированы вирусом, но у них не было симптомов, развился устойчивый Т-клеточный ответ с отсутствием выявляемых антител. Быстрая индукция антител и Т-клеток против вируса SARS-CoV-2 может иметь важное значение для защиты от COVID-19.

COV001

COV001 — это одно-слепое рандомизированное контролируемое исследование фазы I / II для определения безопасности, иммуногенности и эффективности вакцины-кандидата от COVID-19 AZD1222 у 1077 здоровых взрослых в пяти исследовательских центрах в Великобритании.Участники в возрасте 18-55 лет получили либо разовую дозу, либо две дозы AZD1222 в количестве 5×10 ¹⁰ вирусных частиц, либо разовую дозу конъюгированной менингококковой вакцины MenACWY в качестве контрольной вакцины.

У участников были взяты образцы крови и проведена клиническая оценка безопасности, а также иммуногенности на 0, 28 день, а также будет наблюдаться на 184 и 364 день. Кроме того, участники, включенные в компонент фазы I исследования и в две группы доз. посещали через 3, 7, 14 и 28 дней после каждой вакцинации.

AZD1222

AZD1222 был разработан совместно Оксфордским университетом и его дочерней компанией Vaccitech. Он использует вирусный вектор шимпанзе с дефицитом репликации, основанный на ослабленной версии вируса простуды (аденовируса), который вызывает инфекции у шимпанзе и содержит генетический материал шипового белка вируса SARS-CoV-2. После вакцинации вырабатывается поверхностный спайковый белок, который заставляет иммунную систему атаковать вирус SARS-CoV-2, если он позже заразит организм.

АстраЗенека

AstraZeneca (LSE / STO / NYSE: AZN) — это глобальная научно-исследовательская биофармацевтическая компания, которая занимается открытием, разработкой и коммерциализацией рецептурных лекарств, в первую очередь для лечения заболеваний в трех терапевтических областях: онкология, сердечно-сосудистая система, почечная терапия и лечение заболеваний. Метаболизм, респираторная и иммунология. Компания AstraZeneca, штаб-квартира которой находится в Кембридже, Великобритания, работает более чем в 100 странах, а ее инновационные лекарства используют миллионы пациентов по всему миру.Посетите сайт astrazeneca.com и следите за информацией о Компании в Twitter @ AstraZeneca .

Контакты

Для получения подробной информации о том, как связаться с отделом по связям с инвесторами, щелкните здесь. Для контактов со СМИ щелкните здесь.

Kasco Marine Robust-Aire Система диффузионной аэрации 2

Описание

Система Robust-Aire RA2 включает качающийся поршневой компрессор, 200 футов утяжеленных трубок Sure Sink диаметром 3/8 дюйма и два (2) узла диффузора Robust Aire.

Диффузоры Robust-Aire

Диффузоры Robust-Aire являются наиболее эффективными на рынке и создают больший поток воды для аэрации вашего пруда. Диффузоры предназначены для создания мелких пузырьков воздуха с наименьшим давлением. Основание выполнено из прочного пластика, а запорная пробка позволяет засыпать его гравием или другим утяжеленным субстратом. Он имеет приподнятую конструкцию, благодаря чему диффузоры работают на оптимальном уровне над дном пруда. Надежное приспособление для снятия натяжения на болтах гарантирует, что утяжеленная трубка не отсоединится во время установки или технического обслуживания.Обратный клапан с уплотнениями из витона предотвращает попадание воды в трубки, когда система не работает.

Корпуса

: Каждая из систем доступна с тремя вариантами корпусов:

Вариант № 1 — Без шкафа (NC): это желательно, если вы хотите установить компрессорную систему в собственном здании. Компрессоры необходимо хранить в защищенном от погодных условий проветриваемом помещении. Выносной коллектор легко монтируется с помощью шурупов.

Вариант № 2 — Шкаф на стойке (PM) монтируется на внешней стене или деревянной стойке.

Размеры 19 ″ x 12 ″ x 12 ″ H.

Розетка на 120 В или распределительная коробка на 240 В.

Один охлаждающий вентилятор обеспечивает вентиляцию со скоростью 110 кубических футов в минуту.

Компрессор

монтируется на заводе в шкаф, который снабжен звукоизоляцией и замком на ключ.

Вариант № 3 — большой монтажный шкаф включен в качестве метода по умолчанию для системы.

Размеры 22 ″ x 17 ″ x 19 ″ H, включая

Розетка на 120 В или распределительная коробка на 240 В.

Один охлаждающий вентилятор обеспечивает вентиляцию со скоростью 110 кубических футов в минуту.

Компрессор установлен в закрывающемся на ключ шкафу.

Система Robust-Aire

Размер пруда *

(акров)

# Диффузор в сборе

Ампер

115 В / 230 В

куб. Фут / мин при 10 фунтах на кв. Дюйм

Трубка SureSink Weighted 3/8

Максимальная глубина

RA1

1.5

3,6 / 1,8

2,25

100 футов

40 футов

RA2

5,4 / 3,0

4.2

200 футов

40 футов

RA3

4,5

5,4 / 3,0

4,2

300 футов

40 футов

Утяжеленные трубки Sure Sink доступны в простых в обращении 100-футовых бухтах.Системы RA 1-3 включают 100 футов трубок диаметром 3/8 дюйма для каждого диффузора. Каждая катушка упакована в коробку и включает в себя полный пакет соединителей с зазубринами и переходников, а также хомуты для трубок из нержавеющей стали. Вы будете готовы выполнить любое необходимое соединение с помощью комплекта трубок. Дополнительные утяжеленные трубки SureSink 3/8 ″ или 5/8 ″ доступны, когда требуется дополнительная длина.

Поршневые компрессоры Robust-Aire

обеспечивает эффективную непрерывную работу с минимальным обслуживанием и бесшумной работой.Агрегаты очень тихие.

Уровень шума менее: 70 дБ без шкафа (оконный кондиционер), 65 дБ с шкафом и звукоизоляцией (нормальный разговор)

Безопасный запуск под давлением. Максимальная рабочая глубина 40 футов.

Гарантия: Один год полной гарантии на все детали.

границ | Адъювант CoVaccine HT ™ усиливает устойчивый иммунный ответ на рекомбинантную иммунизацию SARS-CoV-2 Spike S1

Введение

Вспышка нового коронавируса 2019 года (SARS-CoV-2), этиологического агента коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) , началась в Ухане, Китай, в конце 2019 года и быстро распространилась по всему миру, вызвав эпидемии на всех континентах, кроме Антарктиды, менее чем за четыре месяца.Этот вирус вызвал более 33 миллионов случаев заболевания и более 1 миллиона смертей во всем мире (по состоянию на 9-29-20) (1). SARS-CoV-2 очень передается как в предсимптоматической, так и в острой симптоматической фазах, а летальность от инфекции, как сообщается, достигает 3,4% (2). COVID-19 часто перерастает в тяжелое заболевание, включая пневмонию. В настоящее время нет лицензированных вакцин или эффективных терапевтических стратегий для лечения COVID-19. Имеющиеся данные указывают на то, что высокие титры антител, нацеленных на белок Spike, могут нейтрализовать вирус, и эта концепция является достоверной для близкородственного SARS-CoV (3–5).Вакцинные платформы на переднем крае разработки — это мРНК, ДНК, вирусные векторы (репликационные компетентные или некомпетентные), а также субъединицы рекомбинантных белков (6, 7). Многие вакцины-кандидаты могут потребовать адъювантации для индукции устойчивых иммунных ответов и быстрого индуцирования высоких титров антител. Однако нет единого мнения об оптимальном адъюванте, который лучше всего индуцирует защитный иммунитет к SARS-CoV-2.

Чтобы исследовать, какие адъюванты вызывают сильный гуморальный ответ, наша группа сформулировала вакцины-кандидаты на основе белковых субъединиц с использованием рекомбинантного белка субдомена 1 (S1) SARS-CoV-2 Spike, полученного от Sino Biological, Inc.с адъювантом либо CoVaccine HT ™, либо альгидрогелем. Первый является патентованным адъювантом, а второй — одобренным FDA адъювантом, который используется в нескольких вакцинах, лицензированных FDA. CoVaccine HT ™ представляет собой эмульсию типа масло-в-воде (М / В) гидрофобных, отрицательно заряженных сложных эфиров сульфата сахарозы и жирных кислот с добавлением сквалана (8, 9), тогда как Альгидрогель представляет собой коллоид гидроксида алюминия, который связывает белок для облегчения распознавание антигена и, таким образом, улучшение иммунного ответа (10). Механизм действия Альгидрогеля остается несколько неуловимым, однако этот адъювант, вероятно, взаимодействует с NOD-подобным рецепторным белком 3 (NLRP3), но не взаимодействует с TLR (11).Это различие в клеточной активации может объяснить различия, наблюдаемые между использованием CoVaccine HT ™ и представленным здесь альгидрогелем. Стабилизированная эмульсия «масло в воде» функционирует, генерируя реакцию, смещенную в сторону Т-хелперных клеток типа 1 (T _h 1), которые, в свою очередь, могут поддерживать Т-клетки CD8, способные смягчить вирусную инфекцию (12). Этот адъювант также способен индуцировать дифференцировку Т-клеток в Т-фолликулярные хелперные (T _fh) клетки, что проявляется в переключении класса иммуноглобулинов на IgG2a (13).Вместе эти клеточные ответы усиливают гуморальный ответ, о чем свидетельствуют общие более высокие титры IgG (13).

CoVaccine HT ™ также имеет преимущество по сравнению с Альгидрогелем в отношении размера частиц. Размер частиц альгидрогеля обычно составляет 1-10 микрон (14), тогда как размер капель CoVaccine HT ™ обычно составляет около 130 нм (15, 16). Меньшие размеры частиц обеспечивают повышенную стабильность и улучшенную адъювантность, для сравнения, размеры частиц других коммерческих стабильных адъювантов эмульсии М / В (MF59 и AS03) находятся в диапазоне 160 нм (17).Эти адъюванты эмульсии типа «масло в воде» используют сквален, продукт, полученный из акульего жира (9, 18, 19). Использование сквалана в CoVaccine HT ™ в качестве продукта растительного происхождения может быть выгодным из-за доступности, снижения регуляторной нагрузки и, возможно, идеологически для иммунизируемого населения. Таким образом, CoVaccine HT ™ может обеспечить явное преимущество перед альгидрогелем как более традиционный адъювант.

Здесь мы проверили иммуногенность белков SARS-CoV-2 Spike S1 с адъювантом CoVaccine HT ™, альгидрогелем или фосфатно-солевым буфером (PBS) на мышах BALB / c.Мы оценили общие титры антител, разнообразие подклассов иммуноглобулинов, клеточный иммунитет и нейтрализацию in vitro вируса SARS-CoV-2 дикого типа. Мы демонстрируем, что CoVaccine HT ™ вызывает быстрые гуморальные реакции, повышенное разнообразие подклассов, большую продукцию интерферона гамма (IFN-γ) и более высокие титры нейтрализующих антител, чем другие адъюванты. В совокупности CoVaccine HT ™ может иметь преимущество перед другими адъювантами для вакцины против SARS-CoV-2.

Методы

Вакцинация и сбор сыворотки

Мышей BALB / c (самцы и самки в возрасте 7-8 недель) иммунизировали дважды с интервалом в три недели, внутримышечно (IM) 5 мкг SARS-CoV-2 Spike S1 (Sino Biological 40592-V05H) с адъювантами или без них, или только адъювантом, с использованием инсулинового шприца с иглой 29-го размера.В качестве адъювантов использовались CoVaccine HT ™ (Protherics Medicines Development Ltd, Лондон, Великобритания) или 2% адъювант альгидрогель (InvivoGen, Сан-Диего, Калифорния). Сыворотку собирали путем кровотечения из хвоста через 2 недели после иммунизации или сердечной пункции для терминальных кровотечений. Дополнительный образец сыворотки собирали сердечной пункцией на 28 день вместе со спленоцитами у трех животных в группе Spike S1 + CoVaccine HT ™ (S1 + CoVac) и S1 + Alum, а также у двух животных в группе S1 + PBS. Исследования на мышах проводились с одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных Гавайского университета.При работе с животными соблюдались все этические нормы.

Серологический иммуноглобулиновый анализ

Карбоксилированные, окрашенные в инфракрасном диапазоне магнитные микросферы (Mag-Plex ™ -C) были получены от Luminex Corporation (Остин, Техас, США) и связаны с каждым антигеном, использованным в исследовании, как описано ранее (20, 21 ). Для связывания использовали двухэтапный карбодиимидный процесс, рекомендованный Luminex, чтобы связать 10 мкг очищенных белков с поверхностью 1,25 × 10 ⁶ микросфер. Микросферы также были соединены с бычьим сывороточным альбумином в качестве отрицательного контроля.Титры специфических иммуноглобулиновых антител к SARS-CoV-2, SARS-CoV и MERS-CoV в сыворотке мышей измеряли с помощью иммуноанализа с использованием микросфер, как описано ранее с некоторыми незначительными изменениями (13, 22, 23). Вкратце, микросферы, связанные с His-tag-белками Spike S1 SARS-CoV-2, SARS-CoV или MERS-CoV (Sino Biological 40591-V08H, 40150-V08B1 и 40069-V08H, соответственно), и контрольные шарики, связанные с альбумин бычьей сыворотки (BSA) объединяли и разводили в буфере MIA (PBS-1% BSA-0,02% Tween20) при разведении 1/200.Мультиплексные шарики (по 50 мкл, содержащие приблизительно 1250 шариков каждого типа) добавляли в каждую лунку 96-луночных планшетов с черной стороной (Greiner). 50 мкл разведенной сыворотки добавляли к микросферам в двух экземплярах и инкубировали в течение 3 ч на шейкере для планшетов, установленном на 700 об / мин в темноте при 37 ° C. Затем планшеты дважды промывали 200 мкл буфера MIA с использованием сепаратора магнитных пластин (Millipore Corp., Billerica, MA). 50 мкл конъюгированного с красным фикоэритрином (R-PE) фрагмента F (ab ’) 2 козьего антимышиного IgG, специфичного к фрагменту Fc (Jackson ImmunoResearch, Inc., West Grove, PA) добавляли в лунки в концентрации 1 мкг / мл и инкубировали в течение 45 мин. Титры антиген-специфичных подклассов IgG определяли с использованием мышиных антисывороток в разведении 1: 1000. Детектирующие антитела представляли собой подкласс-специфические козьи антимышиные поликлональные R-PE-конъюгированные антитела (Southern Biotech), используемые в разведении 1: 200. Планшеты дважды промывали, как описано выше, и затем микросферы ресуспендировали в 120 мкл приводной жидкости (MilliporeSigma) и анализировали на приборе MAGPIX (MilliporeSigma).Сбор данных, определяющий среднюю интенсивность флуоресценции (MFI), был установлен как минимум на 50 шариков на спектральную область. Гранулы, связанные с антигеном, распознавали и количественно оценивали на основе их спектральной характеристики и интенсивности сигнала, соответственно. Вначале рассчитывали пороговые значения анализа, взяв среднее значение технических дубликатов с использованием среднего MFI (обозначенного пунктирной черной линией) из контрольной группы, содержащей только адъювант. Пороговые значения были получены путем определения средних значений MFI плюс три стандартных отклонения, определенных программой Microsoft Office Excel.Графическое представление данных было выполнено с использованием Prism, Graphpad Software (Сан-Диего, Калифорния).

Тест нейтрализации уменьшения бляшек (PRNT)

PRNT выполняли в учреждении с уровнем биобезопасности 3 (в BIOQUAL, Inc.) с использованием 24-луночных планшетов. Сыворотки мышей, объединенные от отдельных мышей в каждой группе, разводили до 1:10 и проводили серию серийных разведений 1: 3 11 раз. Затем разбавленные образцы инкубировали с 30 бляшкообразующими единицами SARS-CoV-2 дикого типа (USA-WA1 / 2020, BEI Resources NR-52281) в равном объеме культуральной среды (DMEM-10% FBS с гентамицином) для 1 ч при 37 ° C.Смеси сыворотка-вирус добавляли к монослою конфлюэнтных клеток Vero E6 и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C в 5% CO ₂. Затем каждую лунку покрывали 1 мл культуральной среды, содержащей 0,5% метилцеллюлозы, и инкубировали в течение 3 дней при 37 ° C в 5% CO ₂. Затем планшеты фиксировали метанолом при -20 ° C в течение 30 минут и окрашивали 0,2% кристаллическим фиолетовым в течение 30 минут при комнатной температуре. Титры нейтрализации определялись как максимальное разведение сыворотки, которое приводило к снижению количества бляшек на 50% (PRNT ₅₀) и 90% (PRNT ₉₀).

Приготовление спленоцитов мыши и анализ FluoroSpot

Селезенки мышей собирали на 7 день после второй дозы, измельчали, пропускали через сетчатый фильтр и замораживали после лизиса эритроцитов. Клеточные иммунные ответы измеряли с помощью анализа IFN-γ FluoroSpot в соответствии с инструкциями производителя (каталожный номер FSP-4246-2 Mabtech, Inc., Цинциннати, Огайо). Вкратце, спленоциты выдерживали при 37 ° C в 5% CO ₂ в течение 3 часов после оттаивания, чтобы позволить удалить остатки клеток.Всего 2,5 x 10 ⁵ клеток на лунку в бессывороточной среде CTL-Test ™ (Cellular Technology Limited, Shaker Heights, OH) добавляли в 96-луночный мембранный планшет из PVDF, предварительно покрытый захватывающими моноклональными антителами, и стимулировали для 40 часов с пептидами, пептидный пул PepTivator ^® SARS-CoV-2 Prot_S1, состоящий из 15-мерных пептидов с 11 перекрывающимися аминокислотами, покрывающий N-концевой домен S1 белка Spike SARS-CoV-2 (Miltenyi Biotec, Auburn, CA) в концентрации 0,2 мкг / мл и 0,5 мкг / мл на пептид или только среду.Спленоциты (5 × 10 ⁴ на лунку) инкубировали с коктейлем PMA (0,01 мкМ) / иономицин (0,167 мкМ) (BioLegend, Сан-Диего, Калифорния) в качестве положительного контроля. Тесты проводились в двух экземплярах, и костимулирующее анти-CD28 антитело (0,1 мкг / мл) добавлялось к клеткам во время инкубации. Планшеты были разработаны с использованием специфических моноклональных детектирующих антител и вторичных реагентов, конъюгированных с флуорофором. Наконец, планшеты обрабатывали усилителем флуоресценции (Mabtech) для оптимизации обнаружения и затем сушили на воздухе.Пятна подсчитывали с использованием универсального анализатора CTL ImmunoSpot ^® S6 (Cellular Technology Limited, CTL, Shaker Heights, OH), и количество антиген-специфических цитокин-секретирующих пятен клеток (SFC) на миллион клеток для каждого условия стимуляции было определено. рассчитывается путем вычитания количества пятен, обнаруженных в среде только лунок.

Статистика

Все статистические тесты были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 8.0 (программное обеспечение GraphPad, Сан-Диего, Калифорния).

Результаты

Иммунизация мышей с помощью белков SARS-CoV-2 Spike S1

Нейтрализующие антитела SARS-CoV-2 в значительной степени нацелены на рецептор-связывающий домен, присутствующий в белке Spike S1 (24). Таким образом, мышам BALB / c давали две дозы коммерчески доступного Spike S1 с интервалом 21 день (рис. 1А). Чтобы проверить, могут ли адъюванты изменять иммунологические ответы на иммуноген, мышей разделили на четыре группы в зависимости от состава вакцины. Мыши, получавшие белок S1 и CoVaccine HT ™ (S1 + CoVac), альгидрогель (S1 + Alum) или PBS (S1 + PBS), получали SARS-CoV-2 Spike S1, смешанный с CoVaccine HT ™ («CoVac»), альгидрогелем. («Квасцы») или PBS соответственно.Одна группа получала только CoVaccine HT ™ в качестве адъювантного контроля (рис. 1A).

Рисунок 1 Иммуногенность и специфичность к иммунизации SARS-CoV-2 S1. (A) Временная диаграмма иммунизации BALB / c и кровотечений с таблицей, подробно описывающей дизайн исследования. (B) Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) сывороточных антител из каждой группы, связывающихся с пользовательскими магнитными шариками, связанными с белками Spike S1 от SARS-CoV-2 (SARS-2), SARS-CoV (SARS) или MERS- CoV (MERS) на 14 и 35 день. (C) Реактивность антител к антигенам SARS-2, SARS и MERS на протяжении всего исследования. Графики в (B, C) представлены в логарифмической шкале, представляя средние геометрические ответы MFI с 95% доверительным интервалом (ДИ). Пунктирные линии представляют собой пороговые значения анализа, определенные как среднее плюс три стандартных отклонения отрицательного контроля (шарики, связанные с BSA). Статистика стандартным двусторонним дисперсионным анализом. **** p-значение <0,0001.

Адъюванты изменяют иммуногенность и специфичность к иммунизации

Анализ сыворотки показал высокую реактивность SARS-CoV-2 S1-специфических антител IgG к S1 + CoVac после однократной дозы, в то время как титры S1 + квасцов были близки к исходному (рис. 1B).Только одно животное показало определяемый титр в группе только антигена в этот момент времени. Только в группе с CoVaccine HT ™ наблюдался низкий уровень перекрестной реактивности после первой дозы SARS-CoV S1. На 35 день S1 + Alum и S1 + PBS показали значительно более высокие ответы антител по сравнению с 14 днем, и различия между отдельными животными были уменьшены. Животные, обработанные S1 + CoVac, на 35 день постоянно демонстрировали очень высокие ответы антител у каждого животного. Точно так же перекрестная реактивность с SARS-CoV S1 была значительно увеличена для всех групп на 35-й день (рисунок 1B).Как и ожидалось, из-за гораздо более низкой гомологии последовательностей SARS-CoV-2 S1 не индуцировал IgG-ответы на MERS-CoV S1.

У пациентов, страдающих COVID-19, наблюдаются высокие титры RBD-специфических IgG (25). Однако более высокие титры SARS-CoV-2 Spike-специфических IgG связаны с пациентами, которым не требовалось лечение в отделении интенсивной терапии, в то время как более низкие титры связаны с увеличением тяжести заболевания (26). Следовательно, кинетика ответа антител может быть важным фактором для успешной вакцины-кандидата.Анализ динамики ответа IgG показывает, что адъювантный S1 может иметь решающее значение для сильных ранних ответов IgG со специфичностью SARS-CoV-2, в то время как вторая доза может снизить вариабельность среди отдельных животных и повысить перекрестную реактивность (рис. 1C).

CoVaccine HT ™ улучшает титры IgG к белкам SARS-CoV-2 и SARS-CoV S1

Для дальнейшего изучения ответов созревших IgG сыворотки с 35-го дня титровали в серии четырехкратных разведений, начиная с 1/250, и анализировали с помощью иммуноферментного анализа микросфер (МИА).Группы S1 + Alum и S1 + PBS показали реактивность к SARS-CoV-2 S1 при разведении до 1/256 000, что указывает на изобилие антиген-специфических IgG в сыворотках (рис. 2A). Однако титрование сывороток от S1 + CoVac выявило уровни насыщения IgG для пяти разведений, а определяемые уровни IgG присутствовали до разведения 1 / 65,5 миллиона. Антисыворотка к S1 + CoVac также показала значительно большую перекрестную реактивность с SARS-CoV S1 по сравнению с другими группами. Все группы оставались отрицательными в отношении перекрестной реактивности к БВРС-КоВ S1 (рис. 2А).Эти данные предполагают, что иммунизация SARS-CoV-2 S1 и CoVaccine HT ™ вызывает устойчивый антиген-специфический ответ IgG с ожидаемым профилем перекрестной реактивности, включающим SARS-CoV S1 (рис. 2B).

Рисунок 2 Титры сывороточного IgG против антигенов коронавируса S1. (A) Реактивность антигена в серии четырехкратных разведений сывороток мышей. (B) Площадь под кривой (AUC) данных в (A) . Оба графика имеют логарифмическую шкалу со средним геометрическим и 95% доверительным интервалом.Пунктирные линии в (A) представляют пороговое значение, определенное как среднее плюс три стандартных отклонения отрицательного контроля (шарики, связанные с BSA). K = x1000, M = x1000000, D.F. = коэффициент разбавления. Статистика стандартным односторонним дисперсионным анализом. **** p-значение <0,0001.

Повышенное разнообразие подклассов IgG и усиление титров вирусонейтрализующих антител с CoVaccine HT ™

Адъюванты, выступающие в качестве агонистов TLR4, такие как постулированные для CoVaccine HT ™, вызывают в основном ответ типа T _h 1 (27, 28).Между тем, Альгидрогель способствует в основном ответу типа T _h 2, возможно, посредством передачи сигналов NOD-подобного рецептора (29, 30). Анализ подкласса IgG можно использовать для определения того, был ли ответ T _h 1 или T _h 2 более выраженным. Таким образом, сыворотки из каждой группы адъювантов S1 + были проанализированы на предмет их подклассового состава (рис. 3). В соответствии с предыдущими результатами, группа S1 + CoVac показала разнообразный иммуноглобулиновый ответ, состоящий из подклассов IgG1, IgG2a и IgG2b, все из которых были дополнительно повышены после второй дозы вакцины.Также наблюдались низкие уровни IgG3. Альтернативно, группы только квасцов и антигена в первую очередь вырабатывают ответ IgG1 с некоторым определяемым IgM в группе квасцов, что представляет собой классический гуморальный ответ, связанный с T _h 2. Гетерогенные популяции подкласса, такие как наблюдаемые в группе S1 + CoVac, обычно связаны с ответами T _h 1, в то время как IgG1 характерен для ответа T _h 2. Для дальнейшего изучения природы этих эффектов адъюванта данные подкласса были стратифицированы для анализа соотношений подклассов T _h 1 и T _h 2 (рис. 3C).Этот анализ ясно показывает, что из трех протестированных составов только S1 + CoVac вызывал относительно сбалансированный гуморальный ответ. Кроме того, только композиция S1 + CoVac была способна индуцировать определяемые титры нейтрализующих антител против SARS-CoV-2, что продемонстрировано в тесте нейтрализации уменьшения образования бляшек с использованием вируса дикого типа (таблица 1). Титры PRNT ₉₀ и PRNT ₅₀ для этого состава указывают на сильную нейтрализацию (1: 1620).

Рисунок 3 Влияние адъюванта на разнообразие подклассов иммуноглобулинов. (A) подклассов IgG, реагирующих с антигеном SARS-2 S1 между 14-м и 35-м днями, нанесены на линейную шкалу. (B) Относительное количество изотипов иммуноглобулинов и подклассов IgG, реагирующих на антигены SARS-2 и SARS, определенное путем вычитания пороговых значений указанного подкласса из среднего геометрического для каждой группы. Общая средняя интенсивность флуоресценции (MFI), от которой подклассы составляют долю, указана под каждой круговой диаграммой. (C) Соотношения подклассов.Нормализованные значения MFI для каждого подкласса на мышь были нанесены на график как отношения с использованием среднего значения и стандартного отклонения. Статистика стандартным односторонним дисперсионным анализом. **** p-значение <0,0001.

Таблица 1. Титры нейтрализации SARS-CoV-2.

Влияние адъюванта на SARS-CoV-2 S1-специфические ответы IFN-γ

Мы оценили адъювантный эффект CoVaccine HT ™ и квасцов на клеточные иммунные ответы, направленные против SARS-CoV-2 S1, с использованием IFN-γ FluoroSpot проба. Отдельные селезенки мышей из каждой группы, собранные на 7 день после второй иммунизации, обрабатывали, и суспензии отдельных клеток стимулировали пептидами SARS-CoV-2 S1.Количество секретирующих IFN-γ клеток у мышей, которым вводили CoVaccine HT ™, было значительно выше, чем у мышей, которым вводили антиген Alum или S1 только при двух различных концентрациях пептида (фиг. 4). Спленоциты от невакцинированных (наивных) мышей не ответили на стимуляцию пептидом S1, и было обнаружено только 2 пятнообразующих клетки (SFC) / 10 (6) клеток. Результаты показывают, что CoVaccine HT ™ является превосходным адъювантом для индукции антиген-специфического Th2-ориентированного клеточного иммунного ответа, который имеет решающее значение для разработки вакцины против SARS-CoV-2.

Рисунок 4 Обнаружение клеток, секретирующих IFN-γ, у мышей, иммунизированных SARS-CoV-2. вакцина. Спленоциты получали от мышей (от 2 до 3 на группу), иммунизированных белком SARS-CoV-2 S1 с адъювантом CoVaccine HT ™ или квасцами, или только белком S1 на 28 день (через неделю после бустерной иммунизации). Объединенные спленоциты, полученные от двух наивных мышей, использовали в качестве контроля. Клетки инкубировали в течение 40 ч с пулами пептидов PepTivator ^® SARS-CoV-2 Prot_S1 при 0,2 мкг / мл или 0.5 мкг / мл на пептид или среду. Клетки, секретирующие IFN-γ, были подсчитаны с помощью FluoroSpot, как подробно описано в разделе, посвященном методам. Результаты выражаются как количество пятнообразующих клеток (SFC) / 10 ⁶ спленоцитов после вычитания количества пятен, образованных клетками в лунках только со средой, для корректировки фоновой активности. Достоверность различий между группами определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим «множественным сравнением Тьюки» *** p ≤ 0,001, **** p ≤ 0,0001.

Обсуждение

Пандемия COVID-19 стимулировала глобальные усилия по быстрой разработке вакцин против SARS-CoV-2.Изучаются многие стратегии вакцинации, включая инактивированный вирус, нереплицирующиеся вирусные векторы, рекомбинантный белок, ДНК и РНК, некоторые из которых прошли клинические испытания на людях (6, 7). Количество клинически применяемых адъювантов ограничено и включает квасцы и более новые препараты, такие как MF59 и AS03, обе эмульсии масло / вода с использованием сквалена (31). Небольшое количество адъювантов, одобренных для клинического использования, ограничивало разработку вакцин в прошлом и влияет на текущие клинические испытания вакцин против SARS-CoV-2.Многие подходы не используют адъювант, квасцы, MF59 или AS03, однако Novavax тестирует экспериментальный адъювант Matrix-M ™ (32). Хотя известно, что квасцы в первую очередь усиливают ответ T _h 2, было показано, что Matrix-M ™ и CoVaccine HT ™ вызывают ответ T _h 1 с рекомбинантными субъединицами. В связи с ранее наблюдаемым потенциалом усиленной иммунопатологии, связанной, в первую очередь, с T _h 2-направленными вакцинами против SARS-CoV (33, 34), разработка вакцины COVID-19 может потребовать тестирования множества адъювантов для выявления защитных иммунные ответы на SARS-CoV-2.Ранее было показано, что адъювант на основе сквалана в воде, CoVaccine HT ™, индуцирует мощные титры вирусных нейтрализующих антител и обладает защитной эффективностью у мышей и приматов, не относящихся к человеку, к нескольким инфекционным агентам, и недавно был лицензирован Soligenix, Inc. использование при разработке вакцины против SARS-CoV-2 (35–38).

В этом исследовании мы исследовали иммуногенность рекомбинантного SARS-CoV-2 Spike S1 отдельно или в сочетании с квасцами или CoVaccine HT ™ в качестве потенциальных адъювантов. В целом, мы наблюдали наиболее мощные гуморальные и клеточные иммунные ответы, включая ответы нейтрализующих антител, в группе исследования CoVaccine HT ™.Титры на 14-й день (после введения дозы 1) показывают, что этот состав может быть эффективным даже после введения разовой дозы, однако в текущем исследовании это не исследовалось. Ни один антиген, ни комбинация с квасцами не смогли индуцировать обнаруживаемые нейтрализующие антитела с модельным антигеном, используемым в этом исследовании. Это может быть связано с более медленной кинетикой ответа, вызванной презентацией антигена, однородностью подкласса или ограниченными иммунными ответами T _h 2 по сравнению с введением S1 с CoVaccine HT ™.

Иммуногенность вакцин на основе белковых субъединиц часто уступает в генерировании устойчивых иммунных ответов по сравнению с другими платформами, такими как платформы, основанные на живых аттенуированных вирусах. Как видно здесь, одного (мономерного) домена S1 недостаточно для создания иммунного ответа с высоким титром. Добавление CoVaccine HT ™ улучшило титры антител и кинетику ответа и, как было доказано, индуцирует высокие титры антител, нейтрализующих SARS-CoV-2 дикого типа. Было показано, что титры SARS-CoV-2 S1 IgG коррелируют с вирусной нейтрализацией у людей (39).Реакции нейтрализации вируса у кроликов после двух иммунизаций 50 мкг SARS-CoV-2 S1 и адъюванта Emulsigen (эмульсия масло в воде) составляли 1: 160 в анализе нейтрализации дикого типа по сравнению с титрами 1: 800, достигнутыми при иммунизации. с SARS-CoV-2 RBD (40). Точно так же адъюванты на основе эмульсии улучшали кинетику и титры антител у морских свинок по сравнению с альгидрогелем или без адъюванта при иммунизации gp140 ВИЧ-1 (41). Это демонстрирует важность достижения комбинации антиген / адъювант с желаемыми свойствами.В нашем исследовании титры после введения дозы 1 в группе S1 + CoVac напоминают титры после введения дозы 2 с квасцами или без адъюванта и могут предполагать, по крайней мере, частичную защиту после однократной дозы. Создание сильного иммунитета после однократной дозы является привлекательной целью для любой разрабатываемой вакцины против SARS-CoV-2 и может улучшить влияние вакцины на дальнейшее течение пандемии.

Высокая эффективность SARS-CoV-2 S1 в составе CoVaccine HT ™ может быть связана с наблюдаемым разнообразием подклассов иммуноглобулинов.Это указывает на то, что CoVaccine HT ™ может эффективно индуцировать переключение класса, которое часто считается повышающим сродство антител. Кроме того, состав широкого подкласса IgG является ключевым для индукции опосредованных комплементом эффекторных функций антител, а также нейтрализации и опсонизации, которые обычно необходимы для смягчения вирусных инфекций. Идеальная популяция антител для борьбы с SARS-CoV-2 еще предстоит выяснить. Однако наши серологические данные на мышах предполагают, что кинетика и разнообразие подклассов могут иметь ключевое значение для развития эффективных иммунных ответов.Кроме того, мы продемонстрировали, что CoVaccine HT ™ является не только подходящим адъювантом для вакцинации, но и предпочтительнее, чем альгидрогель, учитывая качество гуморального ответа из-за быстрого начала, баланса, общей величины ответа, а также значительно большей клеточно-опосредованной иммунные ответы.

Были высказаны опасения относительно антителозависимого усиления (ADE) при инфекции SARS-CoV-2 или иммунизации. Это явление происходит, когда ненейтрализующие или плохо связывающиеся антитела взаимодействуют с рецепторами Fc на антигенпрезентирующих клетках и способствуют инфицированию.Это взаимодействие увеличивает выработку провоспалительных цитокинов, что усугубляет иммунопатологию (42). ADE ранее наблюдалась при инфекции SARS-CoV, вызванной антителами против Spike через пути FcγR и FcγRII (43, 44). При респираторно-синцитиальных вирусных инфекциях только ответ T _h 2 может привести к аберрантным иммунным ответам, связанным с ADE, вызванным либо предшествующей инфекцией, либо иммунизацией (45, 46). По этим причинам может быть оправдана осторожность при использовании квасцов в качестве адъюванта для SARS-CoV-2, по крайней мере, для субъединичного белка, используемого в этом исследовании.Кроме того, наши данные предполагают, что антиген сам по себе может также вызывать преимущественно реакцию типа T _h 2 при иммунизации рекомбинантным антигеном S1 у мышей. Напротив, субъединичный белок с CoVaccine HT ™ продуцирует нейтрализующие антитела при усилении ответов T _h 1, что может повысить долговечность, безопасность и эффективность вакцины.

Предыдущие исследования SARS-CoV, наиболее тесно связанного с SARS-CoV-2 бета-коронавируса человека, показали, что у выздоровевших пациентов развиваются существенные Т-клеточные ответы, которые сохраняются до 11 лет (47, 48).Кроме того, исследования на животных показали, что ответы Т-клеток играют решающую роль в защите от инфекции SARS-CoV (49–51), предполагая, что наиболее вероятно, что ответы Т-клеток на SARS-CoV-2 являются защитными. Несмотря на очень ограниченное понимание адаптивных иммунных ответов на SARS-CoV-2, сообщалось, что вирус-специфические Т-клеточные ответы выявляются у 70–100% выздоравливающих пациентов с COVID-19 и примерно у 50% CD4 + Т-лимфоцитов. ответ направлен против белка S и коррелирует с величиной ответа антител против S (52).Кроме того, большинство CD4 ⁺ Т-клеток, по-видимому, относятся к типу T _h 1, при этом секреция цитокинов T _h 2 практически отсутствует (52). Это предполагает, что вакцина-кандидат от SARS-CoV-2, состоящая из S-белка, может индуцировать устойчивый Т-клеточный ответ CD4 ⁺, который повторяет вызванный иммунный ответ во время естественной инфекции. В этом исследовании мы показали, что SARS-CoV-2 S1 с адъювантом CoVaccine HT ™ вызывает сильный клеточный иммунный ответ, секретирующий IFN-γ, на пептидную стимуляцию, что указывает на индукцию Т-клеточного ответа T _h 1, что подчеркивает потенциал этой комбинации антиген / адъювант для защиты от инфекции SARS-CoV-2.Однако потребуется дальнейший углубленный анализ клеточных иммунных ответов, чтобы охарактеризовать Т-клеточные ответы CD4 ⁺ и CD8 ⁺ и их корреляцию с титрами антител. В будущей работе следует также изучить механизмы действия на клеточном уровне и, возможно, включить более широкий выбор адъювантов М / В для определения различий, имеющих потенциальную клиническую значимость.

В целом CoVaccine HT ™ представляет собой эффективный адъювант, который в сочетании с правильно подобранным рекомбинантным субъединичным белком способствует быстрой индукции сбалансированных гуморальных и клеточных иммунных ответов и позволяет ускорить доклиническую и клиническую разработку вакцины против SARS-CoV-2 для смягчения продолжающегося COVID-19 пандемия.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами по запросу без излишних оговорок.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом Институционального ухода и использования животных Гавайского университета.

Вклад авторов

Вклад авторов BH и C-YL равный. BH, CW, TW, C-YL, ML и AL: задумал и разработал эксперименты.BH и TW: Иммунизация и сбор крови. BH и C-YL: спленэктомия. BH: Иммуноанализ микросфер и исследования проточной цитометрии. C-YL: анализ флуороспот. BIOQUAL: Анализы нейтрализации вирусов. BH, CW, TW, ML и AL: написание и редактирование рукописей. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Мы хотели бы поблагодарить R01AI132323 (Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний), P30GM114737 (Центры передового опыта биомедицинских исследований, Национальный институт общих медицинских наук) и институциональные фонды за частичное финансирование этих исследований.Спонсоры не играли никакой роли в концептуализации, дизайне, сборе данных, анализе, решении опубликовать или подготовке рукописи.

Конфликт интересов

AL назван в патентной заявке, охватывающей рекомбинантную субъединичную вакцину против SARS-CoV-2. LP и HA-E использовались BIOQUAL, Inc.

Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы выразить признательность за следующий реагент, депонированный Центрами по контролю и профилактике заболеваний и полученный через BEI Resources, NIAID, NIH: SARS-Related Coronavirus 2, Isolate USA-WA1 / 2020, NR-52281. Мы также хотели бы отметить подарок CoVaccine HT ™ от компании Protherics Medicines Development (Лондон, Великобритания) и поблагодарить доктора Ореолу Донини (Soligenix, Inc., Принстон, Нью-Джерси) за расширенное сотрудничество, включая стратегические обсуждения и критическое чтение. этой рукописи.Мы также хотели бы поблагодарить за частичное финансирование этих исследований R01AI132323 (Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний), P30GM114737 (Центры передового опыта биомедицинских исследований, Национальный институт общих медицинских наук) и институциональные фонды. Эта рукопись была выпущена в виде препринта в BioR _x iv (53).

Ссылки

2. Ван И, Ван И, Чен И, Цинь К. Уникальные эпидемиологические и клинические особенности появляющейся новой коронавирусной пневмонии 2019 года (COVID-19) требуют специальных мер контроля. J Med Virol (2020) 92 (6): 568–76. doi: 10.1002 / jmv.25748

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, Kruger N, Herrler T., Erichsen S, et al. Вхождение клеток SARS-CoV-2 зависит от ACE2 и TMPRSS2 и блокируется клинически подтвержденным ингибитором протеазы. Ячейка (2020) 181 (2): 271–80 e8. doi: 10.1016 / j.cell.2020.02.052

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4.Тай В., Хе Л., Чжан Х, Пу Дж., Воронин Д., Цзян С. и др. Характеристика рецептор-связывающего домена (RBD) нового коронавируса 2019 г .: значение для разработки белка RBD в качестве ингибитора прикрепления вируса и вакцины. Cell Mol Immunol (2020) 17 (6): 613–20. doi: 10.1038 / s41423-020-0400-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Бишт Х., Робертс А., Фогель Л., Суббарао К., Мосс Б. Нейтрализующие антитела и защитный иммунитет к коронавирусной инфекции SARS мышей, индуцированной растворимым рекомбинантным полипептидом, содержащим N-концевой сегмент гликопротеина шипа. Вирусология (2005) 334 (2): 160–5. doi: 10.1016 / j.virol.2005.01.042

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Тхань Ле Т., Андредакис З., Кумар А., Гомес Роман Р., Толлефсен С., Сэвилл М. и др. Пейзаж разработки вакцины против COVID-19. Nat Rev Drug Discov (2020) 19 (5): 305–6. doi: 10.1038 / d41573-020-00073-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Стивенс Н. Э., Фрейзер К. К., Альшарифи М., Браун М. П., Динер К. Р., Хейболл Д. Д..Эмпирический подход к эффективному и оптимальному продуцированию нейтрализующих грипп овечьих поликлональных антител демонстрирует, что новый адъювант CoVaccine HT функционально превосходит адъювант Фрейнда. PLoS One (2013) 8 (7): e68895. doi: 10.1371 / journal.pone.0068895

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Blom AG, Hilgers LA. Сульфатные эфиры сахарозы и жирных кислот в качестве новых вакцинных адъювантов: влияние химического состава. Vaccine (2004) 23 (6): 743–54.doi: 10.1016 / j.vaccine.2004.07.021

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Харрис Дж. Р., Соляков А., Льюис Р. Дж., Депойс Ф, Уоткинсон А., Лейки Дж. Х. Адъювант Alhydrogel®, ультразвуковая дисперсия и связывание с белками: ТЕМ и аналитическое исследование. Микрон (2012) 43 (2–3): 192–200. doi: 10.1016 / j.micron.2011.07.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Сан Х., Поллок К.Г., Брюер Дж. М.. Анализ роли вакцинных адъювантов в модуляции активации дендритных клеток и презентации антигена in vitro . Vaccine (2003) 21 (9–10): 849–55. doi: 10.1016 / s0264-410x (02) 00531-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Снелл Л.М., Осокин И., Ямада Д.Х., Де ла Фуэнте Дж.Р., Эльзаэссер Х.Дж., Брукс Д.Д. Преодоление ограничений клеточной судьбы CD4 Th2 для поддержания антивирусных Т-клеток CD8 и борьбы с устойчивой вирусной инфекцией. Cell Rep (2016) 16 (12): 3286–96. doi: 10.1016 / j.celrep.2016.08.065

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

13.To A, Medina LO, Mfuh KO, Lieberman MM, Wong TAS, Namekar K, et al. Рекомбинантные субъединицы вируса Зика иммуногенны и эффективны у мышей. мSphere (2018) 3: e00576-17. doi: 10.1128 / mSphere.00576-17

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Орр М.Т., Кхандхар А.П., Сейду Э., Лян Х., Гейдж Э., Микаса Т. и др. Перепрограммирование адъювантных свойств оксигидроксида алюминия с помощью технологии наночастиц. Вакцины NPJ (2019) 4: 1. DOI: 10.1038 / s41541-018-0094-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Hilgers LAT, Platenburg PL II, Luitjens A, Groenveld B, Dazelle T., Ferrari-Laloux M, et al. Новый адъювант на основе неминерального масла. I. Эффективность синтетического сульфолипополисахарида в эмульсии сквалан-в-воде у лабораторных животных. Vaccine (1994) 12 (7): 653–60. doi: 10.1016 / 0264-410x (94)

-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17.Shah RR, Taccone M, Monaci E, Brito LA, Bonci A, O’Hagan DT и др. Размер капель эмульсионных адъювантов оказывает значительное влияние на их эффективность из-за различий в рекрутинге и активации иммунных клеток. Научный журнал (2019) 9 (1): 11520. doi: 10.1038 / s41598-019-47885-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Гаркон Н., Вон Д. В., Дидьерлаурент А. М.. Разработка и оценка AS03, адъювантной системы, содержащей альфа-токоферол и сквален в эмульсии масло-в-воде. Expert Rev Vaccines (2012) 11 (3): 349–66. doi: 10.1586 / erv.11.192

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Намекар М., Кумар М., О’Коннелл М., Nerurkar VR. Влияние тепловой инактивации и разведения сыворотки на обнаружение антител против WNV у мышей иммуноанализом микросфер Е-белка вируса Западного Нила. PLoS One (2012) 7 (9): e45851. doi: 10.1371 / journal.pone.0045851

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21.Вонг С.Дж., Демарест В.Л., Бойл Р.Х., Ван Т., Ледизет М., Кар К. и др. Обнаружение человеческих антител к флавивирусу с помощью иммуноанализа рекомбинантного антигена вируса Западного Нила. J Clin Microbiol (2004) 42 (1): 65–72. doi: 10.1128 / JCM.42.1.65-72.2004

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Хаун Б.К., Камара В., Двех А.С., Гаральде-Мачида К., Форкай ССЭ, Такаазе М. и др. Серологические доказательства воздействия вируса Эбола на собак из затронутых сообществ в Либерии: предварительный отчет. PLoS Neglected Trop Dis (2019) 13 (7): e0007614. doi: 10.1371 / journal.pntd.0007614

CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Кумар М., О’Коннелл М., Намекар М., Nerurkar VR. Инфекция нелетальным штаммом вируса Западного Нила Eg101 вызывает иммунитет, который защищает мышей от летального штамма вируса Западного Нила NY99. Вирусы (2014) 6 (6): 2328–39. doi: 10.3390 / v6062328

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Jiang S, Hillyer C, Du L.Нейтрализующие антитела против SARS-CoV-2 и других коронавирусов человека: (Trends in Immunology 41, 355-359; 2020). Trends Immunol (2020) 41 (6): 545. doi: 10.1016 / j.it.2020.04.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Сунь Б., Фенг Й., Мо Х, Чжэн П., Ван Ц., Ли П. и др. Кинетика специфических для SARS-CoV-2 ответов IgM и IgG у пациентов с COVID-19. Emerg Microbes Infect (2020) 9 (1): 940–8. DOI: 10.1080 / 22221751.2020.1762515

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27.Мацуока Ю., Такаги Х., Яматани М., Курода Ю., Сато К., Кодзима Н. Потребность в передаче сигналов TLR4 для индукции иммунного ответа Th2, вызванного липосомами, покрытыми олигоманнозой. Immunol Lett (2016) 178: 61–7. doi: 10.1016 / j.imlet.2016.07.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Перрен-Кокон Л., Агауг С., Диас О., Ванбервлиет Б., Долле С., Гиронне-Паке А. и др. Функция Th2 отключена в ответ на стимуляцию TLR4 моноцитарных ДК у пациентов, хронически инфицированных вирусом гепатита С. PLoS One (2008) 3 (5): e2260. doi: 10.1371 / journal.pone.0002260

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. Ли Х., Уиллингем С.Б., Тинг Дж. П., Ре Ф. Передовые технологии: активация инфламмасом под действием квасцов и адъювантный эффект квасцов опосредованы NLRP3. J Immunol (2008) 181 (1): 17–21. doi: 10.4049 / jimmunol.181.1.17

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Morefield GL, Sokolovska A, Jiang D, HogenEsch H, Robinson JP, Hem SL.Роль алюминийсодержащих адъювантов в интернализации антигена дендритными клетками in vitro . Vaccine (2005) 23 (13): 1588–95. doi: 10.1016 / j.vaccine.2004.07.050

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Gupta T, Gupta SK. Возможные адъюванты для разработки вакцины против SARS-CoV-2 на основе результатов экспериментов с аналогичными коронавирусами. Int Immunopharmacol (2020) 86: 106717. doi: 10.1016 / j.intimp.2020.106717

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33.Luo F, Liao FL, Wang H, Tang HB, Yang ZQ, Hou W. Оценка антителозависимого усиления инфекции SARS-CoV у макак-резусов, иммунизированных инактивированной вакциной против SARS-CoV. Virol Sin (2018) 33 (2): 201–4. doi: 10.1007 / s12250-018-0009-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Ценг CT, Sbrana E, Iwata-Yoshikawa N, Newman PC, Garron T, Atmar RL, et al. Иммунизация вакцинами против коронавируса SARS приводит к легочной иммунопатологии при заражении вирусом SARS. PLoS One (2012) 7 (4): e35421. doi: 10.1371 / journal.pone.0035421

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Medina LO, To A, Lieberman MM, Wong TAS, Namekar M, Nakano E, et al. Вакцина против вируса Зика на основе рекомбинантных субъединиц эффективна для нечеловеческих приматов. Front Immunol (2018) 9: 2464. doi: 10.3389 / fimmu.2018.02464

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Лерер А.Т., Вонг Т.С., Либерман М.М., Хамфрис Т., Клементс Д.Э., Баккен Р.Р. и др.Рекомбинантные белки эболавируса Заира вызывают мощные гуморальные и клеточные иммунные ответы и защищают мышей от заражения живым вирусом. Вакцина (2018) 36 (22): 3090–100. doi: 10.1016 / j.vaccine.2017.01.068

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. Mahdi Abdel Hamid M, Remarque EJ, van Duivenvoorde LM, van der Werff N, Walraven V, Faber BW и др. Вакцинация Plasmodium knowlesi AMA1, содержащаяся в новой адъювантной ко-вакцине HT, защищает макак-резус от заражения на стадии крови. PLoS One (2011) 6 (5): e20547. doi: 10.1371 / journal.pone.0020547

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Kusi KA, Remarque EJ, Riasat V, Walraven V, Thomas AW, Faber BW, et al. Безопасность и иммуногенность мультиантигенных вакцин на основе AMA1, созданных с CoVaccine HT и Montanide ISA 51 для макак-резусов. Малар J (2011) 10: 182. doi: 10.1186 / 1475-2875-10-182

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

39.Роббиани Д.Ф., Гэблер С., Мюкш Ф., Лоренци Дж.К.С., Ван З., Чо А. и др. Конвергентные ответы антител на SARS-CoV-2 у выздоравливающих людей. Nature (2020) 584 (7821): 437–42. doi: 10.1038 / s41586-020-2456-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Равичандран С., Койл Е.М., Кленов Л., Тан Дж., Граббс Г., Лю С. и др. Сигнатура антител, индуцированная иммуногенами белка SARS-CoV-2 у кроликов. Sci Transl Med (2020) 12 (550): eabc3539. DOI: 10.1126 / scitranslmed.abc3539

CrossRef Полный текст | Google Scholar

41. Nkolola JP, Cheung A, Perry JR, Carter D, Reed S, Schuitemaker H, et al. Сравнение нескольких адъювантов на стабильность и иммуногенность тримера gp140 ВИЧ-1 клады C. Vaccine (2014) 32 (18): 2109–16. doi: 10.1016 / j.vaccine.2014.02.001

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Jaume M, Yip MS, Cheung CY, Leung HL, Li PH, Kien F, et al. Спайк-антитела к коронавирусу против тяжелого острого респираторного синдрома вызывают инфицирование иммунных клеток человека через путь , независимый от pH- и цистеин-протеазы FcgammaR. J Virol (2011) 85 (20): 10582–97. doi: 10.1128 / JVI.00671-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44. Ип М.С., Люнг Х.Л., Ли П.Х., Чунг С.Й., Датри И., Ли Д. и др. Антителозависимое усиление коронавирусной инфекции SARS и ее роль в патогенезе SARS. Hong Kong Med J (2016) 22 (3 Suppl 4): 25–31.

PubMed Аннотация | Google Scholar

45. Грэм Б.С., Хендерсон Г.С., Тан Ю.В., Лу Х, Нойзил К.М., Колли Д.Г.Прайминговая иммунизация определяет характер экспрессии мРНК Т-хелперных цитокинов в легких мышей, зараженных респираторно-синцитиальным вирусом. J Immunol (1993) 151 (4): 2032-40.

PubMed Аннотация | Google Scholar

46. Ким Х.В., Канчола Дж. Г., Брандт С. Д., Пайлес Дж., Чанок Р. М., Дженсен К. и др. Респираторно-синцитиальное вирусное заболевание у младенцев, несмотря на предварительное введение антигенной инактивированной вакцины. Am J Epidemiol (1969) 89 (4): 422–34. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.aje.a120955

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Ли СК, Ву Х, Ян Х, Ма С., Ван Л., Чжан М. и др. Ответы Т-клеток на цельный коронавирус SARS у людей. J Immunol (Балтимор, Мэриленд: 1950) (2008) 181 (8): 5490–500. doi: 10.4049 / jimmunol.181.8.5490

CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Ng OW, Chia A, Tan AT, Jadi RS, Leong HN, Bertoletti A, et al. Ответы Т-клеток памяти на коронавирус SARS сохраняются до 11 лет после заражения. Vaccine (2016) 34 (17): 2008–14. doi: 10.1016 / j.vaccine.2016.02.063

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Chen J, Lau YF, Lamirande EW, Paddock CD, Bartlett JH, Zaki SR, et al. Клеточные иммунные ответы на инфекцию, вызванную коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV), у стареющих мышей BALB / c: CD4 + Т-клетки важны для контроля инфекции SARS-CoV. J Virol (2010) 84 (3): 1289–301. doi: 10.1128 / jvi.01281-09

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50.Чжао Дж., Чжао Дж., Перлман С. Т-клеточные ответы необходимы для защиты от клинических заболеваний и для выведения вируса у мышей, инфицированных коронавирусом с тяжелым острым респираторным синдромом. J Virol (2010) 84 (18): 9318–25. doi: 10.1128 / jvi.01049-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Channappanavar R, Fett C, Zhao J, Meyerholz DK, Perlman S. Вирус-специфические Т-клетки памяти CD8 обеспечивают существенную защиту от смертельной тяжелой инфекции, вызванной коронавирусом острого респираторного синдрома. J Virol (2014) 88 (19): 11034–44. doi: 10.1128 / jvi.01505-14

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, Mateus J, Dan JM, Moderbacher CR, et al. Мишени Т-клеточного ответа на коронавирус SARS-CoV-2 у людей с заболеванием COVID-19 и у людей, не подвергавшихся воздействию. Ячейка (2020) 181 (7): 1489–1501.e1415. doi: 10.1016 / j.cell.2020.05.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

53.Haun BK, Lai CY, Williams CA, Wong TA, Lieberman MM, Pessaint L, et al. Адъювант CoVaccine HT потенцирует устойчивые иммунные ответы на рекомбинантную иммунизацию SARS-CoV-2 Spike S1. bioRxiv (2020). doi: 10.1101 / 2020.07.24.220715

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

r — Надежный двухфакторный дисперсионный анализ в Python

вот мое частное решение этой проблемы. В самом начале первая проблема в R заключается в том, что при импорте фрейма данных вы должны изменить тип столбца алкоголь и пол как.фактор.

в R сценарий будет:

  библиотека (WRS2)
df <- read.csv2 ("https://github.com/lawrence009/dsur/raw/master/data/goggles.csv", header = TRUE, sep = ',')
df [, c ('привлекательность')] <- as.numeric (df [, c ('привлекательность')])
df [, c ('алкоголь')] <- as.factor (df [, c ('алкоголь')])
df [, c ('пол')] <- as.factor (df [, c ('пол')])
t2way (привлекательность ~ пол * алкоголь, данные = df)

В python, правда, я не нашел способа изменить тип данных столбца, но я пришел с этим решением: Сначала вам нужно создать файл.R-файл с именем my_t2way.R, содержащий:

  my_t2way <- function (df1) {
    библиотека (WRS2)
    df <- read.csv2 (df1, header = TRUE, sep = ',')
    df [, c ('привлекательность')] <- as.numeric (df [, c ('привлекательность')])
    df [, c ('алкоголь')] <- as.factor (df [, c ('алкоголь')])
    df [, c ('пол')] <- as.factor (df [, c ('пол')])
    f <- t2way (привлекательность ~ пол * алкоголь, данные = df)
    df1 = data.frame (factor = c ('пол', 'алкоголь', 'пол: алкоголь'),
                     value = c (f $ Qa, f $ Qb, f $ Qab),
                    п.значение = c (f $ A.p.value, f $ B.p.value, f $ AB.p.value))
    возврат (df1)
}

И затем вы можете запустить следующие команды из python

  импортировать панд как pd
импортировать rpy2.robjects как robjects
from rpy2.robjects import pandas2ri # Определение сценария R и загрузка экземпляра в Python
pandas2ri.activate ()

r = robjects.r
r ['source'] ('my_t2way.R') # Загрузка функции, которую мы определили в R.
my_t2way_r = robjects.globalenv ['my_t2way'] # Чтение и обработка данных
df1 = "https: // github.com / lawrence009 / dsur / raw / master / data / goggles.csv "
df_result_r = my_t2way_r (df1)

Конечно, это решение работает только для этого конкретного случая, но я думаю, что его можно легко расширить на другие фреймы данных.

Устойчивый и функциональный иммунитет до 9 месяцев после заражения SARS-CoV-2: продольная когорта из Юго-Восточной Азии

Abstract

Оценка продолжительности гуморального и клеточного иммунитета остается ключом к преодолению нынешней пандемии SARS-CoV-2, особенно в малообученное население в наименее развитых странах.Шестьдесят четыре камбоджийских пациента с лабораторно подтвержденной инфекцией с бессимптомной или легкой / умеренной клинической картиной были оценены на гуморальный иммунный ответ на вирусный спайк-белок и эффекторные функции антител во время острой фазы инфекции и через 6-9 месяцев последующего наблюдения. Были охарактеризованы антиген-специфические В-клетки, CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клетки, и Т-клетки были опрошены на функциональность в позднем выздоровлении. Титры антиспайковых (S) антител со временем снижались, но эффекторные функции, опосредованные S-специфическими антителами, оставались стабильными.S- и нуклеокапсид (N) -специфические В-клетки могут быть обнаружены на поздних этапах выздоровления в активированном компартменте В-клеток памяти и в основном представляют собой IgG ⁺. CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеточный иммунитет поддерживался к S и мембранному (M) белку. Бессимптомная инфекция привела к снижению ADCC и частоты SARS-CoV-2-специфичных CD4 ⁺ Т-клеток в позднем выздоровлении. В то время как анти-S-антитела коррелировали с S-специфическими В-клетками, не было никакой корреляции между Т-клеточным ответом и гуморальным иммунитетом.Следовательно, все аспекты защитного иммунного ответа сохраняются до девяти месяцев после заражения SARS-CoV-2 при отсутствии повторного инфицирования.

Легковой прицеп Крепыш 2 с размерами кузова 2х1,25

Прицеп «Крепыш» (8213 03) 2 ряда бортов, тент 0.6 метра, база ВАЗ R13

Модификации прицепа

Прицеп крепыш

СПЕЦИАЛЬНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИЦЕПА «КРЕПЫШ»

Купить прицеп Крепыш

Прицеп для автомобиля Курганские прицепы Курганский Крепыш 2 / 161163

Прицеп «Крепыш 2» 8213 03 (2000х1260) в Тюмени

Машинка Paw Patrol Мегащенки 2 с Крепышом 6056874

Тент на прицеп крепыш (2,0х1,5) без аэроскоса

Изготовление автотентов на прицеп крепыш из материалов высшего качества по индивидуальным заказам

Более 1501 автотента изготовлено для наших клиентов в числе которых прицеп крепыш

Подбор материалов для автотента прицеп крепыш

Этапы оценки качества изготовленного автотента на прицеп крепыш

Подводя итог, можно сказать, что за рыночную стоимость автотента на прицеп крепыш вы получаете:

Арктос КРЕПЫШ-2

Баллон с лекарственным покрытием для лечения стриктуры уретры: промежуточные результаты исследования ROBUST I

Разработка прочных линкеров на основе 2,2′-бипиридинового лиганда для стабильной иммобилизации молекулярных катализаторов на поверхностях кремния (111)

Вакцина против COVID-19 AZD1222 показала устойчивый иммунный ответ у всех участников исследования фазы I / II

Kasco Marine Robust-Aire Система диффузионной аэрации 2

Описание

границ | Адъювант CoVaccine HT ™ усиливает устойчивый иммунный ответ на рекомбинантную иммунизацию SARS-CoV-2 Spike S1

Введение

Методы

Вакцинация и сбор сыворотки

Серологический иммуноглобулиновый анализ

Тест нейтрализации уменьшения бляшек (PRNT)

Приготовление спленоцитов мыши и анализ FluoroSpot

Статистика

Результаты

Иммунизация мышей с помощью белков SARS-CoV-2 Spike S1

Адъюванты изменяют иммуногенность и специфичность к иммунизации

CoVaccine HT ™ улучшает титры IgG к белкам SARS-CoV-2 и SARS-CoV S1

Повышенное разнообразие подклассов IgG и усиление титров вирусонейтрализующих антител с CoVaccine HT ™

Влияние адъюванта на SARS-CoV-2 S1-специфические ответы IFN-γ

Обсуждение

Заявление о доступности данных

Заявление об этике

Вклад авторов

Финансирование

Конфликт интересов

Благодарности

Ссылки

r — Надежный двухфакторный дисперсионный анализ в Python

Устойчивый и функциональный иммунитет до 9 месяцев после заражения SARS-CoV-2: продольная когорта из Юго-Восточной Азии

Abstract

Добавить комментарий Отменить ответ